霧化吸入滅活草分枝桿菌降低哮喘小鼠核因子κB及細(xì)胞間黏附分子1的表達(dá)*

呂盛秋，李超乾，明莫瑜，羅智熹

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣西南寧 530021)

霧化吸入滅活草分枝桿菌降低哮喘小鼠核因子κB及細(xì)胞間黏附分子1的表達(dá)*

呂盛秋，李超乾△，明莫瑜，羅智熹

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣西南寧 530021)

目的:研究霧化吸入滅活草分枝桿菌對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥，以及哮喘肺組織中核因子κB (NF-κB)、細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)的影響，探討霧化吸入滅活草分枝桿菌防治哮喘的機(jī)制。方法：將24只雄性BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組8只:正常對(duì)照組(A)、哮喘模型組(B)和治療組(C)。以雞卵清蛋白致敏制造小鼠支氣管哮喘模型。C組在激發(fā)后給予霧化吸入滅活草分枝桿菌治療5 d，每天1次。各組動(dòng)物處死后提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)。進(jìn)行病理HE染色及AB-PAS染色觀察氣道炎癥浸潤(rùn)及黏液分泌情況，并行病理半定量分析。對(duì)BALF中炎癥細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肺組織NF-κB、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:治療組嗜酸性粒細(xì)胞比例低于模型組(P ＜0.05)，氣道炎癥病變及黏液分泌情況較模型組減輕(P＜0.05，P＜0.01)。哮喘模型組的肺組織中NF-κB mRNA含量與正常組相比顯著升高(P＜0.01)，而治療組肺組織中的NF-κB mRNA含量明顯低于模型組(P＜0.05);模型組的ICAM-1 mRNA水平比正常組高(P＜0.05)，但治療后明顯降低(P＜0.01);VCAM-1的mRNA水平在各組間無顯著差異。相關(guān)性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小鼠肺組織中VCAM-1的mRNA與ICAM-1的mRNA呈明顯正相關(guān)(r=0.84，P ＜0.01)，但NF-κB的mRNA與ICAM-1的mRNA、VCAM-1的mRNA無明顯相關(guān)性(均P＞0.05)。結(jié)論:霧化吸入草分枝桿菌對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥及黏液分泌有抑制作用;NF-κB參與哮喘發(fā)病過程，霧化吸入滅活草分枝桿菌降低哮喘小鼠的NF-κB水平。同時(shí)霧化吸入滅活草分枝桿菌可降低黏附分子尤其是ICAM-1的表達(dá)，是其控制炎癥的另一個(gè)重要機(jī)制。

哮喘;滅活草分枝桿菌;NF-κB;細(xì)胞黏附分子

支氣管哮喘是全球一個(gè)主要衛(wèi)生問題。隨著它的發(fā)病率和死亡率上升，糖皮質(zhì)激素治療支氣管哮喘應(yīng)用日益廣泛，經(jīng)常引起許多副作用，有必要開發(fā)具有更高療效和更少副作用的新藥。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)滅活草分枝桿菌作為免疫調(diào)節(jié)劑能減輕支氣管哮喘氣道炎癥，霧化吸入滅活草分枝桿菌可能作為一種方便安全、副作用少的支氣管哮喘治療方法［1］。而關(guān)于霧化吸入滅活草分枝桿菌治療支氣管哮喘的機(jī)制的研究仍在進(jìn)行。

核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一種調(diào)控基因表達(dá)的DNA結(jié)合蛋白，它位于Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)下游信號(hào)通路的樞紐位置，可通過調(diào)控細(xì)胞因子和黏附分子基因的表達(dá)，參與機(jī)體的各種炎癥和免疫反應(yīng)［2］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)TLR4/NF-κB可能參與哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重構(gòu)［3］，滅活草分枝桿菌可通過上調(diào)TLR2和TLR4的表達(dá)調(diào)節(jié)支氣管哮喘的免疫失衡［4-5］。由此我們猜測(cè)位于下游的NF-κB亦會(huì)參與滅活草分枝桿菌治療支氣管哮喘的過程。而細(xì)胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答反應(yīng)，是被研究最多的黏附分子。有報(bào)道稱炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)主要是通過黏附分子的表達(dá)使白細(xì)胞向上皮細(xì)胞黏附增強(qiáng)所致［6］。肺氣道上皮黏附分子如ICAM-1和VCAM-1上調(diào)常伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，是各種氣道炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵［7］。黏附分子的表達(dá)與NF-κB的活化有何關(guān)系?霧化吸入滅活草分枝桿菌是否可以降低哮喘肺組織中黏附分子的表達(dá)?是否通過NF-κB信號(hào)通路來降低哮喘小鼠肺組織中的ICAM-1和VCAM-1從而減輕哮喘炎癥及黏液分泌?本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測(cè)哮喘小鼠肺組織中NF-κB、ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)及霧化吸入滅活草分枝桿菌對(duì)其表達(dá)的影響，為闡明霧化吸入滅活草分枝桿菌治療支氣管哮喘的作用機(jī)制提供依據(jù)。

材料和方法

1 主要試劑與儀器

雞卵清蛋白(ovalbumin，OVA;Sigma)，氫氧化鋁粉(分析純，成都科龍化工試劑廠)，草分枝桿菌F. U.36注射液(成都金星健康藥業(yè)有限公司)，瑞氏染色液，病理圖像分析系統(tǒng)(Leica)，Trizol Reagent(Invitrogen)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen)，NF-κB、ICAM-1、VCAM-1和β-actin引物(上海生工公司)，SYBR qPCR Mix(Toyobo)，real-time PCR儀(Applied Biosystems)，NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)(Nano-Drop)，高速低溫離心機(jī)(Eppendorf 5810R)，超聲霧化器WH-2000(廣東粵華醫(yī)療器械廠)，自制霧化吸入箱。1%戊巴比妥鈉、10%甲醛、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffered solution，PBS)等。

2 方法

2.1 小鼠支氣管哮喘模型制作及分組健康雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，鼠齡6～8周，體重18～22 g，隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(A組)、哮喘模型組(B組)和治療組(C組)，每組8只。模型組和治療組均給予OVA制作小鼠哮喘模型;治療組在造模成功后給予滅活草分枝桿菌霧化吸入，具體方法是:用OVA行腹腔注射致敏和霧化吸入激發(fā)建立哮喘模型，參照文獻(xiàn)［8］略有改進(jìn)，每只小鼠腹腔注射25 μg OVA和1 mg氫氧化鋁(混合于0.2 mL PBS中)，于第1天、第8天和第15天分別注射。OVA致敏后，于第22天開始激發(fā)，將小鼠置于自制20 cm×30 cm×20 cm密閉容器中，給予2%OVA·PBS 20 mL霧化吸入刺激，每天1次，每次20 min，連續(xù)7 d。正常對(duì)照組以PBS代替致敏原注射和霧吸刺激。治療組在激發(fā)第7天后給予滅活草分枝桿菌溶液霧化吸入治療，每天1次，治療5 d。各組在末次激發(fā)后24 h內(nèi)處死小鼠并取材。

2.2 標(biāo)本收集小鼠于激發(fā)后24 h經(jīng)眼球取血放血后行氣管內(nèi)插管，仰臥固定，用氣管留置針行氣管插管，縫線固定，以每次4℃0.5 mL PBS灌洗，緩慢注入肺內(nèi)，輕柔回吸收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，反復(fù)注入、回抽3次，回收率＞80%，BALF用EP管回收于冰上備用。打開胸腔，分離支氣管肺組織，右肺迅速置入液氮冷凍后，保存在-80℃冰箱用于real-time PCR檢測(cè)。左肺通過氣管插管灌注10%甲醛使肺膨脹進(jìn)行內(nèi)固定，取出左肺組織浸入10%甲醛固定，24 h后漂洗、乙醇梯度脫水，經(jīng)石蠟包埋，沿左肺門斜形平行切取肺組織切片，切片厚4 μm，行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)及阿辛藍(lán)(Alcian blue，AB)-過碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff，PAS)染色。

2.3 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)將BALF 4℃、1 500 r/min離心10 min，棄上清，取沉淀涂片行瑞氏-姬姆薩法染色，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)特征和染色特點(diǎn)油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)炎癥細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。

2.4 病理組織學(xué)檢查和評(píng)分肺組織HE和PAS染色，光鏡下觀察大體組織病變和氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道黏膜充血水腫情況、氣道杯狀細(xì)胞及氣道黏液分泌情況。參照文獻(xiàn)［9］的方法確定支氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度和計(jì)數(shù)杯狀細(xì)胞著色、黏液分泌情況，進(jìn)行病理半定量分析。評(píng)分如下:氣道周圍無炎癥細(xì)胞(0分);少許炎癥細(xì)胞(1分);較多分布不均的炎癥細(xì)胞(2分);大量分布較均勻炎癥細(xì)胞，少見聚集成團(tuán)(3分);大量炎癥細(xì)胞聚集成團(tuán)(4分)。氣道上皮無杯狀細(xì)胞(0分);輕度上皮著色，杯狀細(xì)胞＜25%(1分);中度上皮著色，杯狀細(xì)胞25%～50%(2分);重度上皮著色，杯狀細(xì)胞50%～75%(3 分);上皮著色成團(tuán)，杯狀細(xì)胞＞75%(4分)。

2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)NF-κB、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表達(dá)采用Trizol試劑提取肺組織總RNA，NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)檢測(cè)濃度及A260/A280比值。按逆轉(zhuǎn)錄盒操作說明，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA，-20℃保存。而后取2 μL cDNA作為反應(yīng)模板，用SYBR Green核酸染料進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，β-actin為內(nèi)參照。β-actin上游引物5＇-AATTCCATCATGAAGTGTGA-3＇，下游引物5＇-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3＇，擴(kuò)增產(chǎn)物200 bp;NF-κB上游引物5＇-TCCGGGAGCCTCTAGTGAGAA-3＇，下游引物5＇-TCCATTTGTGACCAACTGAACGA-3＇，擴(kuò)增產(chǎn)物103 bp;ICAM-1上游引物5＇-AACTGTGGCACCGTGCAGTC-3＇，下游引物5＇-AGGGTGAGGTCCTTGCCTACTTG-3＇，擴(kuò)增產(chǎn)物116 bp;VCAM-1上游引物5＇-GCCACCCTCACCTTAATTGCTATG-3＇，下游引物5＇-TGTGCAGCCACCTGAGATCC-3＇，擴(kuò)增產(chǎn)物158 bp。PCR反應(yīng)條件:β-actin(95℃30 s，95℃5 s，60℃31 s，40個(gè)循環(huán));NF-κB(95℃30 s，95℃5 s，60℃31 s，40個(gè)循環(huán));ICAM-1(95℃30 s，95℃5 s，60 ℃31 s，40個(gè)循環(huán));VCAM-1(95℃30 s，95℃5 s，62℃31 s，40個(gè)循環(huán))。反應(yīng)結(jié)束后，記錄每個(gè)樣品管中的熒光強(qiáng)度增加到熒光閾值所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(Ct)。以β-actin為內(nèi)參照，采用相對(duì)定量方法對(duì)所有樣本進(jìn)行歸一化處理，計(jì)算目的基因mRNA的相對(duì)含量(目的基因mRNA/β-actin mRNA)，再進(jìn)行各組樣品間相對(duì)量的比較。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，采用SPSS 16.0軟件分析。用One-way ANOVA比較組間差異，用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。病理半定量結(jié)果采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis檢驗(yàn))。采用Pearson或Spearmen相關(guān)性檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 動(dòng)物的哮喘癥狀表現(xiàn)

模型組小鼠在霧化激發(fā)時(shí)，出現(xiàn)躁動(dòng)不安、抓耳撓腮、前肢短縮、打噴嚏、呼吸急促，甚至大小便失禁及腹肌強(qiáng)直等哮喘反應(yīng)。正常對(duì)照組小鼠行為無以上反應(yīng)，表現(xiàn)正常。

2 BALF中的細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

模型組BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞比例增高，與正常對(duì)照組比較，差異顯著(均P＜0.01);治療組細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞比例較哮喘模型組降低，差異顯著(P＜0.01或P＜0.05)，見表1。

表1 各組支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)Table 1.Cell counts in BALF of every group(Mean±SEM.n=8)

3 支氣管肺組織病理觀察

肺組織HE染色以及PAS染色可見，正常對(duì)照組氣道上皮黏膜完整，纖毛排列整齊，基底膜及平滑肌層較薄，肺小血管內(nèi)皮光滑，血管、氣道周圍無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，杯狀細(xì)胞少見，無黏液形成，見圖1A1～2。哮喘組氣道上皮細(xì)胞腫脹肥大，上皮不完整，黏膜皺襞增多，纖毛排列紊亂，甚至可見支氣管黏膜斷裂;細(xì)支氣管及血管周圍、肺泡腔、肺泡隔內(nèi)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞為主，肺泡壁增厚，充血水腫，黏膜基底層明顯增厚，平滑肌肥大增生。PAS染色可見氣道上皮杯狀細(xì)胞增生肥大，并有大量黏液形成，可見黏液栓，上皮脫落不完整，見圖1B1～2。治療組炎癥浸潤(rùn)減輕，支氣管管腔通暢，黏膜層完整，上皮細(xì)胞排列正常，PAS染色見杯狀細(xì)胞及管腔內(nèi)黏液分泌明顯減少，見圖1C1～2。氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度及黏液分泌情況病理評(píng)分半定量結(jié)果經(jīng)非參數(shù)秩和檢驗(yàn)示:模型組與對(duì)照組比較，差異顯著(均P＜0.01)。治療組與模型組比較，差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，見表2。

4 肺組織NF-κB、ICAM-1及VCAM-1 mRNA的表達(dá)

治療組肺組織NF-κB和ICAM-1 mRNA表達(dá)水平較哮喘模型組低，差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，治療組肺組織VCAM-1 mRNA的表達(dá)水平較哮喘模型組低，但無顯著差異(P＞0.05)，見圖2。

Figure 1.Histological study of the lung tissues(HE and ABPAS staining，×400).A1～2:normal group;B1～2:OVA asthma model group;C1～2:inactivated Mycobacterium phlei-treated group.圖1 小鼠肺組織HE染色和PAS染色

表2 氣道炎癥浸潤(rùn)及黏液分泌病理半定量評(píng)分Table 2.Pathological semi-quantitative scores of airway inflammation and mucus production(n=8)

Figure 2.The mRNA expression of ICAM-1，VCAM-1 and NF-κB in the lung tissues detected by real-time PCR.Mean±SEM.n=8.*P＜0.05 vs normal group;#P＜0.05，##P＜0.01 vs OVA group.圖2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定ICAM-1、VCAM-1和NF-κB mRNA的表達(dá)

相關(guān)性檢驗(yàn):(1)NF-κB分別與炎癥病理半定量分?jǐn)?shù)、黏液分泌半定量分?jǐn)?shù)呈顯著正相關(guān)(rs= 0.62，P＜0.01;rs=0.76，P＜0.01)，NF-κB mRNA還與BALF中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分比呈顯著正相關(guān)(r=0.70，P＜0.01);(2)NF-κB、ICAM-1與VCAM-1分別與BALF細(xì)胞總數(shù)呈正相關(guān)(r=0.72，P＜0.01;r=0.55，P＜0.05;r=0.56，P＜0.05); (3)NF-κB分別與ICAM-1、VCAM-1無明顯相關(guān)性(均P＞0.05)，ICAM-1與VCAM-1呈顯著正相關(guān)(r=0.84，P＜0.01)。

討論

哮喘是由多種炎癥細(xì)胞、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)參與的氣道炎癥性疾病。ICAM-1和VCAM-1均屬于免疫球蛋白超家族黏附分子，對(duì)過敏性炎癥的嗜酸性粒細(xì)胞積聚有重要的促進(jìn)作用［10］。草分枝桿菌是一種免疫調(diào)節(jié)劑，吸入滅活草分枝桿菌在哮喘防治中具有抗炎作用［4］，本實(shí)驗(yàn)中霧化吸入滅活草分枝桿菌有效降低哮喘導(dǎo)致的小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)升高并減輕其氣道炎癥浸潤(rùn)程度及黏液分泌。再次證明霧化吸入滅活草分枝桿菌成功減輕哮喘小鼠的氣道炎癥，據(jù)此我們猜測(cè)其調(diào)節(jié)黏附分子的表達(dá)的能力可能是控制炎癥的一個(gè)重要的機(jī)制。

眾所周知，白細(xì)胞的遷移高度依賴內(nèi)皮細(xì)胞所表達(dá)的黏附分子的結(jié)構(gòu)，另外部分白細(xì)胞表現(xiàn)出特異的組織靶向也取決于組織表面表達(dá)黏附分子的結(jié)構(gòu)［11］。Andersson等［12］發(fā)現(xiàn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增加具有促進(jìn)炎癥細(xì)胞向肺組織遷移的潛能。另外，ICAM-1在內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞相互作用、白細(xì)胞向炎癥部位遷移以及抗原呈遞細(xì)胞間的相互作用中至關(guān)重要，它可作為抗原呈遞細(xì)胞刺激T淋巴細(xì)胞活化，還可作為細(xì)菌性發(fā)病機(jī)制的輔助因子［13］。Lee等［7］的研究也發(fā)現(xiàn)在哮喘小鼠中ICAM-1和VCAM-1水平升高，并調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞遷移。體內(nèi)外的研究證實(shí)肺泡上皮ICAM-1的表達(dá)增加可以提高中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的黏附，并且對(duì)過敏性炎癥的嗜酸性粒細(xì)胞積聚有重要的促進(jìn)作用［10，14］，可見細(xì)胞黏附分子是肺部炎癥疾病募集白細(xì)胞的重要介質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)中哮喘組肺組織的黏附分子水平特別是ICAM-1明顯升高，并且ICAM-1、VCAM-1與BALF中細(xì)胞總數(shù)呈正相關(guān)，黏附分子積極參與支氣管哮喘氣道炎癥發(fā)生過程，可能有促進(jìn)炎癥的作用。而霧化吸入滅活草分枝桿菌治療后肺組織的黏附分子特別是ICAM-1水平顯著降低，因此霧化吸入滅活草分枝桿菌可通過降低黏附分子尤其是ICAM-1的表達(dá)來參與控制炎癥，是其控制炎癥的一個(gè)重要機(jī)制。但是，使支氣管肺組織黏附分子上調(diào)的機(jī)制又是什么呢?

近年發(fā)現(xiàn)，NF-κB在哮喘氣道炎癥中的作用亦十分關(guān)鍵。在哮喘的氣道炎癥反應(yīng)中，IL-1β、TNF-α、IL-8、單核細(xì)胞趨化蛋白1、ICAM-1、粒-單細(xì)胞集落刺激因子和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶等眾多細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)在基因轉(zhuǎn)錄水平上均受NF-κB調(diào)控，NF-κB活化后這些細(xì)胞因子和介質(zhì)的基因表達(dá)和蛋白分泌均增高［15］。目前研究證實(shí)，在哮喘患者和哮喘的動(dòng)物模型中，肺組織和氣道上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞的NF-κB活性增高。本實(shí)驗(yàn)哮喘小鼠肺組織中的NF-κB水平較正常小鼠明顯升高，經(jīng)滅活草分枝桿菌治療后NF-κB水平顯著下降，哮喘炎癥減輕，哮喘小鼠肺組織中NF-κB mRNA與嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分比、氣道炎癥浸潤(rùn)及黏液分泌呈顯著正相關(guān)，NF-κB的活化可能促進(jìn)哮喘小鼠氣道炎癥。滅活草分枝桿菌治療哮喘的機(jī)制與降低NF-κB水平有關(guān)。NF-κB的水平或許可以作為評(píng)判疾病嚴(yán)重程度或評(píng)估療效的一個(gè)替代指標(biāo)。

NF-κB信號(hào)通路參與哮喘中氣道平滑肌細(xì)胞增殖［16］。同時(shí)，在細(xì)胞水平的研究發(fā)現(xiàn)通過抑制MAPKs和Akt氧化磷酸化，抑制NF-κB活化，從而抑制TNF-α誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1的產(chǎn)生，減少單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞向支氣管上皮細(xì)胞黏附，說明氣道炎癥中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)水平與NF-κB/MAPK/Akt依賴性信號(hào)通路有關(guān)［17-18］。之前我們猜測(cè)霧化吸入滅活草分枝桿菌可通過NF-κB信號(hào)途徑降低黏附分子表達(dá)從而減輕哮喘炎癥，而本實(shí)驗(yàn)卻發(fā)現(xiàn)NF-κB與ICAM-1、VCAM-1均無明顯相關(guān)性。原因可能是除NF-κB外，還存在其它轉(zhuǎn)錄因子或信號(hào)途徑如Sp1、GATA、PKC、STAT1等相關(guān)機(jī)制的參與影響哮喘中黏附分子的表達(dá)，以致滅活草分枝桿菌不能通過NF-κB信號(hào)途徑完全抑制哮喘導(dǎo)致的黏附分子的升高，也有可能是各信號(hào)途徑相關(guān)機(jī)制在哮喘不同時(shí)期對(duì)其影響程度有所差異，此間機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

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Inhalation of inactivated Mycobacterium phlei down-regulates expression of nuclear factor-kappa B and intercellular adhesion molecule-1 in asthmatic mice

Lü Sheng-qiu，LI Chao-qian，MING Mo-yu，LUO Zhi-xi
(Department of Respiratory Medicine，The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China.E-mail:2534776680@qq.com)

AIM:To investigate the effect of inhalation of inactivated Mycobacte-rium phlei on the expression of nuclear factor-kappa B(NF-κB)，intercellular adhesion molecule(ICAM)-1 and vascular cell adhesion molecule (VCAM)-1 in the lung tissues of asthmatic mice.METHODS:Male BALB/c mice(n=24)were randomly divided into normal control group(A)，asthmatic model group(B)，and inactivated Mycobacterium phlei inhalation group(C).Asthmatic model was made by inhalation of chicken ovalbumin.The mice in group C were treated with inactivated Mycobacterium phlei for 5 d.The lung tissues and bronchoalveolar lavage fluid(BALF)were harvested.HE and AB-PAS staining were used to measure the lung inflammation and mucus production.The inflammatory cells in the BALF were counted.The mRNA expression of NF-κB，ICAM-1 and VCAM-1 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR.RESULTS:Mycobacterium phlei treatment alleviated lung inflammation，attenuated mucus production，and reduced the percentage of eosinophils in the BALF.The mRNA levels of NF-κB and ICAM-1 were significantly decreased after treated with Mycobacterium phlei.However，no significant difference of VCAM-1 mRNA expression was found before and after treatment.The cor-relation between NF-κB mRNA and ICAM-1 mRNA，and between NF-κB mRNA and VCAM-1 mRNA was not found.CONCLUSION:Inhalation of inactivated Mycobacterium phlei attenuates asthmatic airway inflammation.NF-κB participates in the pathogenesis of asthma.NF-κB signal pathway may be associated with the therapeutic mechanism.Another important mechanism is the reduction of adhesion molecule expression.

Asthma;Inactivated Mycobacterium phlei;NF-kappa B;Cell adhesion molecules

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2014.02.025

1000-4718(2014)02-0333-06

2013-09-14

2013-11-26

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81360007)

△通訊作者Tel:0771-5358397;E-mail:2534776680@qq.com