高效液相色譜梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定沉香理氣丸中4種內(nèi)酯含量

唐英玲

(1.江西省醫(yī)藥學(xué)校,南昌 330200;2.江西省醫(yī)藥技師學(xué)院,南昌 330200)

高效液相色譜梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定沉香理氣丸中4種內(nèi)酯含量

唐英玲1,2

(1.江西省醫(yī)藥學(xué)校,南昌 330200;2.江西省醫(yī)藥技師學(xué)院,南昌 330200)

目的 采用高效液相色譜梯度洗脫法測(cè)定沉香理氣丸中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量。方法Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動(dòng)相B為水;體積流量:0.7 mL·min-1;檢測(cè)波長222 nm。結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別在0.013 5～0.270 0 μg(r=0.999 2)、0.010 3～0.206 0 μg(r=0.999 4)、0.181 6～3.632 0 μg(r=0.999 9)、0.120 2～2.404 0 μg(r= 0.999 8)范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率分別為97.98%,96.82%,98.56%,98.57%,RSD (n=6)分別為1.41%,1.37%,1.01%,0.59%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好,可作為沉香理氣丸中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量控制方法。

沉香理氣丸;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ;木香烴內(nèi)酯;去氫木香內(nèi)酯

筆者采用高效液相梯度洗脫法對(duì)沉香理氣丸中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定方法研究,以期為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(G1315B可變波長檢測(cè)器,安捷倫科技公司)。

1.2 試藥 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品(含量:98.0%,批號(hào): 73069-13-3)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品(含量:98.0%,批號(hào): 73030-71-4)購于上海同田生物技術(shù)股份有限公司;木香烴內(nèi)酯對(duì)照品(含量:99.5%,批號(hào):111524-201208,用前置五氧化二磷干燥器中減壓干燥12 h)和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品(含量:99.8%,批號(hào):111525-201209,用前置五氧化二磷干燥器中減壓干燥12 h)均來源于中國食品藥品檢定研究院,沉香理氣丸(批號(hào):131203, 131206,131209,規(guī)格:每瓶裝60 g)購于成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司;磷酸(廣州化學(xué)試劑二廠,分析純,批號(hào):130521),甲醇(天津市康科德科技有限公司,色譜純,批號(hào):20130714)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil C18色譜柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm);體積流量:0.7 mL·min-1;流動(dòng)相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動(dòng)相B為水,梯度洗脫(0～15 min,75.0%A;～25 min,75.0%→50.0%A;～40 min,50.0%A);檢測(cè)波長222 nm[1-4];體積流量0.7 mL·min-1。此系統(tǒng)條件下所測(cè)4個(gè)組分與其他組分分離效果良好,理論板數(shù)按白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯計(jì)均不低于3 000,分離度均>2。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品各適量,精密稱定,分別加85%甲醇制成混合對(duì)照品溶液(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.013 5 mg·mL-1,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ為0.010 3 mg·mL-1,木香烴內(nèi)酯為0.181 6 mg·mL-1,去氫木香內(nèi)酯為0.120 2 mg·mL-1)。

2.2.2 供試品溶液的配制 取本品適量,研細(xì),取約4.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶,加85%甲醇50 mL,稱定質(zhì)量,超聲波(功率300 W,頻率50 kHz)超聲處理50 min,放冷,再稱定質(zhì)量,用85%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 按沉香理氣丸處方比例稱取除白術(shù)的其余藥味和除木香的其余藥味各1份,按沉香理氣丸的生產(chǎn)工藝分別制成缺白術(shù)的陰性樣品和缺木香的陰性樣品,按照上述供試品溶液的配制方法制成缺白術(shù)的陰性對(duì)照溶液和缺木香的陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取供試品溶液、混合對(duì)照品溶液、缺白術(shù)的陰性對(duì)照溶液及缺木香的陰性對(duì)照溶液10 μL,按上述方法測(cè)定,結(jié)果為:在與白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處,供試品溶液色譜圖中有吸收峰,而陰性對(duì)照色譜圖中未顯吸收峰。見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液1.0,5.0,10.0,15.0,20.0 μL,注入色譜儀中,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積(Y)與進(jìn)樣量(X),得回歸方程,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ:Y=1.648 3×106X+210.6,r=0.999 2;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ:Y=1.197 6×106X-153.4,r=0.999 4;木香烴內(nèi)酯:Y= 3.214 8×106X+621.7,r=0.999 9;去氫木香內(nèi)酯:Y= 2.682 4×106X+394.1,r=0.999 8。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別在0.013 5～0.270 0 μg、0.010 3～0.206 0 μg、0.181 6～3.632 0 μg、0.120 2～2.404 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)混合對(duì)照品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定,記錄白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯峰面積,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的RSD分別為0.83%,0.91%,0.29%和0.43%。結(jié)果表明,儀器具有良好精密度。

2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取同一批樣品6份,按“2.2.2”項(xiàng)供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,依法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算含量,求得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的RSD分別為0.73%,0.84%,0.33%和0.39%。結(jié)果表明,本法測(cè)定重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液,在室溫下放置0,2,4,8,12,24 h后,每次進(jìn)樣10 μL,測(cè)定其峰面積值,求得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的RSD分別為0.95%,0.68%,0.32%和0.47%。結(jié)果表明,供試品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的同一批沉香理氣丸(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.176 mg·g-1,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ為0.132 mg·g-1,木香烴內(nèi)酯為2.26 mg·g-1,去氫木香內(nèi)酯為1.52 mg·g-1)適量,研細(xì),取約2.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶,分別精密加入混合對(duì)照品溶液25 mL、85%甲醇25 mL,按“2.2.2”項(xiàng)供試品溶液的配制方法制備加樣供試品試液。按上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算各組分回收率,結(jié)果見表1。

2.4 樣品測(cè)定 取3批樣品,按“2.2.2”項(xiàng)供試品制備方法,按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定本品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量,結(jié)果見表2。

A.對(duì)照品;B.樣品;C.缺白術(shù)陰性對(duì)照品;D.缺木香陰性對(duì)照品;1.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ;2.白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ;3.木香烴內(nèi)酯;4.去氫木香內(nèi)酯圖1 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的HPLC圖

{L-End}

表1 4種內(nèi)酯加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表1

表2 3批樣品中4種成分含量測(cè)定結(jié)果 mg·g-1,±s,n=3

表2 3批樣品中4種成分含量測(cè)定結(jié)果 mg·g-1,±s,n=3

批號(hào)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ木香烴內(nèi)酯去氫木香內(nèi)酯1312030.176±0.0020.132±0.0012.26±0.0171.520 0±0.010 0 1312060.189±0.0030.145±0.0012.35±0.0211.590 0±0.015 3 1312090.173±0.0020.135±0.0012.25±0.0021.480 0±0.005 8

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 分別以乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液、甲醇-水、甲醇-乙腈(2∶1)與水為流動(dòng)相不同比例進(jìn)行梯度洗脫[5-10],結(jié)果以乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ分離效果良好,而木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯未達(dá)到基線分離;以甲醇-水為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯與其他色譜峰能達(dá)到基線分離,但白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。而甲醇-乙腈(2∶1)與水為流動(dòng)相按照文中比例梯度洗脫時(shí)四組分均能達(dá)到基線分離。故選用甲醇-乙腈(2∶1)與水按照本文中比例為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。

3.2 供試品提取時(shí)間的選擇 供試品制備分別采用超聲(300 W,50 kHz)40,50,60 min進(jìn)行處理,以確定最佳提取時(shí)間。結(jié)果供試品超聲40 min明顯低于超聲50和60 min,而超聲60和50 min差異不大,故選擇超聲波(300 W,50 kHz)超聲50 min作為供試品制備的提取時(shí)間。

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DOI 10.3870/yydb.2014.11.032

R286;R927.1

B

1004-0781(2014)11-1517-03

2014-01-10

2014-02-21

唐英玲(1964-),女,江西南昌人,副教授,碩士,主要從事醫(yī)藥學(xué)教學(xué)、教育管理及思想教育工作。電話: 0791-85984007,E-mail:tangyinglinglunwen@163.com。