5，6-二羥乙基黃芩苷對(duì)腦缺血大鼠腦組織能量代謝的影響

華會(huì)明，曹雪松，顧少莉，遲天燕，紀(jì)雪飛，鄒莉波

（沈陽藥科大學(xué)1.中藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室、2.生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧沈陽 110016）

研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷對(duì)腦缺血損傷有較好的保護(hù)作用［1］，但其水溶性較差，還未見注射劑上市。5，6-二羥乙基黃芩苷（5，6-dihydroxyethyl baicalin）由黃芩苷前體制備而成，具有較好的水溶性，有望開發(fā)成為注射制劑，以解決腦卒中患者吞咽困難的問題（Fig 1）。本文旨在研究大鼠全腦缺血/再灌注時(shí)，5，6-二羥乙基黃芩苷對(duì)腦組織能量代謝的影響。選用了夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并降壓法制備全腦缺血模型，該模型具有慢性、持續(xù)性的特點(diǎn)，能夠更好的模擬臨床上休克、心功能不全、腦血管嚴(yán)重狹窄等引起的腦組織缺血損傷。

1 材料

1.1 主要試劑5，6-二羥乙基黃芩苷，沈陽藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室提供（含量：90%）。丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、總ATPase、Na＋，K＋-ATPase、Ca2＋，Mg2＋-ATPase試劑盒，南京建成生物工程研究所。

Fig 1 Chem ical structure of 5，6-dihydroxyethyl baicalin

1.2 動(dòng)物健康♂Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220 g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（軍）2007-004。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及模型制備將60只大鼠，隨機(jī)分為6組，即假手術(shù)組、模型組、尼莫地平（0.36 mg·kg－1）組、5，6-二羥乙基黃芩苷低（45 mg·kg－1）、中（90 mg·kg－1）、高（180 mg·kg－1）劑量組，每組10只動(dòng)物。采用夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并降壓法制備大鼠腦缺血/再灌注損傷模型［2－3］。3.5%水合氯醛（350 mg·kg－1）腹腔注射麻醉后分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，腹腔注射硝普鈉（2.5 mg·kg－1），立即夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，10 min后再灌注10 min，重復(fù)1次，縫合傷口，放入嬰兒箱內(nèi)，待其蘇醒后正常飼養(yǎng)。假手術(shù)組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈。治療組分別于第2次再灌注后3 h首次iv給藥，24 h后第2次給藥，以后每天給藥1次，共給藥7次。

2.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)末次給藥24 h后快速斷頭取腦，剝離雙側(cè)海馬及大腦皮質(zhì)，－80℃低溫冰箱保存。進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)時(shí)，以重量 ∶體積比1∶9加入4℃生理鹽水，制成10%的腦組織勻漿，3 000 r·min－1低溫離心 15 min，取上清液，按試劑盒說明，用722分光光度計(jì)測(cè)定大鼠海馬及大腦皮質(zhì)中總 ATP酶、Na＋，K＋-ATP酶、Ca2＋，Mg2＋-ATP酶、SOD、CAT活性以及MDA和NO含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以±s表示，SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用F檢驗(yàn)，兩兩比較用LSD法進(jìn)行。

3 結(jié)果

3.1 5，6-二羥乙基黃芩苷對(duì)腦缺血/再灌注損傷大鼠海馬、大腦皮層中總 ATP酶、Na＋，K＋-ATP酶、Ca2＋，M g2＋-ATP酶、SOD及CAT活性的影響 見Tab 1，2。

3．2 5，6-二羥乙基黃芩苷對(duì)腦缺血/再灌注損傷大鼠海馬、大腦皮層中MDA、NO含量的影響 見Tab 3。

4 討論

腦缺血損傷是一個(gè)多環(huán)節(jié)的病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程，首先涉及的是能量代謝障礙。而大腦能量代謝的水平可以通過腦組織中各種ATP酶的活性來反映；MDA和NO的含量能夠反映體內(nèi)氧自由基的生成水平，間接反映細(xì)胞膜的損傷程度［4］；SOD和CAT在組織中的活性則常被作為清除氧自由基能力的主要指標(biāo)［5］。研究結(jié)果顯示：5，6-二羥乙基黃芩苷能明顯提高腦缺血/再灌注大鼠海馬及大腦皮層組織中總ATP酶、Ca2＋，Mg2＋-ATP酶、Na＋，K＋-ATP酶、SOD、CAT的活性，同時(shí)減少M(fèi)DA和NO的含量。提示5，6-二羥乙基黃芩苷有抗自由基過氧化和提高缺血腦組織中各種能量代謝酶活性的作用。

Tab 1 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on activities of T-ATPase，Na＋，K＋-ATPase，Ca2＋，M g2＋－ATPase，SOD and CAT in hippocampus of rats with cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

Tab 1 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on activities of T-ATPase，Na＋，K＋-ATPase，Ca2＋，M g2＋－ATPase，SOD and CAT in hippocampus of rats with cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

＃P＜0．05，＃＃P＜0.01 vs sham；*P＜0.05，**P＜0．01 vs model

Group Dose/mg·kg－1 ATPase/kU·g－1 Na＋，K＋-ATPase/kU·g－1 Ca2＋，Mg2＋-ATPase/kU·g－1 SOD/kU·g－1 CAT/kU·g－1±17.43 0.90±0.26 Model － 15.54±2.86＃＃ 6.27±2.17＃ 1.70±0.53＃＃ 43.31±6.12＃ 0.47±0.13＃＃5，6-dihydroxyethyl baicalin 45 18.57±7.46 7.69±2.14 2.17±0.75 51.71±12.12 0.63±0.28 90 18.63±3.84 7.74±2.42 2.40±0.41* 53.72±8.60* 0.70±0.34 180 21.27±5.96* 8.16±3.45 2.57±0.45** 58.55±13.76** 0.88±0.48*Nimodipine 0.36 21.26±5.14* 8.83±2.59* 2.73±0.75** 56.38±15.82* 0.86±0.31 Sham － 21.37±2.77 10.54±3.96 2.92±0.52 58.74**

Tab 2 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on activities of T-ATPase，Na＋，K＋-ATPase，Ca2＋，M g2＋-ATPase，SOD and CAT in cerebral cortex of ratswith cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

Tab 2 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on activities of T-ATPase，Na＋，K＋-ATPase，Ca2＋，M g2＋-ATPase，SOD and CAT in cerebral cortex of ratswith cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

＃P＜0．05，＃＃P＜0.01 vs sham；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model

Group Dose/mg·kg－1 ATPase/kU·g－1 Na＋，K＋-ATPase/kU·g－1 Ca2＋，Mg2＋-ATPase/kU·g－1 SOD/kU·g－1 CAT/kU·g－1 14.17 1.40±0.62 Model － 12.62±2.43＃＃ 4.56±1.37＃ 1.77±1.02＃＃ 37.60±5.07＃＃ 0.67±0.65＃5，6-dihydroxyethyl baicalin 45 14.06±5.20 4.89±2.01 1.24±0.82 45.50±9.72 0.52±0.46 90 14.08±1.56 5.47±2.24 1.24±0.64 48.35±12.5* 0.79±0.45 180 17.02±3.56* 6.02±1.30* 3.12±1.45* 48.94±6.00** 1.33±0.51*Nimodipine 0.36 17.95±4.50* 6.16±1.55* 3.06±1.30* 54.74±8.49** 1.35±0.42 Sham － 18.95±4.77 6.81±2.49 3.62±1.35 57.05±*

Tab 3 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on contents of MDA and NO in hippocam pus and cerebral cortex of rats with cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

Tab 3 Effects of 5，6-dihydroxyethyl baicalin on contents of MDA and NO in hippocam pus and cerebral cortex of rats with cerebral ischem ia-reperfusion（±s，n＝8）

＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs sham；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model

Group Dose/mg·kg－1 MDA/μmol·g－1 NO/μmol·g－1 16 Model － 2.54±1.21＃＃ 1.64±0.32＃＃ 1.15±0.34＃＃ 1.28±0.44＃＃5，6-dihydroxyethyl baicalin 45 1.74±0.48 1.60±0.63 1.02±0.17 1.20±0.42 90 1.51±0.47* 1.35±0.36 0.70±0.32* 1.09±0.19 180 1.24±0.33** 0.80±0.19** 0.50±0.13** 0.67±0.28**Nimodipine 0.36 0.99±0.35** 0.90±0.24** 0.55±0.13** 0.52±0.46 Hippocampus Cerebral cortex Sham － 0.98±0.28 0.62±0.20 0.33±0.07 0.37±0.Hippocampus Cerebral cortex**

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