高效液相色譜分析鮮棗中維生素C

李玉明，鄒玉霞

（衡陽師范學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)系，湖南 衡陽 421008）

高效液相色譜分析鮮棗中維生素C

李玉明，鄒玉霞

（衡陽師范學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)系，湖南 衡陽 421008）

采用高效液相色譜法對(duì)鮮棗中維生素C進(jìn)行了分析研究，經(jīng)過一系列的實(shí)驗(yàn)條件摸索，最終確定以純水為流動(dòng)相，流動(dòng)相的流速為0.8mL·min-1，檢測波長267nm，溫度30℃為鮮棗中維生素C的最佳分析條件。此條件下峰形好，峰面積大，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R2＝0.9994。所建立的方法簡單﹑快速﹑準(zhǔn)確度高，適用于鮮棗中維生素C含量的測定。

高效液相色譜法；鮮棗；維生素C

鮮棗的營養(yǎng)成分既豐富又全面，是“活維生素丸”，具有很高的營養(yǎng)保健價(jià)值。維生素C廣泛存在于新鮮蔬菜﹑水果中，番茄﹑辣椒﹑柑桔﹑鮮棗中含量較多。維生素C的生理功能主要有保證膠原蛋白的正常合成，抗壞血病，保護(hù)牙齦，預(yù)防動(dòng)脈硬化，抗氧化作用[1]，治療貧血，防癌，提高人體的免疫力[2]，提高機(jī)體的應(yīng)急能力的作用[3]等。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀LC-10AVP，可見-紫外分光光度儀UV2501，超聲波脫氣裝置AS3120，抽濾過濾裝置AP-01，電子分析天平。

維生素C標(biāo)樣，磷酸（分析純)，甲醇（色譜純），純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 流動(dòng)相的配制

將純水用0.45μm微孔濾膜真空抽濾，裝在潔凈的大試劑瓶中，然后超聲波脫氣15～30min，備用。將甲醇用超聲波脫氣15～30min，備用。分別以甲醇:純水為0∶100﹑100∶0﹑5∶95﹑10∶90﹑15∶85﹑20∶80﹑30∶70的比例進(jìn)行混合，超聲波脫氣15～30min，備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將一定量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)品用純水配制成不同質(zhì)量濃度的維生素C標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液。

1.2.3 樣品溶液的配制

稱取一定量的鮮棗搗碎，加少許0.1%的磷酸溶液，將其研成泥狀，再加適量的甲醇溶液，超聲波提取1.5h后靜置2h，然后高速離心10min，取上清液，再用純水稀釋定容至250mL，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜真空抽濾，待用[4-6]。

1.2.4 分析方法

配制好流動(dòng)相﹑標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法確定最佳分析條件，再定量分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 測定波長的選擇

用紫外光譜儀[7]在245～285nm波長范圍內(nèi)對(duì)維生素C進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示267nm的時(shí)候峰面積最大，吸收最高，波形最好。所以，選擇267nm為維生素C的高效液相色譜分析檢測波長。

2.2 流速和溫度的選擇

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)用高效液相色譜儀的性能特點(diǎn)和檢測時(shí)的峰形﹑保留時(shí)間等出峰情況，選擇流動(dòng)相流速為0.8mL·min-1；檢測溫度為30℃。

2.3 流動(dòng)相的選擇

維生素C在酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定，故在最初選擇pH值為酸性的流動(dòng)相。采用甲醇和0.1%的草酸以不同的比值作流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果出峰都很雜亂，峰形不好，保留時(shí)間也相對(duì)較長。于是改用甲醇和純水以不同的比值作為流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，出峰很好，并采用現(xiàn)配現(xiàn)測的方法來彌補(bǔ)Vc不穩(wěn)定性的不足之處。

1) 流動(dòng)相：純水，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

表1 在條件(1)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、峰面積、保留時(shí)間

圖1 在條件(1)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

2) 流動(dòng)相：甲醇，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果表明，條件（2）下維生素C的出峰均不理想，有很多雜峰。

由以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，甲醇的濃度過高會(huì)影響待測物的出峰情況，導(dǎo)致結(jié)果不理想，誤差較大，因而采用甲醇濃度較小的溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行探究。

3) 流動(dòng)相：甲醇:純水=5∶95，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

圖2 在條件(3)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

4) 流動(dòng)相：甲醇∶純水=10∶90，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

圖3 在條件(4)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

5)流動(dòng)相：甲醇∶純水=15∶85，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

圖4 在條件(5)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

6) 流動(dòng)相：甲醇∶純水=20∶80，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

圖5 在條件(6)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

7) 流動(dòng)相：甲醇∶純水=30∶70，檢測波長267nm，流動(dòng)相流速0.8mL·min-1，檢測溫度30℃。

圖6 在條件(7)下維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖1～6對(duì)比得出：在檢測波長為267nm，流動(dòng)相速度為0.8mL·min-1，檢測溫度為30℃時(shí)，以甲醇:純水=0∶100﹑20∶80﹑30∶70作流動(dòng)相，維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性較好，R2分別為0.9994﹑0.9998﹑0.9989，但從峰形來看，以甲醇:純水=30∶70作流動(dòng)相時(shí)，有雜峰出現(xiàn)，峰形沒有那么好。由此選定以甲醇∶純水=0∶100﹑20∶80做進(jìn)一步的分析比較，從而在這2組條件中選取最優(yōu)條件。

經(jīng)過多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以甲醇:純水=20∶80作流動(dòng)相時(shí)，盡管在該條件下峰面積較大，但線性方程穩(wěn)定性較差，R2值波動(dòng)較大；而以純水作流動(dòng)相時(shí)，峰形均較好，線性方程也較穩(wěn)定，R2值都比較接近，保留時(shí)間波動(dòng)也很小，由此確定分析鮮棗中維生素C含量的研究條件為：純水作流動(dòng)相，檢測波長為267nm，流動(dòng)相速度0.8mL·min-1，檢測溫度為30℃。

2.4 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

純水作流動(dòng)相，檢測波長為267nm，流動(dòng)相速度0.8mL·min-1，檢測溫度為30℃時(shí)，維生素C標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液色譜圖見圖7。

圖7 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

3 結(jié)論

本研究采用高效液相色譜法，經(jīng)過一系列的實(shí)驗(yàn)條件摸索，最終確定以純水為流動(dòng)相，流動(dòng)相的流速為0.8mL·min-1，檢測波長267nm，溫度30℃下分析維生素C，此條件下峰形好，峰面積大，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R2＝0.9994。所建立的方法簡單﹑快速﹑準(zhǔn)確度高，適用于鮮棗中維生素C含量的測定。

[1] 王鏡巖.生物化學(xué)(上冊)[M].北京：高等教育出版社，2007：461-463.

[2] 吳梧桐.生物化學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2007：54-55.

[3] 朱志偉.壞血病的克星——維生素C[J].大學(xué)化學(xué)，2010(25)：66-68.

[4] 王艷穎，姜國斌，胡文忠，等.高效液相色譜法測定草莓中維生素C含量[J].大連大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(2)：21-23.

[5] 何優(yōu)選，梁奇峰.高效液相色譜法測定梅縣沙田柚果肉中維生素C的含量[J].光譜實(shí)驗(yàn) 室，2010，27(4)：1290-1293.

[6] 胡應(yīng)杰，潘康標(biāo)，陳昌云，等.高效液相色譜法測定辣椒中維生素C的含量[J].南京曉莊學(xué)院學(xué)報(bào)，2008(6)：30-32.

[7] 李秋菊，王亞紅，劉秀萍.維生素C的測定方法[J].太原師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2005(1)：89-91.

Analysis of Vitamin C in Fresh Jujubes by High Performance Liquid Chromatography

LI Yu-ming, ZOU Yu-xia
(Department of Chemistry and Material Science, Hengyang Normal University, Hengyang 421008, China)

High performance liquid c hromatography was performed to research vitamin C in the fresh jujubes. The best analysis conditions were: 0.8mL/min Ultra-pure water was taken as fl owing phase, and the ultraviolet examination wave length was at 267nm, the column temperature at 30℃. Through the experimental data, the good linear relationship was established to get the correlation coeff i cient R2=0.9994. The method established was simple, fast and accurate, and was suitable to analyze vitamin C in the fresh jujubes.

high performance liquid chromatography; fresh jujubes; vitamin C

O 657.7+2

A

1671-9905(2014)11-0043-03

衡陽市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013KN35）

李玉明(1978-), 男，江西贛州人，碩士，衡陽師范學(xué)院教師，主要從事應(yīng)用化學(xué)研究。Email: luck53681@sina.com

2014-10-10