肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液T細(xì)胞亞群變化與分析

吳小磊，張慧玉，田 玲，陳冬梅，李曉娟，黃光舉，嚴(yán) 慧

（唐山市婦幼保健院，河北唐山063000）

肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液T細(xì)胞亞群變化與分析

吳小磊，張慧玉＊，田 玲，陳冬梅，李曉娟，黃光舉，嚴(yán) 慧

（唐山市婦幼保健院，河北唐山063000）

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是兒科常見的呼吸道感染性疾病，也是兒科最常見的非典型肺炎之一，其發(fā)病率呈逐年增高趨勢，近年來難治或重癥病例逐漸增多，因此其發(fā)病機(jī)制引起了兒科醫(yī)師的廣泛關(guān)注，其中細(xì)胞免疫發(fā)揮的作用已得到公認(rèn)，但其免疫機(jī)制尚不十分清楚。本文回顧性總結(jié)分析72例RMPP患兒、63例普通MPP患兒的支氣管肺泡灌洗液T細(xì)胞亞群水平及變化，探討其變化與肺炎支原體肺炎病情輕重的關(guān)系。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

1.1.1 病例來源 選擇2011年12月～2012年11月在我院住院行支氣管肺泡灌洗的肺炎支原體肺炎患兒共135例，入選標(biāo)準(zhǔn)：符合實(shí)用兒科學(xué)第7版肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；起病4周內(nèi)雙份血清肺炎支原體抗體滴度升高有4倍以上。排除支氣管哮喘、肺結(jié)核等其他呼吸系統(tǒng)疾病，留取標(biāo)本前未使用免疫調(diào)節(jié)劑、免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素。在入選病例中根據(jù)臨床表現(xiàn)分為MPP組63例和RMPP組72例，RMPP組除符合上述條件外尚符合以下3項(xiàng)中任意一條：①經(jīng)規(guī)范的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療，仍持續(xù)高熱超過10d以上、劇烈咳嗽影響睡眠；②影像學(xué)表現(xiàn)為雙側(cè)或單側(cè)大葉高密度肺實(shí)變，合并中大量胸腔積液，甚至出現(xiàn)壞死性肺炎表現(xiàn)，或表現(xiàn)為雙側(cè)彌漫性間質(zhì)性肺侵潤；③合并肝臟、心肌等肺外臟器損害，可發(fā)生肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）。MPP組男性30例，女性33例，平均年齡（5.43±1.80）歲。RMPP組男性32例，女性40例，平均年齡（5.94±1.92）歲。

1.1.2 對照組 氣管異物住院、異物取出4周后支氣管鏡復(fù)查的患兒為對照組30例，且雙份血清確診無肺炎支原體（mycoplasma，MP）感染，其中男性12例，女性18例，平均年齡（5.23±1.45）歲。各組在年齡、性別分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究取得患兒家長的同意，并簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 由兒科專業(yè)護(hù)士無菌抽取清晨空腹靜脈血2ml，抗凝，3 000r／min離心10min取血清測定T細(xì)胞亞群水平。

1.2.2 支氣管鏡選擇 采用日本富士能支氣管鏡外徑分別為3.8mm，操作孔徑為1.2mm。

1.2.3 支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本留取 采用日本O－lymPus纖維支氣管鏡（纖支鏡），使用前用2%戊二醛浸泡0.5小時(shí)，然后用無菌生理鹽水反復(fù)沖洗，具體操作如下：患兒行纖維支氣管鏡術(shù)，術(shù)前30分鐘肌肉注射阿托品0.01－0.03mg／kg（最大量不超過0.5mg）減少呼吸道分泌物，并防止術(shù)中迷走反射引起的呼吸心跳驟停，術(shù)前10分鐘靜脈推注咪唑安定0.1－0.3mg／kg，鎮(zhèn)靜和近期遺忘的作用，以免患兒對操作過程有痛苦記憶?；颊呷⊙雠P位，由專業(yè)的兒科醫(yī)生將纖支鏡經(jīng)鼻腔進(jìn)入氣管，當(dāng)纖支鏡通過聲門進(jìn)入氣管隆突后，用2%利多卡因1ml經(jīng)活檢孔噴灑，再用5ml空氣加壓注入進(jìn)行局部表面麻醉。將纖支鏡嵌入病變最嚴(yán)重部位或右肺中葉作為灌洗部位，急性支氣管異物患兒的灌洗部位為非異物側(cè)肺，用10ml無菌針筒經(jīng)纖支鏡吸引孔注入37℃無菌生理鹽水灌洗并回收BALF，無菌生理鹽水注入量為每次1ml／kg，共3次，回收量大于40%，將回收液體立即用無菌紗布除去粘液及痰液，裝入硅塑瓶，置于含有冰塊的保溫瓶中，立即送往實(shí)驗(yàn)室，在4℃以下以1 800r／min離心10min，測定T細(xì)胞亞群水平。

1.2.4 血及肺泡灌洗液T細(xì)胞亞群測定 由流式細(xì)胞儀（FACSCalibur，美國Becton Dickinson公司）及CellQuest軟件測定，按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

連續(xù)性正態(tài)分布的計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，多組均數(shù)的多重比較采用LSD－t檢驗(yàn)方法，以P＜0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 不同組間兒童血清中CD3、CD4、CD4／CD8水平有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），CD8水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn)，RMPP組兒童血清CD3、CD4、CD4／CD8水平明顯低于MPP組和支氣管異物組兒童水平（P＜0.01），RMPP組CD8及MPP組血清CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平與支氣管異物組無差異（P＞0.05），見表1。

表1 各組血中T細(xì)胞亞群分析

2.2 不同組間兒童BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn)，RMPP組兒童BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平低于MPP組和支氣管異物組兒童水平（P＜0.01），MPP組BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平與支氣管異物組無差異（P＞0.05），見表2。

表2 各組BALF中T細(xì)胞亞群分析

2.3 MPP組BALF及血中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.4 RMPP組患兒BALF中CD3、CD4、CD8水平均低于血中相應(yīng)指標(biāo)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），BALF及血中CD4／CD8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表3 MPP組血及BALF中T細(xì)胞亞群分析

表4 RMPP組血及BALF中T細(xì)胞亞群分析

3 討論

MP是5－15歲兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）的常見病原，占10%－30%［1］。MP常侵襲大齡兒童，但據(jù)流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近年來MP感染有發(fā)病年齡提前的現(xiàn)象，5歲以內(nèi)兒童發(fā)病率明顯上升，部分患兒病情較重，它不僅可造成嚴(yán)重的肺部感染，而且可以發(fā)生多器官、多系統(tǒng)損害，如不及時(shí)治療，部分患兒甚至出現(xiàn)多器官功能障礙或多器官功能衰竭，對兒童的健康造成很大的危害［2］。因此MPP的發(fā)病機(jī)制日益受到兒科醫(yī)生的高度重視。迄今，MPP的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但其免疫機(jī)制已得到認(rèn)可，其中細(xì)胞免疫占重要作用。

國外研究表明，MP可使淋巴細(xì)胞多克隆活化［3］，對淋巴細(xì)胞有絲裂原的作用，導(dǎo)致細(xì)胞增殖和破壞正常T細(xì)胞亞群的比例。CD3細(xì)胞是成熟T淋巴細(xì)胞的特征性標(biāo)志，T淋巴細(xì)胞因其CD3分子以外的其它表面標(biāo)記物以及生物學(xué)功能不同，而分為許多亞群。其中CD4細(xì)胞可促進(jìn)B細(xì)胞、T細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞的增殖、分化和發(fā)揮免疫效應(yīng)功能，故稱為輔助性T淋巴細(xì)胞；而CD8的功能是直接殺傷靶抗原，故稱為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。正常情況下，CD4／CD8細(xì)胞比值在一定的范圍內(nèi)，維持著動(dòng)態(tài)平衡，一旦失去平衡，將導(dǎo)致免疫功能紊亂和免疫防御能力降低，致使疾病發(fā)生。T淋巴細(xì)胞亞群的比例是反映機(jī)體免疫功能變化的主要指標(biāo)。CD3水平下降說明了T淋巴細(xì)胞活化功能受抑制，這可能是導(dǎo)致機(jī)體免疫功能降低的關(guān)鍵因素。國內(nèi)研究［4－6］發(fā)現(xiàn)MPP患兒急性期和恢復(fù)期CD3、CD4比例及CD4／CD8比值明顯降低，而CD8細(xì)胞比例較正常對照組明顯升高。本研究發(fā)現(xiàn)RMPP患兒血清及BALF中CD3、CD4水平及CD4／CD8水平明顯下降，且BALF中改變更明顯，說明RMPP患兒成熟T細(xì)胞數(shù)目減少，Th細(xì)胞免疫功能下降，其結(jié)果導(dǎo)致免疫功能減退、免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，而MPP組血清中C3、CD4水平及CD4／CD8比值較對照組無明顯下降，與上述研究結(jié)果不符，考慮與所選病人輕重程度不同有關(guān)。MPP組BALF中CD4較對照組有下降，說明BALF中CD4改變較血清中更敏感。

總之，本研究提示了T細(xì)胞免疫功能異常在MPP尤其是RMPP發(fā)病機(jī)制中起重要作用。目前兒童MP感染的抗生素治療主要以大環(huán)內(nèi)酯類為主，但大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥問題越來越嚴(yán)重［7］，故機(jī)體免疫功能的增強(qiáng)及改善在MPP的治療過程中顯得尤為重要。嚴(yán)永東［8］用免疫調(diào)節(jié)劑匹多莫德治療難治性MPP有一定療效，提示我們對RMPP可給予免疫調(diào)節(jié)治療，以助于提高療效、縮短病程。

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吳小磊（1982－），女，本科，主治醫(yī)師。

2013－06－15）

1007－4287（2014）07－1122－03

＊通訊作者