常規(guī)細(xì)針穿刺聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的應(yīng)用

吳麗華

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，江蘇南通226001）

常規(guī)細(xì)針穿刺聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的應(yīng)用

吳麗華

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，江蘇南通226001）

目的 探討術(shù)前運(yùn)用細(xì)針穿刺甲狀腺結(jié)節(jié)行細(xì)胞學(xué)檢查，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)分析，進(jìn)一步提高對甲狀腺乳頭狀病變術(shù)前診斷的準(zhǔn)確率。方法 回顧分析本院2008年2月至2009年4月收治的術(shù)前細(xì)針穿刺甲狀腺乳頭狀病變62例。作常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片及液基薄層細(xì)胞學(xué)涂片，同時結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢查進(jìn)行Galectin－3，細(xì)胞角蛋白19和HMBE－1等標(biāo)記的測定和分析，與手術(shù)后組織病理結(jié)果作比較。結(jié)果 對照術(shù)后組織病理，32例為癌性乳頭，30例為良性乳頭，細(xì)胞學(xué)診斷準(zhǔn)確率為83.9%（良性乳頭中有6例、惡性乳頭中有4例細(xì)胞形態(tài)難以確定其病變性質(zhì)）。Galectin－3、CK19及HMBE等標(biāo)記在癌性乳頭中的表達(dá)率分別為87.5%（28／32）、93.75%（30／32）及87.5%（28／32）；而30例良性乳頭的表達(dá)率則分別為30.0%（9／30）、33.3%（10／30）及20.0%（6／30），兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)涂片結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)分析，有助于提高診斷的準(zhǔn)確率。

細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)；甲狀腺乳頭狀病變；免疫細(xì)胞化學(xué)

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1084）

甲狀腺病變臨床常表現(xiàn)為無痛性甲狀腺結(jié)節(jié)，且有些病變無須手術(shù)治療，內(nèi)科治療即可達(dá)到治療目的，因此，術(shù)前準(zhǔn)確診斷尤為重要。隨著細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查（fine needle aspiration cytology，F(xiàn)NAC）技術(shù)在臨床的廣泛應(yīng)用，甲狀腺穿刺已經(jīng)成為甲狀腺結(jié)節(jié)性疾病術(shù)前診斷的重要檢查方法。甲狀腺細(xì)胞學(xué)涂片中常出現(xiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)，而這種形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)在良惡性甲狀腺疾病中均可存在，如僅依靠HE染色，常常難以明確診斷。近年來一些免疫標(biāo)記物應(yīng)用于甲狀腺良惡性疾病的鑒別診斷中。本研究通過術(shù)前FNAC結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，并與術(shù)后組織病理診斷比較，探討FNAC結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的價(jià)值，以提高甲狀腺結(jié)節(jié)狀病變術(shù)前診斷的正確率。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集本院2008年2月－2009年4月間因甲狀腺結(jié)節(jié)病變而行術(shù)前FNAC檢查，且有術(shù)后組織病理學(xué)診斷的甲狀腺乳頭狀病變62例。其中男性15例，女性47例，年齡23－74歲，平均年齡（48.78±13.64）歲。

1.2 FNAC方法 患者呈坐位頭仰伸，充分暴露其頸部，常規(guī)皮膚消毒。術(shù)者右手持帶有7號針頭的5ml注射器，在略帶負(fù)壓下反復(fù)穿刺結(jié)節(jié)。將針芯內(nèi)的抽吸物推于清潔玻璃片上，立即涂片3張，其中1張行細(xì)胞學(xué)診斷，另2張行免疫細(xì)胞化學(xué)檢查。

1.3 常規(guī)細(xì)胞學(xué)染色 將涂片立即置于95%乙醇和乙醚混合固定液中，固定5－10min，水洗1min，蘇木素染色7min，水洗1min，鹽酸乙醇分化，水洗藍(lán)化1min，伊紅染色10s，梯度脫水，封片，鏡檢。

1.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 免疫細(xì)胞化學(xué)染色采用EnVision法，涂片脫水后，3%H2O2阻斷其內(nèi)源性過氧化物酶，PBS洗滌3次，分別加入鼠抗人Galectin－7、CK19、HBME等一抗，經(jīng)37℃恒溫、5h孵育后PBS洗滌，加入EnVision（鼠），37℃孵育20min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固。

1.5 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) Galectin－3陽性定位于細(xì)胞漿和核、CK19的陽性定位于細(xì)胞漿、HBME－1主要為細(xì)胞膜著色。凡出現(xiàn)明顯的棕色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。按陽性細(xì)胞所占比例分為：陽性細(xì)胞≤10%為陰性（－），陽性細(xì)胞占10%－25%為弱陽性（＋），陽性細(xì)胞占25%－50%為陽性（＋＋），陽性細(xì)胞＞50%為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果 62例甲狀腺乳頭狀病變，細(xì)胞學(xué)診斷與手術(shù)切除標(biāo)本病理診斷一致者52例，細(xì)胞學(xué)診斷正確率為83.9%。10例與術(shù)后病理診斷不一致，其中惡性4例、良性6例。細(xì)胞學(xué)上，癌性乳頭細(xì)胞呈擁擠重疊，細(xì)胞核明顯增大，核染色質(zhì)空，核形不規(guī)則，常有核溝，核內(nèi)假包涵體（見圖1）。而良性乳頭細(xì)胞排列有一定的方向性，核偏小圓而規(guī)則，核染色質(zhì)細(xì)膩。

圖1 乳頭狀癌涂片細(xì)胞核大毛玻璃樣變并可見核溝。HE×200

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果 Galectin－3、CK19及HMBE－1等標(biāo)記在癌性乳頭中的表達(dá)率分別為87.5%（28／32）、93.75%（30／32）及87.5%（28／32），陽性細(xì)胞呈中強(qiáng)度表達(dá)（見圖2、3、4）；而30例良性乳頭的表達(dá)率則分別為30.0%（9／30）、33.3%（10／30）及20%（6／30），陽性細(xì)胞呈局灶或弱表達(dá)。上述兩組表達(dá)率的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表1）。

圖2 乳頭狀癌，CK19呈胞漿胞膜陽性表達(dá)（ENVISION法×200）

圖3 乳頭狀癌，Glectin－3呈胞漿胞核陽性表達(dá)（ENVISION法×200）

圖4 乳頭狀癌，HMBE呈胞膜陽性表達(dá)（ENVISION法×200）

表1 62例甲狀腺乳頭狀病變免疫組化結(jié)果分析

3 討論

甲狀腺病變中僅惡性及部分良性疾病需行手術(shù)治療，因此，術(shù)前診斷對決定是否需要手術(shù)治療十分重要。由于甲狀腺解剖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，血運(yùn)豐富，如術(shù)前行常規(guī)活檢則并發(fā)癥多。而超聲、影像學(xué)等檢查則常常難以定性。FNAC因操作簡單、快速，對人體損傷少和并發(fā)癥少等特點(diǎn)，日益成為甲狀腺術(shù)前診斷的一種安全、經(jīng)濟(jì)而有效的手段，深受醫(yī)生和患者的歡迎，能使甲狀腺病變的手術(shù)率降低58%［1］。

甲狀腺FNAC涂片中常出現(xiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)。它們既可是良性乳頭狀增生，也可為惡性乳頭狀癌。盡管大多數(shù)乳頭狀病變通過細(xì)胞學(xué)形態(tài)可明確診斷，但少數(shù)乳頭狀病變需要借助免疫標(biāo)記而確定良惡性。

近年來隨著分子和蛋白水平對腫瘤研究的進(jìn)展，與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有關(guān)的腫瘤標(biāo)志物出現(xiàn)較多，而理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)該具有特異性高、敏感性強(qiáng)、可信度高及穩(wěn)定性強(qiáng)的特點(diǎn)。國內(nèi)外相繼應(yīng)用了一些標(biāo)志物如HBME－1，部分高分子量CK、Galectin－3等來作為相應(yīng)的輔助診斷，這些標(biāo)志物在敏感性或特異性上各有優(yōu)缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)選取CK19，Galectin－3及HBME－1作為標(biāo)記物聯(lián)合檢測可明顯提高診斷的準(zhǔn)確率。

Galectin－3是凝集素蛋白家族的成員之一，它在多種腫瘤中均有表達(dá)，尤其是在分化型甲狀腺癌細(xì)胞中有較高的陽性率，因而在甲狀腺腫瘤中倍受關(guān)注［2］。Weinberger［3］等則證實(shí)Galectin－3在乳頭狀癌中高度表達(dá)，在其他正?；蛄紣盒圆∽兊募谞钕俳M織類型中較少表達(dá)。Galectin－3廣泛應(yīng)用于甲狀腺癌免疫組織化學(xué)研究中，是一種特異度高和敏感性較好的甲狀腺癌的腫瘤標(biāo)記物。HBME－1為單克隆抗體，是間皮細(xì)胞微絨毛表面特異性標(biāo)記物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長以及腫瘤的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用［4］。多項(xiàng)研究顯示HBME－1在甲狀腺癌中呈高表達(dá)，而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和乳頭狀良性增生病變中為陰性或部分表達(dá)，發(fā)現(xiàn)HBME－1的特異性和敏感性均較高，HBME－1與其他分子如CK19等的聯(lián)合檢測可提高診斷的準(zhǔn)確性［5］。

綜上所述，甲狀腺細(xì)針細(xì)胞學(xué)檢查是目前公認(rèn)的經(jīng)濟(jì)而準(zhǔn)確性高的術(shù)前檢查方法，但由于細(xì)胞學(xué)檢查缺乏組織的結(jié)構(gòu)變化及相鄰周圍組織，包括血管及包膜的病變情況，故對于某些甲狀腺腫塊易于漏診。為能提高診斷的準(zhǔn)確性，本研究應(yīng)用常規(guī)細(xì)胞涂片檢查結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)CK19、Galectin－3、HBME－1作為標(biāo)記物的檢查手段來提高術(shù)前診斷的準(zhǔn)確性，雖然仍存在一定的假陽性及假陰性，但可明顯提高診斷的準(zhǔn)確率。但在一部分良性病變中仍有一些病例還不能進(jìn)一步確診，有待進(jìn)一步深入研究。

總之，F(xiàn)NAC檢查結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測可提高術(shù)前診斷準(zhǔn)確率，值得在臨床推廣應(yīng)用。

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The application of fine－needle aspiration cytology combined with immunocytochemistry in cytohistologic diagnosing of thyroid pa－pillary lesions

WU Li－h(huán)ua.

（Department of Pathology，Affliated Hospital of Nantong University226001，China）

Objective To explore the application of preoperative fine－needle aspiration cytology（FNAC）diagnosing thyroid nodules，combined with immunocytochemistry to further improve the accuracy of preoperative diagnosis of thyroid papillary lesions.Methods Retrospective analysis of 62cases of thyroid papillary lesions which were treated with preoperative FNAC in our hospital from February，2008to April，2009.All cases were examined with conventional cytologic smears and ThinPrep cytologic Test（TCT），and the expression of Galectin－3，Cytokeratin19and HMBE－1of lesion cells in smears was determined by immunocytochemistry.Preoperative FNAC diagnosis was compared with postoperative histopathological diagnosis.Results Of 62cases，52cases were diagnosed unequivocally by Preoperative FNAC（diagnostic accuracy rate was 83.9%）.The expression rates of Galectin－3，CK19，and HMBE－1in the cells of papillary carcinoma were 75%（24／32），87.5%（28／32）and 81.3%（26／32），respectively，and in the cells of benign papillae were 26.7%（8／30），26.7%（8／30），10%（3／30），respectively.Difference between above two groups was statistically significant.Conclusion Combined FNAC with immunocytochemistry in the Preoperative diagnosis of thyroid nodules，would help to improve diagnostic accuracy.

fine needle aspiration cytology；thyroid papillary lesions；immunocytochemistry

R446.8

A

吳麗華，女，學(xué)士，副主任技師。

2013－08－15）

1007－4287（2014）07－1084－03