子宮內(nèi)膜異位癥組織IL－17和FoxP－3的表達(dá)及意義

王福玲，林偉，馮春蝶，袁芳，張華玲，崔竹梅

（1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科，山東 青島 266003； 2 漯河市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科）

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是一種常見(jiàn)的婦科疾病，近來(lái)發(fā)病率有上升趨勢(shì)，其發(fā)病機(jī)制不清。目前認(rèn)為EMs的發(fā)病與免疫因素密切相關(guān)，EMs甚至被認(rèn)為是一種自身免疫性疾病。Th17細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的CD4＋T細(xì)胞新的亞群，它們?cè)诰S護(hù)人體免疫平衡中發(fā)揮重要作用。Th17細(xì)胞的增多見(jiàn)于許多慢性自身免疫性疾病，而Treg細(xì)胞可以控制其他T細(xì)胞（包括Th17細(xì)胞）的增殖和活化［1］。白細(xì)胞介素17（IL－17）和轉(zhuǎn)錄因子FoxP－3分別是Th17和Treg細(xì)胞的標(biāo)志性分子，在其各自分化發(fā)育及功能維持方面起著關(guān)鍵作用［2－3］。目前，IL－17和 FoxP－3在 EMs中的作用仍不清楚。本研究旨在探討免疫因素在EMs發(fā)生發(fā)展中的作用，以期為臨床治療EMs提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2012年1—6月，選取在我院婦科行手術(shù)治療、病理診斷為EMs病人的異位內(nèi)膜組織（巧克力囊腫的囊壁）35例，其中20例因不孕同時(shí)行宮腔鏡檢查術(shù)，術(shù)中取其在位內(nèi)膜組織。病人年齡31～46歲（中位年齡38歲），均月經(jīng)規(guī)律，處于月經(jīng)第5～10天，術(shù)前3個(gè)月內(nèi)無(wú)相關(guān)激素用藥史。選取因婦科良性疾病在門診行宮腔鏡檢查病人的內(nèi)膜組織15例作為正常對(duì)照，病人年齡29～49歲（中位年齡35歲），術(shù)后病理證實(shí)子宮內(nèi)膜均為增殖期。

1.2 染色方法

采用免疫組織化學(xué)Envision二步法，嚴(yán)格按照免疫組化試劑盒說(shuō)明步驟進(jìn)行操作。兔抗人IL－17、FoxP－3單克隆抗體（工作液）均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，免疫組化通用型試劑盒為美國(guó)ZYMED公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定

IL－17及FoxP－3表達(dá)以淋巴細(xì)胞的細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。在高倍鏡下（200倍）每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性（－），≥5%為陽(yáng)性（＋）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 IL－17在不同內(nèi)膜組織中的表達(dá)

在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織間質(zhì)細(xì)胞中可見(jiàn)散在表達(dá)IL－17的細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞密度遠(yuǎn)低于異位內(nèi)膜組織。在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中內(nèi)膜腺體細(xì)胞亦表達(dá)IL－17，而且在位內(nèi)膜腺體細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常內(nèi)膜（圖1A、B、C）。異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織IL－17陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.71%（30／35）、20.00%（4／20）和6.67%（1／15），各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝36.32，P＜0.05）。

2.2 FoxP－3在不同內(nèi)膜組織中的表達(dá)

在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中可見(jiàn)散在分布FoxP－3陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞密度遠(yuǎn)低于異位內(nèi)膜組織。在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中內(nèi)膜腺體細(xì)胞亦表達(dá)FoxP－3，但在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜腺體細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度差別不明顯（圖1D、E、F）。異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中FoxP－3的陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.86%（29／35）、30.00%（6／20）和 46.67%（7／15），其中異位內(nèi)膜組織FoxP－3的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織（χ2＝16.23，P＜0.05），而在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜組織相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 IL－17與FoxP－3蛋白在不同內(nèi)膜組織中的表達(dá)

3 討 論

EMs是育齡婦女的常見(jiàn)病，育齡婦女其發(fā)病率約為5%～20%［4－6］。本病主要表現(xiàn)為痛經(jīng)、月經(jīng)失調(diào)和不孕，嚴(yán)重影響中青年婦女的健康和生活質(zhì)量。EMs發(fā)病機(jī)制至今不明，經(jīng)血逆流學(xué)說(shuō)雖被廣為接受，但多數(shù)婦女月經(jīng)期都有經(jīng)血反流現(xiàn)象，卻只有少數(shù)婦女患病，因此，近年來(lái)已有越來(lái)越多的觀點(diǎn)認(rèn)為其發(fā)病與病人自身免疫及局部炎癥因素有關(guān)。有研究表明，腹腔液中IL－17濃度與EMs病人臨床分期及不孕有關(guān)［7］。國(guó)外有報(bào)道，異位妊娠病人蛻膜中表達(dá)FoxP－3的CD4＋T細(xì)胞比例明顯低于EMs病人異位內(nèi)膜及正常分泌期子宮內(nèi)膜［8］。本文研究結(jié)果顯示，異位內(nèi)膜組織中IL－17和FoxP－3的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織，而在位內(nèi)膜組織中IL－17的表達(dá)明顯高于正常內(nèi)膜組織，而FoxP－3在EMs病人在位內(nèi)膜組織中的表達(dá)略低于正常內(nèi)膜組織。

Th17細(xì)胞是除Th1／Th2之外發(fā)現(xiàn)的一種新型CD4＋T細(xì)胞，IL－17則是Th17細(xì)胞特異性分泌的細(xì)胞因子，IL－17包括IL－17A、IL－17B、IL－17C、IL－17D、IL－17E（IL－25）和IL－17F，其中IL－17A 起主要作用，它是由155個(gè)氨基酸殘基組成的糖蛋白。HIRATA 等［9］研究顯示，IL－17A 及其受體表達(dá)于EMs病人的異位內(nèi)膜組織及腹腔液細(xì)胞中，推測(cè)Th17細(xì)胞滲透入EMs病人病灶部位特異性表達(dá)IL－17A，通過(guò)IL－17A促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞分泌IL－8、環(huán)氧合酶－2，最終促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞增殖、EMs病灶發(fā)展。HIRATA等［10］的研究結(jié)果還顯示，異位內(nèi)膜組織中Th17細(xì)胞表達(dá)CCR6，而CCR6以病灶中基質(zhì)細(xì)胞分泌的CCL20為配體，可能正是由于這種配體受體的結(jié)合，吸引并募集血液中表達(dá)CCR6的Th17細(xì)胞向異位病灶聚集，而Th17細(xì)胞分泌的IL－17刺激基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步表達(dá)CCL20，這種循環(huán)有可能是EMs進(jìn)一步發(fā)展的機(jī)制之一。

Treg細(xì)胞是2003年由RUDENSKY和SAKAGUCHI發(fā)現(xiàn)的一種特殊CD4＋T細(xì)胞。Treg細(xì)胞來(lái)自于胸腺，這些細(xì)胞離開(kāi)胸腺后到達(dá)外周循環(huán)，正常情況下處于失能狀態(tài)，一旦出現(xiàn)炎癥－免疫反應(yīng)則發(fā)揮其抑制功能。該細(xì)胞活化后可抑制CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的活化、增殖；同時(shí)，還可抑制B細(xì)胞的免疫應(yīng)答，從而抑制自身免疫疾病的發(fā)生。FoxP－3在Treg細(xì)胞發(fā)育及功能維持方面起著關(guān)鍵的作用，是Treg細(xì)胞的標(biāo)志性分子。本研究結(jié)果顯示，異位內(nèi)膜組織中FoxP－3蛋白表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織，這與CHEN等［11］的研究結(jié)果一致，說(shuō)明異位病灶的發(fā)展與Treg細(xì)胞的增多有一定關(guān)聯(lián)。除FoxP－3外，Treg細(xì)胞還表達(dá)細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原－4（CTLA－4）、CD40、CD28、IL－4、IL－10和 TGF－β，這些細(xì)胞因子抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，在抑制自身免疫、免疫耐受方面起至關(guān)重要的作用。在器官移植病人中Treg細(xì)胞對(duì)抑制排異反應(yīng)有重要貢獻(xiàn)，此外在正常妊娠中Treg細(xì)胞能有效抑制母體對(duì)胎兒的排異反應(yīng)，保護(hù)正常妊娠進(jìn)行。有研究結(jié)果表明，妊娠婦女外周血及妊娠組織中Treg細(xì)胞數(shù)量增多，而習(xí)慣性流產(chǎn)婦女外周血中Treg細(xì)胞數(shù)量減少，Treg細(xì)胞數(shù)量與人絨毛膜促性腺激素水平高低有關(guān)［12］。鑒于此，考慮Treg細(xì)胞在異位內(nèi)膜組織中的數(shù)量多少能影響局部免疫平衡，推測(cè)增多的Treg細(xì)胞在異位內(nèi)膜組織局部間接或直接抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞對(duì)異位內(nèi)膜的識(shí)別、清除，使異位內(nèi)膜得以存活并促進(jìn)異位病灶的發(fā)展。

本文的研究結(jié)果表明，不僅異位內(nèi)膜組織IL－17及FoxP－3蛋白表達(dá)增高，在位內(nèi)膜組織IL－17及FoxP－3蛋白表達(dá)也出現(xiàn)一定程度改變。這與郎景和［13］關(guān)于EMs的發(fā)病與病人在位內(nèi)膜的特性有關(guān)這一論斷相一致。推測(cè)可能是異位內(nèi)膜刺激各種免疫細(xì)胞聚集于病灶的同時(shí)，部分免疫細(xì)胞同時(shí)侵入在位內(nèi)膜組織所致。

綜上所述，IL－17及FoxP－3在異位內(nèi)膜組織中的過(guò)度表達(dá)，提示Th17和Treg細(xì)胞可能在EMs的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起一定的促進(jìn)作用，鑒于Th17及Treg細(xì)胞均為CD4＋T細(xì)胞，以分析CD4＋T細(xì)胞內(nèi)部比例的失調(diào)為出發(fā)點(diǎn)，可為探討EMs的發(fā)病機(jī)制，尋找治療的新靶點(diǎn)及進(jìn)一步提高治療效果提供理論依據(jù)。

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