百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用

宋艷麗,劉興林,陳德森

(湖北醫(yī)藥學(xué)院,湖北十堰 442000 1 附屬太和醫(yī)院消毒供應(yīng)中心; 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心; 3 機(jī)能實(shí)驗(yàn)室)

百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用

宋艷麗1,劉興林2,陳德森3

(湖北醫(yī)藥學(xué)院,湖北十堰 442000 1 附屬太和醫(yī)院消毒供應(yīng)中心; 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心; 3 機(jī)能實(shí)驗(yàn)室)

目的觀察百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟的影響并探討其作用機(jī)制。方法45只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及百令膠囊組,其中模型組及百令膠囊組大鼠采用腹腔注射鏈脲菌素(25 mg/kg)建立糖尿病模型,對(duì)照組僅注射0.5 m L枸櫞酸緩沖液,1周后百令膠囊組以10 mg/kg百令膠囊灌胃,每天1次;對(duì)照組及模型組以10 m L/kg生理鹽水灌胃,每天1次,3組大鼠連續(xù)灌胃49 d。于第7、28、49天各組分別處死大鼠5只,測量腎臟質(zhì)量并計(jì)算腎指數(shù);第7、28、49天大鼠尾靜脈取血測定血糖、血清肌酐及尿素氮水平;同時(shí)收集24 h尿液測定尿微量清蛋白的水平。結(jié)果第7、28、49天百令膠囊組腎臟質(zhì)量、腎指數(shù)、血清肌酐、尿素氮及尿微量清蛋白水平明顯低于模型組,差異均有顯著性(F＝13.32～85.36,q＝3.58～92.39,P＜0.05)。百令膠囊組血糖與模型組比較,差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與其阻止腎間質(zhì)病變、糾正蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝、延緩腎功能減退,進(jìn)而改善腎功能有關(guān)。

百令膠囊;尿微量清蛋白;血糖;血尿素氮

百令膠囊是經(jīng)現(xiàn)代工藝發(fā)酵冬蟲夏草菌粉制成的中藥,該藥具有補(bǔ)肺腎,益精氣,保護(hù)腎臟和肝臟等作用[1]。用于肺腎兩虛引起的腰背酸痛及糖尿病腎病(DKD)的輔助治療。本研究旨在觀察百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟的影響,為臨床治療DKD提供理論依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇雄性SD大鼠45只,體質(zhì)量180～220 g, SPF級(jí),由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供,合格證號(hào):SCXK(鄂)2010-2013。

1.2 藥品試劑及儀器

百令膠囊為杭州中美華東制藥有限公司產(chǎn)品,鏈脲佐菌素(STZ)為美國Sigma公司產(chǎn)品,大鼠尿清蛋白EIA測定試劑盒為美國RND公司產(chǎn)品,日立7150型全自動(dòng)生化分析儀為日本日立精密儀器株式會(huì)社產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病模型制備及各組處理

按文獻(xiàn)[2]的方法給予大鼠高糖高脂飲食5個(gè)月,然后禁食12 h,隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及百令膠囊組,模型組及百令膠囊組大鼠均腹腔注射STZ 25 mg/kg誘導(dǎo)糖尿病模型(每天1次,連續(xù)注射1周),對(duì)照組注射0.5 m L枸櫞酸緩沖液。以腹腔注射后第7天大鼠隨機(jī)血糖(Blu)≥16.7 mmol/L,尿糖(?～)以上者為糖尿病模型造模成功。造模成功后,對(duì)照組及模型組大鼠每天每次以10 m L/kg生理鹽水灌胃,百令膠囊組每天每次以10 mg/kg百令膠囊灌胃,連續(xù)灌胃49 d,于第7、28、49天分別尾靜脈取血檢測大鼠Blu、血清肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)的水平;同時(shí)留取24 h尿液,檢測尿微量清蛋白(U-MA)含量。各組于第7、28、49天處死5只大鼠,取右側(cè)腎臟,清除腎門處血管及結(jié)締組織,測定大鼠腎臟質(zhì)量(LRW)及并計(jì)算腎指數(shù)(RWI)。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法

使用Uritest-500尿液分析儀以免疫比濁法測定U-MA的含量,使用日立7150型全自動(dòng)生化分析儀電極法測定血清BUN和Cr的水平。Blu按常規(guī)方法檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 15.0及PPMS 1.5[3]軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果以±s表示,組間比較采用方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠LRW及RWI的影響

模型組大鼠第7、28、49天LRW及RWI明顯高于對(duì)照組,差異有顯著性(F＝23.29～85.36,q＝9.58～90.31,P＜0.05)。而百令膠囊組在第7、28、49天LRW及RWI明顯底于模型組,差異有顯著性(q＝21.54～68.39,P＜0.05)。見表1。

2.2 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠Blu及U-MA水平的影響

模型組第7、28、49天Blu含量均明顯高于對(duì)照組,差異有顯著意義(F＝27.85～79.36,q＝3.58～46.01,P＜0.05)。百令膠囊組第7、28、49天Blu含量與模型組比較,差異無顯著性(P＞0.05)。百令膠囊組第7、28、49天U-MA水平明顯低于模型組,差異有顯著性(q＝11.58～70.37,P＜0.05)。見表2。

2.3 百令膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠Cr和BUN水平的影響

模型組第7、28、49天Cr、U-MA含量均明顯高于對(duì)照組,差異有顯著意義(F＝13.32～85.36,q＝3.58～47.31,P＜0.05)。百令膠囊組第7、28、49天Cr的含量均明顯低于模型組,差異有顯著意義(q＝11.51～76.31,P＜0.05)。百令膠囊組在第28及49天BUN水平明顯低于模型組,差異有顯著性(q＝3.58、92.39,P＜0.05)。見表3。

表1 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠LRW及RWI的影響(±s,n＝5)

表1 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠LRW及RWI的影響(±s,n＝5)

與對(duì)照組比較,F＝23.29～85.36,?q＝9.58～90.31,P＜0.05;與模型組比較,＃q＝21.54～68.39,P＜0.05。

組 別LRW(m/g) RWI(χ/%)第7天第28天第49天第7天第28天第49天對(duì) 照 組0.663±0.062 0.671±0.061 0.677±0.063 0.314±0.041 0.309±0.401 0.312±0.032模 型 組 0.889±0.038?0.912±0.039?0.874±0.392?0.494±0.039?0.487±0.037?0.464±0.238?百令膠囊組 0.827±0.035＃0.748±0.029＃0.696±0.357＃0.412±0.025＃0.395±0.036＃0.364±0.027＃

表2 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠Blu和U-MA水平的影響(±s,n＝20)

表2 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠Blu和U-MA水平的影響(±s,n＝20)

與對(duì)照組比較,F＝27.85～79.36,?q＝3.58～46.01,P＜0.05;與模型組比較,＃q＝11.58～70.37,P＜0.05。

組 別Blu(c/mmol·L-1) U-MA(mg/24 h) 7天28天49天7天28天49天對(duì) 照 組7.29±0.31 6.57±0.22 7.25±0.32 1.79±0.17 1.52±0.19 1.66±0.12模 型 組 22.39±2.31?24.58±2.12?29.26±2.36?7.27±0.22?7.11±0.33?7.19±0.21?百令膠囊組20.31±2.37 21.64±2.29 25.53±1.47 5.71±0.25＃4.55±0.21＃3.94±0.15＃

表3 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠Cr和BUN水平的影響(±s,n＝20)

表3 百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠Cr和BUN水平的影響(±s,n＝20)

與對(duì)照組比較,F＝13.32～85.36,?q＝3.58～47.31,P＜0.05;與模型組比較,＃q＝3.58～92.39,P＜0.05。

組 別Cr(ρ/mg·L-1) BUN(c/mmol·L-1) 7天28天49天7天28天49天對(duì) 照 組5.2±0.3 5.8±0.3 5.2±0.2 90.71±0.33 91.57±0.45 91.56±0.39模 型 組 37.3±1.4?30.1±1.3?24.2±1.1?135.21±10.54?135.14±10.13?128.74±9.41?百令膠囊組 14.5±1.1＃8.1±0.5＃6.4±0.3＃129.69±8.52 92.52±2.42＃90.72±0.67＃

3 討 論

DKD是晚期糖尿病最重要的微血管并發(fā)癥之一,是終末期腎病的主要原因,也是糖尿病的主要死因[4]。主要表現(xiàn)為蛋白尿,漸進(jìn)性腎功能損害、高血壓、水腫等,死亡率高。因此,對(duì)DKD的診治顯得尤為重要,而中醫(yī)藥在控制DKD的癥狀及延緩病情發(fā)展方面有著重要的作用,篩選開發(fā)治療DKD的生物資源對(duì)糖尿病病人的康復(fù)和生活質(zhì)量的提高具有重要意義。

百令膠囊富含氨基酸、多糖、有機(jī)酸、多種微量元素、核苷、肽類及甾醇類等多種化學(xué)成分,主要成分是蟲草多糖,具有多種藥理活性,包括保護(hù)肝腎功能、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用等?？赏ㄟ^調(diào)節(jié)人體免疫功能、調(diào)控腎臟固有細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)合成,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、生長因子及改善人體代謝機(jī)制,發(fā)揮減少尿蛋白、改善腎功能及減輕腎臟病理改變等多種作用[5]。

本研究結(jié)果顯示,百令膠囊組在治療后U-MA排泄量逐漸下降,且明顯低于模型組,提示百令膠囊能有效降低U-MA水平,這與胡楊青等[6]利用人工蟲草干預(yù)大鼠后,可明顯減少大鼠24 h的U-MA水平,從而保護(hù)腎臟,延緩腎小球硬化的進(jìn)程一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示,百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與減少炎性遞質(zhì)的產(chǎn)生,增加腎血流量及腎小球?yàn)V過率,改善微循環(huán),降低U-MA及腎小管對(duì)Cr及BUN的重吸收進(jìn)而改善腎功能有關(guān)[7]?，F(xiàn)代藥理學(xué)與臨床研究亦證明,百令膠囊可降低糖尿病大鼠LRW及RWI,具有延緩腎小球基底膜增厚及足突融合,抑制腎間質(zhì)病變等保護(hù)腎臟的作用。與本文研究結(jié)果一致。

總之,本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎臟有一定的保護(hù)及治療作用,下一步我們將采用免疫學(xué)方法觀察百令膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎小管再生情況的影響。

[1]田劭丹,李冬云,侯麗,等.百令膠囊抗腫瘤研究進(jìn)展[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2006,20(1):7-8.

[2]張麗,李素梅,葉山東,等.安體舒通對(duì)2型糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對(duì)腎組織mcp-1表達(dá)的影響[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志2010,39(1):9-10.

[3]周曉彬.醫(yī)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件PPMS 1.5在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中的應(yīng)用價(jià)值[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,47(6):504-506.

[4]王麗萍,朱本章.糖尿病腎病71例死因分析[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2009,38(3):371-372.

[5]陳曉燕.百令膠囊的藥理與臨床研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2009,15(2):92.

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[7]高清華,王銘,張瑞杰,等.銀杏達(dá)莫聯(lián)合百令膠囊治療早期糖尿病腎病的臨床研究[J].齊魯護(hù)理雜志,2010,16(21):123.

(本文編輯 厲建強(qiáng))

PROTECTIVE EFFECT OF BAILING CAPSULE ON THE KIDNEY OF EXPERIMENTAL DIABETIC RATS

SONG Yanli,LIU Xinglin,CHEN Desen (Disinfection Centre,Taihe Affiliated Hospital,Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)

ObjectiveTo observe the protection of Bailin capsule on the kidney of experimental diabetic rats and explore its mechanism.MethodsForty-five rats were evenly randomized to control group,model group and Bailing capsule group.A diabetes model was created in rats in model group and Bailing capsule group by intraperitoneal injection of streptozotocin(25 mg/ kg),those in the control group were injected only 0.5 m L citric acid buffer solution.One week later,the rats in the model group started to receive intragastric Bailing capsule(10 mg/kg,once a day,for 49 days),those in the control group and model group were given intragastric normal saline(10 m L/kg,once a day,for 49 days).On days 7,28,and 49,five rats in each group were killed in each time,the weight of the kidney was measured,and the quality index calculated;the blood samples were taken from caudal vein for blood sugar,creatinine and blood urea nitrogen detection,and 24-hour urine was collected for detecting urinary albumin.ResultsThe kidney quality,kidney index,serum creatinine,urea nitrogen and urinary albumin levels(on days 7,28 and 49)in rats of Bailing capsule group were lower than that of the control group,the differences were significant(F＝13.32-85.36,q＝3.58-92.39,P＜0.05),the difference of blood sugar between the two groups was not significant(P＞0.05).ConclusionBailing capsule shows protection on the kidney of experimental diabetic rats,its mechanism may be related to preventing pathologic changes of renal interstitial,correcting protein and lipid metabolism,and delaying the deterioration of kidney function, and thus improving the renal function.

bailing capsule;urinary microalbumin;blood glucose;blood urea nitrogen

R587.1

A

1008-0341(2014)01-0035-03

10.13362/j.qlyx201401013

2013-03-16;

2013-08-22

宋艷麗(1971-),女。

陳德森(1970-),男,副教授。