TSDH與乳腺癌細(xì)胞G期分裂關(guān)系探討

摘要：目的 探討分析TSDH藥物與乳腺癌的G期細(xì)胞分裂的關(guān)系。方法 誘導(dǎo)裸鼠產(chǎn)生腫瘤硬塊，采用隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組兩組。觀察組注射0.5ug/ml的TSDH藥物，對照組注射DMSO藥物25ul。結(jié)果 觀察組的MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞的存活率為38.0%，MCF-7腫瘤細(xì)胞的存活率為36.4%，而對照組分別為68.7%、64.4%，觀察組的MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。將0.5ug/ml的TSDH藥物處理不同時間段的腫瘤細(xì)胞，可觀察到MDA-MB-231細(xì)胞12h后63.76%的細(xì)胞停滯于G期，62.54%的MCF-7細(xì)胞24h后停滯于G期。結(jié)論 TSDH藥物可以抑制乳腺癌細(xì)胞G期的細(xì)胞分裂，使乳腺癌細(xì)胞株停滯在細(xì)胞分裂的G期。

關(guān)鍵詞：TSDH；乳腺癌；MCF-7；MDA-MB-231

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺體上皮組織的一種惡心腫瘤，多發(fā)生在24～54歲的女性中，是威脅女性身體健康的常見腫瘤之一。雖然說，乳腺并不是維持人體正常生命活動的必需器官，而且原位的乳腺癌不會致命，但是，由于正常的乳腺細(xì)胞失去了正常的生理活性，細(xì)胞間的相互連接會變得松散、容易脫落[1]。癌細(xì)胞一旦脫落，便可以隨著機體的血液循環(huán)或者淋巴循環(huán)散播至全身組織中，導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散，危及人體的生命健康?，F(xiàn)對誘導(dǎo)生成的人類乳腺癌細(xì)胞株注射TSDH藥物，結(jié)果良好，現(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 取4～5w大的雄性BALB/c老鼠，在進(jìn)行實驗前，將所有老鼠裝籠培養(yǎng)，每5只放在一籠，放置在動物房中培養(yǎng)1～2w，并以自由取食的方式為BALB/c老鼠提供飲水，所有老鼠均購買自國科會實驗動物中心[2]。個體間沒有差異，可作為本次試驗動物。

1.2 方法 細(xì)胞培養(yǎng)：將MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞株培養(yǎng)在含有10%的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，放在10cm的培養(yǎng)皿中，37°恒溫、含有5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3d更換一次培養(yǎng)液，細(xì)胞生長至九分滿時，再做繼代培養(yǎng)[3]。誘導(dǎo)腫瘤的生成：7d后，將大約5*106個MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞懸浮在200ul的培養(yǎng)液中，注射到裸鼠的背部，培養(yǎng)1w，便可見小鼠背部的腫瘤硬塊。將誘導(dǎo)成功的裸鼠隨機分為觀察組和對照組，每5只為一組[4]。對于觀察組，按裸鼠體重10mg/kg的比例注射0.5ug/ml的TSDH藥物，注射3次/w藥物，連續(xù)注射4w。對于對照組，則注射DMSO藥物25ul，注射3次/w藥物，連續(xù)注射4w。在注射藥物期間，定期觀察并記錄兩組裸鼠的體重變化。4w后，取出老鼠背部的腫瘤，進(jìn)行觀察分析。細(xì)胞周期的分布：將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段（3h、6h、9h、12h、24h）的腫瘤細(xì)胞，通過酒精固定的方法進(jìn)行固定，收集好不同時間段處理的細(xì)胞，再用PI的方法將細(xì)胞進(jìn)行染色觀察，分析腫瘤細(xì)胞的周期分布[5]。

1.3評價標(biāo)準(zhǔn) 將兩組老鼠背部腫瘤的MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行對比

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

通過4w的藥物注射及培養(yǎng)，觀察組的MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞的存活率為38.0%，MCF-7腫瘤細(xì)胞的存活率為36.4%，而對照組的MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞的存活率為68.7%，MCF-7腫瘤細(xì)胞的存活率為64.4%，觀察組的人類乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

注：觀察組的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞明顯受到抑制，兩組對比，P<0.01，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

通過表1的數(shù)據(jù)結(jié)果可以得出，TSDH藥物可以抑制人類乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的分裂。通過將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段（6h、9h、12h、24h）的腫瘤細(xì)胞，TSDH藥物處理MDA-MB-231細(xì)胞12h后可觀察到63.76%的細(xì)胞停滯于G期，處理MCF-7細(xì)胞24h后可觀察到62.54%的細(xì)胞停滯于G期。

3討論

通過細(xì)胞周期的分裂，細(xì)胞才能分裂成兩個子細(xì)胞，因此，細(xì)胞周期是細(xì)胞生長所必需經(jīng)歷的過程。根據(jù)生物學(xué)理論，可將細(xì)胞的分裂增殖分為G0、G1、G2、S、M phase五個時期。Gap0（G0）期是細(xì)胞離開細(xì)胞周期的分裂，處于永久性或暫時性停止生長的休眠期；Gap1（G1）期是細(xì)胞代謝活化生長的時期，這個時期，細(xì)胞會產(chǎn)生大量的蛋白質(zhì)和RNA，以供S期染色體復(fù)制時使用。Gap2（G2）期，這個時期細(xì)胞會繼續(xù)合成蛋白質(zhì)和RNA；Synthesis（S）phase期是進(jìn)行染色體復(fù)制，使分裂后形成兩個相似的子細(xì)胞；Mitosis（M）phase期細(xì)胞將不會繼續(xù)合成蛋白質(zhì)和RNA，通過有絲分裂分裂成兩個子細(xì)胞[6]。

通過數(shù)據(jù)可以得知TSDH藥物誘使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期G期停滯。而其本質(zhì)原因是在TSDH藥物的誘使下，抑制了D type cyclins蛋白、cyclin E蛋白和CDK4蛋白產(chǎn)生，進(jìn)而使得CDK4和D type cyclins蛋白反應(yīng)形成的D type cyclins-CDK4復(fù)合物減少、復(fù)合物活性降低，致使在細(xì)胞Rb磷酸化的過程中不能正常釋放基因轉(zhuǎn)錄所必需的E2F轉(zhuǎn)錄因子[7]。另外，在TSDH藥物的作用下，p27kip1蛋白的數(shù)量也明顯增多，正常情況下，處于活化態(tài)的cyclinE-CDK2復(fù)合物會將與p27kip1結(jié)合了的cyclinE-CDK2復(fù)合物磷酸化，使磷酸化了的復(fù)合物被Jab1蛋白重新辨認(rèn)傳遞到細(xì)胞質(zhì)中，再與其他的細(xì)胞因子結(jié)合，使p27kip1脫離cyclinE-CDK2復(fù)合物，從而繼續(xù)進(jìn)入S期調(diào)控染色體的復(fù)制[8]。但是在TSDH藥物的作用下，p27kip1蛋白的數(shù)量明顯增多，明顯增加p27kip1結(jié)合cyclinE-CDK2復(fù)合物的數(shù)量，使磷酸化的困難程度增加，p27kip1脫離cyclinE-CDK2復(fù)合物的可能性大大減小，不能進(jìn)入細(xì)胞分別周期的下一個時期。因此，在TSDH藥物的作用下，可使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期G期。

綜上所述：通過將0.5ug/ml的TSDH藥物分別處理不同時間段的腫瘤細(xì)胞，可觀察到MDA-MB-231細(xì)胞12h后63.76%的細(xì)胞停滯于G期，62.54%的MCF-7細(xì)胞24h后停滯于G期，因此，在TSDH藥物的誘使下，人類乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞會在細(xì)胞周期中的G期發(fā)生細(xì)胞生長周期的停滯。

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