內(nèi)蒙古通遼地區(qū)VEGF受體2基因與冠心病的關(guān)聯(lián)研究

摘要：目的 本研究擬在內(nèi)蒙古通遼地區(qū)的漢族人群中驗(yàn)證血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）受體2（KDR）基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)。方法 研究對(duì)象為2010年1月～2011年10月通遼市疾病預(yù)防控制中心收集的200例漢族冠心病患者和200例漢族健康人作為對(duì)照。基因分型采用PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶消化的方法，并通過(guò)抽樣測(cè)序驗(yàn)證。同時(shí)通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血漿KDR水平。結(jié)果 KDR的3個(gè)SNP位點(diǎn)均與冠心病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，在漢族病例對(duì)照人群中SNP-604的OR=1.41（P<0.05），SNP1192的OR=1.39（P<0.05），SNP1719的OR=1.47（P<0.05）。ELISA結(jié)果顯示SNP-604CC基因型攜帶者血漿中KDR蛋白水平顯著低于SNP-604TT基因型攜帶者。結(jié)論 KDR的SNP-604和位于編碼區(qū)的SNP1192和SNP1719通過(guò)調(diào)節(jié)KDR的表達(dá)去影響KDR與VEGF結(jié)合率，從而與冠心病遺傳易感性相關(guān)。

關(guān)鍵詞：KDR；變異；冠心病

至今為止，對(duì)冠心病的病理機(jī)制及危險(xiǎn)因素的研究仍然是醫(yī)學(xué)界的一大挑戰(zhàn)。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)被廣泛認(rèn)為是冠心病發(fā)病進(jìn)程中最重要的始動(dòng)環(huán)節(jié)[1]。在急性冠脈綜合征的患者中，患者血管壁有相當(dāng)程度的內(nèi)膜損傷[2]。內(nèi)皮細(xì)胞的完整性和功能活性在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化及其并發(fā)癥的發(fā)生過(guò)程中起了至關(guān)重要的作用[3]。在內(nèi)皮損傷修復(fù)過(guò)程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）及其受體系統(tǒng)發(fā)揮了關(guān)鍵作用。VEGF及其受體在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高表達(dá)，并與斑塊破裂有關(guān)，參與了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程。KDR是2型VEGF受體，在多種細(xì)胞中表達(dá)，與VEGF結(jié)合后在血管生成和內(nèi)皮損傷修復(fù)中起了關(guān)鍵作用[4]，參與了冠心病的發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。故KDR的基因多態(tài)性可能與冠心病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。數(shù)據(jù)庫(kù)顯示KDR基因含有多個(gè)SNP位點(diǎn)，生物信息學(xué)提示某些SNP位點(diǎn)可能影響KDR蛋白分子的表達(dá)及功能。本研究中，我們選取KDR基因啟動(dòng)子區(qū)天然存在的多態(tài)性位點(diǎn)SNP-604以及編碼區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)SNP1192和SNP1719，研究其與冠心病的個(gè)體遺傳易感性。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1樣本的入選 病例-對(duì)照人群樣本來(lái)源于2010年1月～2011年10月通遼市疾病預(yù)防控制中心收集的200例漢族冠心病患者和200例漢族健康人。入選標(biāo)準(zhǔn)：冠心病患者均通過(guò)冠狀動(dòng)脈造影檢查確認(rèn)，至少有一支冠狀動(dòng)脈狹窄大于50%。同時(shí)記錄詳細(xì)的心絞痛和心肌梗塞病史。在這些患者中，65%發(fā)生過(guò)心肌梗塞，心肌梗塞的判斷標(biāo)準(zhǔn)是典型的心電圖改變或血清酶學(xué)升高。對(duì)照組人群的冠狀動(dòng)脈狹窄沒(méi)有超過(guò)20%，并且沒(méi)有其他的血管性疾病。

1.1.2問(wèn)卷調(diào)查和血標(biāo)本采集 經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的工作人員對(duì)冠心病患者與對(duì)照人群進(jìn)行心腦血管病的標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)卷調(diào)查，內(nèi)容包括被調(diào)查者的社會(huì)學(xué)特征、飲食、吸煙和飲酒等生活習(xí)慣、高血壓史及服降壓藥史、糖尿病史、神經(jīng)疾病史等，由其本人或家庭成員接受問(wèn)卷調(diào)查。進(jìn)行詳細(xì)的體征測(cè)量，并取尿和空腹12h靜脈血，檢測(cè)相關(guān)的生化指標(biāo)。

1.2基因測(cè)定 采用PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶消化的方法檢測(cè)各樣本的SNP位點(diǎn)。見表1。

1.3 ELISA方法檢測(cè)血漿KDR蛋白水平 為了分析KDR基因SNP-604對(duì)血漿KDR的影響，我們?cè)?1個(gè)正常人血漿中檢測(cè)了KDR蛋白的濃度。21個(gè)樣本從對(duì)照組中隨機(jī)挑取，無(wú)任何傳統(tǒng)心血管病的危險(xiǎn)因素，血生化指標(biāo)正常，基因型分別是7個(gè)TC，7個(gè)TT，7個(gè)CC。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒的說(shuō)明書操作。

2 結(jié)果

2.1人群一般臨床資料 病例-對(duì)照組人群的主要臨床資料如表2所示，冠心病的樣本中糖尿病史、高血壓史、吸煙明顯在病例組高于對(duì)照組（P<0.01）。

2.2 ELISA方法檢測(cè)血清KDR蛋白水平 應(yīng)用ELISA分析方法得出SNP-604CC基因型攜帶者血清中KDR蛋白水平顯著低于SNP-604TT。見表3。

2.3 KDR基因的三個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型頻率與冠心病的關(guān)聯(lián)分析 KDR的基因型頻率分布見表4，均符合Hardy-Weinberg平衡。對(duì)這所有的3個(gè)SNP而言，只攜帶一個(gè)危險(xiǎn)等位基因型的人，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著高于不攜帶危險(xiǎn)等位基因的人，但是與攜帶2個(gè)危險(xiǎn)等位基因的純合子相比，無(wú)明顯差異，提示存在顯性遺傳效應(yīng)，因此，我們采用顯性模型來(lái)分析這3個(gè)SNP與冠心病的關(guān)系。結(jié)果顯示，在冠心病病例組中，所有這3個(gè)SNP的危險(xiǎn)等位基因的純合子基因型和雜合子基因型頻率均顯著高于正常對(duì)照組，而危險(xiǎn)等位基因的基因頻率同樣在病例組中高于正常對(duì)照組。利用多元回歸分析對(duì)年齡、性別、吸煙等危險(xiǎn)因素進(jìn)行校正以后，這種相關(guān)性依然存在。

3 討論

病例-對(duì)照研究結(jié)果顯示KDR基因3個(gè)SNP位點(diǎn)SNP-604、SNP1192、SNP1719均與冠心病相關(guān)。在對(duì)一些傳統(tǒng)的冠心病危險(xiǎn)因素進(jìn)行校正以后，這3個(gè)SNP與冠心病的相關(guān)性依然存在，說(shuō)明這3個(gè)SNP確實(shí)可以作為冠心病獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。研究結(jié)果顯示，攜帶突變型等位基因的漢族冠心病患者具有更高的冠心病遺傳易感性。

異常的血管生成以及內(nèi)皮細(xì)胞損害或者功能障礙可增加冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。VEGF和KDR通過(guò)很多機(jī)制參與影響冠心病的發(fā)病過(guò)程。本研究的這三個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型頻率與HapMap報(bào)道一致。KDR基因SNP-6O4T>C下調(diào)KDRmRNA水平，同時(shí)降低血清KDR蛋白水平。SNP1192G>A和SNP1719T>A位點(diǎn)均可導(dǎo)致VEGF與KDR的結(jié)合效率降低，在生物學(xué)效應(yīng)上具有顯著意義。我們可以推測(cè)KDR功能活性的降低與血管功能障礙有關(guān)，包括內(nèi)皮細(xì)胞損傷，損傷部位內(nèi)皮細(xì)胞的存活，VEGF介導(dǎo)的抗細(xì)胞凋亡作用以及異常的血管修復(fù)。所有的這些因素均可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。

4 結(jié)論

KDR基因的3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)SNP-604，SNP1192和SNP1719通過(guò)影響KDR的表達(dá)和功能，與冠心病相關(guān)，并可作為內(nèi)蒙古地區(qū)冠心病新的遺傳危險(xiǎn)標(biāo)記。

參考文獻(xiàn)：

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