化學(xué)發(fā)光與ELISA法檢測(cè)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物的方法學(xué)比較分析

摘要：目的 比較ELISA法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物的一致性和差異性。方法 分別采用ELISA方法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)患者血清進(jìn)行乙肝血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc），對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)分析，比較此兩種方法的一致性和差異性。結(jié)果 乙肝常見模式中，兩種方法測(cè)定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM結(jié)果符合率分別為92.31%、92.31%、95.38%、、92.31%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，抗-HBe符合率為81.54%，在兩種檢測(cè)方法有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；乙肝少見模式中，用ELISA法測(cè)單獨(dú)HBsAg陽性的5例標(biāo)本用化學(xué)發(fā)光法測(cè)得5例HBsAg全部陽性，但其中1例抗-HBe陽性。ELISA法測(cè)單獨(dú)抗-HBe陽性的11例標(biāo)本中用化學(xué)發(fā)光法測(cè)得11例抗-HBe全部陽性，其中2例HBsAg弱陽性，1例抗-HBs強(qiáng)陽性，1例抗-HBs弱陽性。用化學(xué)發(fā)光法測(cè)得單獨(dú)抗-HBs>1000IU/L的5例標(biāo)本用ELISA法測(cè)得全部陰性。用化學(xué)發(fā)光法測(cè)得單獨(dú)抗-HBs>10IU/L且<1000IU/L的6例標(biāo)本用ELISA法測(cè)得全部陰性。用ELISA法測(cè)得單獨(dú)HBeAg陽性且經(jīng)DNA擴(kuò)增小于500拷貝的4例標(biāo)本用化學(xué)發(fā)光法測(cè)得全部為陰性。結(jié)論 乙肝普通模式中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM用ELISA法和化學(xué)發(fā)光法一致性較好，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗-HBe更準(zhǔn)確，更靈敏；乙肝少見模式的檢測(cè)中ELISA法的靈敏度仍不夠高，可導(dǎo)致某幾項(xiàng)血清標(biāo)志物的錯(cuò)報(bào)和漏報(bào)；不同目的的檢測(cè)可以選用不同的方法：ELISA法可用于健康體檢，術(shù)前肝炎病毒篩查等；化學(xué)發(fā)光法可用于肝炎患者的疾病監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)用藥、療效觀察及判斷預(yù)后等方面。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒；血清標(biāo)志物；ELISA；化學(xué)發(fā)光法

病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大，我國又為乙肝的高發(fā)區(qū)，約占世界HBV感染者的一半。乙肝病毒的病原體不僅具有傳染性，還可能導(dǎo)致發(fā)展成肝硬化，甚至肝癌，所以HBV標(biāo)記物的早期、準(zhǔn)確、定量檢測(cè)對(duì)乙肝臨床診斷、療效觀察及預(yù)防具有重要意義。目前國內(nèi)檢測(cè)HBV-M使用較多的仍是占主導(dǎo)地位的ELISA法。隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)的發(fā)展，其在免疫學(xué)檢驗(yàn)方面的應(yīng)用日益受到人們的重視?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物具有高靈敏度、寬線性、反應(yīng)快，影響因素少，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。因此，化學(xué)發(fā)光法更適用于需要進(jìn)行定量、半定量檢測(cè)的臨床患者標(biāo)本，顯示出很好的應(yīng)用前景。

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肝炎標(biāo)志物與ELISA法有何差異尚無明確的結(jié)論。本研究分別用化學(xué)發(fā)光和ELISA法檢測(cè)乙型肝炎的血清學(xué)標(biāo)志物，比較分析兩種方法測(cè)試結(jié)果的一致性和差異性，為乙型肝炎的篩查、臨床診斷、指導(dǎo)用藥及其判斷預(yù)后等不同目的的檢測(cè)選擇一種更為快速、準(zhǔn)確且節(jié)約的方法。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年10月～2014年3月就診的HBV感染者96例，其中男52例，女44例；年齡23歲～76歲，平均47歲。其中單獨(dú)HBsAg陽性5例，單獨(dú)抗-HBe陽性11例，單獨(dú)抗-HBs>1000IU/L的5例，單獨(dú)抗-HBs>10IU/L但<1000IU/L6例，單獨(dú)HBeAg陽性且DNA擴(kuò)增<500拷貝4例。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器美國雅培全自動(dòng)酶免分析儀ARCHITECT-i2000。

1.2.2試劑上?？迫A生物技術(shù)有限公司肝炎標(biāo)志物ELISA試劑盒；ARCHITECT-i2000 SR乙肝標(biāo)志物配套試劑。

1.3乙肝病毒血清標(biāo)志物的檢測(cè)

1.3.1 ELISA法所用試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司提供，于有效期內(nèi)使用，操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按試劑要求進(jìn)行，并記錄結(jié)果。

1.3.2化學(xué)發(fā)光法將所收集到的血清用美國雅培全自動(dòng)酶免分析儀ARCHITECT-i2000進(jìn)行檢測(cè)，乙肝六項(xiàng)標(biāo)志物的定值質(zhì)控血清購自雅培公司，操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按試劑要求進(jìn)行并記錄結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)化學(xué)發(fā)光法與ELISA法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1乙肝結(jié)果比較乙肝兩種方法測(cè)定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgM結(jié)果符合率分別為92.31%、92.31%、95.38%、81.54%、92.31%。經(jīng)配對(duì)χ2檢驗(yàn)HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM兩種檢測(cè)方法結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。抗-HBe兩種檢測(cè)方法結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。（見表1）。

注：*表示兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。

3討論

常規(guī)的乙型肝炎病毒免疫標(biāo)志物的血清學(xué)檢查為五項(xiàng)即：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，是臨床診斷、治療、分析和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要依據(jù)。HBV標(biāo)記物的早期、準(zhǔn)確、定量檢測(cè)對(duì)乙肝臨床診斷、療效觀察及預(yù)防具有重要的意義。HBV-M的變化是評(píng)估乙型肝炎感染后病情轉(zhuǎn)歸的重要依據(jù)，也是抗病毒治療的療效監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一。

目前國內(nèi)檢測(cè)HBV-M使用較多的仍是占主導(dǎo)地位的ELISA法。ELISA法的優(yōu)點(diǎn)在于它操作簡單、適合于大批量標(biāo)本的測(cè)定，并且成本低廉，其靈敏度也較好。但在臨床檢測(cè)中的ELISA法存在以下幾個(gè)方面的缺點(diǎn)：①操作過程中各個(gè)微孔反應(yīng)板的間隔小，容易污染，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果；②無法定量，靈敏度相對(duì)較低；③由檢測(cè)原理帶來的前帶現(xiàn)象無法解決；④無法完成HBV感染的動(dòng)態(tài)觀察以及低水平HBV感染指標(biāo)檢測(cè)，只能滿足臨床對(duì)單純陽、陰性結(jié)果的判斷。隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)的發(fā)展，其在免疫學(xué)檢驗(yàn)方面的應(yīng)用日益受到人們的重視?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測(cè)定方法，簡稱CIA，是以吖啶酯（AE）及其衍生物標(biāo)記單抗，AE分子中的活化基因與抗原或抗體末端氨基共價(jià)結(jié)合后，生成的標(biāo)記物化學(xué)發(fā)光活性強(qiáng)、穩(wěn)定性好?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物具有高靈敏度、寬線性、反應(yīng)快，影響因素少，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

譚璐等[2]比較了化學(xué)發(fā)光法和ELISA法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者靈敏度基本相似，對(duì)HBsAg，抗-HBs，HBeAg及抗-HBe的檢測(cè)相互符合率均在95%以上，但化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清乙肝標(biāo)志物的自動(dòng)化程度比ELISA法高，并能定量檢測(cè)HBsAg和抗-HBs，可動(dòng)態(tài)觀察療效和監(jiān)測(cè)病情。彭仕芳[3]等對(duì)1140例乙型肝炎患者血清HBV標(biāo)志物用化學(xué)發(fā)光法和ELISA兩種方法檢測(cè)HBsAg、HBeAg、抗-HBc和抗-HBe四項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)各指標(biāo)的陽性率均高于ELISA法，化學(xué)發(fā)光法對(duì)血清HBV標(biāo)志物的檢出陽性率高于ELISA法，特別是對(duì)HBeAg和抗-HBe指標(biāo)的檢測(cè)。

本文兩種方法測(cè)定肝炎標(biāo)志物，只有抗-HBe在兩種檢測(cè)方法中有差異（P<0.05）。ELISA法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝的一致性較好，化學(xué)發(fā)光法靈敏度高于ELISA法，與國內(nèi)研究結(jié)果相一致[1，2]。ELISA法在檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物五項(xiàng)指標(biāo)，特別是抗-HBe，抗-HBc濃度稍高于正常時(shí)，易出現(xiàn)漏檢，而化學(xué)發(fā)光法法可彌補(bǔ)這點(diǎn)不足?；瘜W(xué)發(fā)光法不僅能對(duì)HBsAg和抗-HBs進(jìn)行定量測(cè)定，而且靈敏度和特異性更高，可減少低濃度HBsAg、HBeAg感染患者的漏診[4]。這不僅是方法學(xué)上的進(jìn)步，更重要的在于其能評(píng)估HBV感染后病情轉(zhuǎn)歸及抗病毒治療療效等，具有重要的臨床意義?；瘜W(xué)發(fā)光法由于使用全自動(dòng)儀器及配套試劑，使人為因素減至最低，提高了方法的穩(wěn)定性和結(jié)果的重復(fù)性，使批內(nèi)差異與批間差異都較小。而ELISA法由于受孵育時(shí)間、洗板等因素的影響，容易導(dǎo)致非特異性反應(yīng)的發(fā)生，造成結(jié)果的誤差。在HBsAg、抗-HBs的檢測(cè)中，化學(xué)發(fā)光法為定量結(jié)果，其能夠?qū)C(jī)體是否真正具有抵抗乙肝病毒的免疫力做出正確的評(píng)價(jià)，避免誤導(dǎo)。本文還發(fā)現(xiàn)，抗-HBs定量在10mIU/L～100mIU/L之間的標(biāo)本，ELISA結(jié)果為陽性，但此時(shí)抗體對(duì)HBV并無中和作用，仍有感染HBV的危險(xiǎn)。只有\(zhòng)"定量\"在100mIU/L以上時(shí)才具有抵抗HBV入侵的作用[5]，因此對(duì)乙肝疫苗免疫力的評(píng)價(jià)和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義。ELISA法的操作簡單、適合于大批量標(biāo)本的測(cè)定，且成本低廉，靈敏度也很好，故不能完全淘汰。所以，ELISA方法檢測(cè)為陽性的標(biāo)本，應(yīng)以適宜的方法復(fù)查，以減少誤報(bào)。

綜上，兩種方法各有其特點(diǎn)且都能滿足臨床需要，從方法學(xué)角度和自動(dòng)化程度看，化學(xué)發(fā)光法技術(shù)優(yōu)于ELISA法，但由于儀器、試劑較昂貴，不同目的檢測(cè)應(yīng)選用不同的方法：ELISA法可用于健康體檢，術(shù)前肝炎病毒篩查等；化學(xué)發(fā)光法可用于肝炎患者的疾病監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)用藥、療效觀察及判斷預(yù)后等方面。

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[3]彭仕芳.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝標(biāo)志物的比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15（3）：28-35.

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編輯/許言