不同試劑盒檢測系統(tǒng)血清乳酸脫氫酶結(jié)果的偏倚評估

摘要：目的 通過對不同檢測試劑盒檢測血清乳酸脫氫酶測定進(jìn)行方法比對和偏倚評估，為不同實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的互認(rèn)和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法 參考NCCLS 的EP9-A2文件，以O(shè)LYMPUS AU5421全自動生化分析儀、國內(nèi)某一品牌試劑（試劑1）、貝克曼原裝配套試劑（試劑2）、貝克曼原裝復(fù)合校準(zhǔn)品和伯樂定值質(zhì)控品組成的檢測系統(tǒng)，并用患者新鮮血清（正常、異常、高度異常）檢測乳酸脫氫酶（LDH）進(jìn)行比較分析，計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法（ Y）和比較方法（X ）之間的相對偏差（%SE） ，以美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)（CLIA′88）規(guī)定的室間質(zhì)量評價(jià)允許誤差范圍為標(biāo)準(zhǔn)，判斷不同檢測試劑盒測定結(jié)果的可比性。結(jié)果 不同試劑盒檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：異常標(biāo)本，特別是高度異常標(biāo)本，其差異巨大，無法接受。結(jié)論 當(dāng)用某一試劑時(shí)，應(yīng)進(jìn)行比對和偏倚評估，判斷其臨床可接受性能，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可比性。

關(guān)鍵詞：不同試劑盒；血清乳酸脫氫酶；比對研究

兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的國際標(biāo)準(zhǔn)ISO / IEC 17025[1]（檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求）和ISO /15189[2]（醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的專用要求）都對檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性和可比性提出了明確要求，強(qiáng)調(diào)方法學(xué)比較試驗(yàn)（比對試驗(yàn)）是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和患者標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果可比性的重要途徑。但比對試驗(yàn)如何進(jìn)行，如何評估不同檢測系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果的偏差，如何判斷不同檢測系統(tǒng)結(jié)果的可比性，是目前檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)界關(guān)注和討論的熱點(diǎn)。本研究參考美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）的EP9-A2文件[3]，對不同檢測試劑盒血清乳酸脫氫酶測定進(jìn)行比對和偏倚評估，為實(shí)現(xiàn)血清酶測定的溯源性和可比性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，糾正許多實(shí)驗(yàn)室只考慮節(jié)約成本，不對異常結(jié)果關(guān)注，只有通過異常標(biāo)本的檢測才能發(fā)現(xiàn)試劑質(zhì)量的好壞，從而為臨床提供可靠的結(jié)果。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1檢測系統(tǒng)的組成 以O(shè)LYMPUS AU5421生化分析儀、國內(nèi)某一品牌試劑（試劑1）、貝克曼原裝配套試劑（試劑2）和貝克曼復(fù)合酶校準(zhǔn)品和伯樂質(zhì)控品組成的檢測系統(tǒng)。

1.1.2樣本制備 常規(guī)工作后收集低、中、高、超高的不同濃度新鮮血清4份，分裝于帶蓋的清潔試管內(nèi)。

1.2方法

1.2.1目標(biāo)檢測系統(tǒng)使用的是以O(shè)LYMPUS AU5421生化分析儀、貝克曼原裝配套試劑（試劑2）、貝克曼原裝復(fù)合校準(zhǔn)品、伯樂質(zhì)控品、常規(guī)工作后收集低、中、高、超高的不同濃度新鮮血清4份組成的檢測系統(tǒng)。

1.2.2比較檢測系統(tǒng)使用的是以O(shè)LYMPUS AU5421生化分析儀、國內(nèi)某一品牌試劑（試劑1）、貝克曼原裝復(fù)合校準(zhǔn)品、伯樂質(zhì)控品、常規(guī)工作后收集低、中、高、超高的不同濃度新鮮血清4份組成的檢測系統(tǒng)。

1.2.3檢測參數(shù)按照試劑廠家提供。

1.2.4實(shí)驗(yàn)方法不同試劑方法間的對比試驗(yàn)。

1.2.5測定項(xiàng)目乳酸脫氫酶（LDH）。

1.2.6實(shí)驗(yàn)前對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)與保養(yǎng)，各實(shí)驗(yàn)室按常規(guī)方法進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控在控時(shí)進(jìn)行盲樣測定。每個(gè)項(xiàng)目的檢測嚴(yán)格按廠商試劑盒的說明書進(jìn)行。收到樣品后2h內(nèi)測定完畢。

1.3數(shù)據(jù)收集與處理

1.3.1不采用已明確有人為誤差的結(jié)果。

1.3.2按EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群值檢查。

1.3.3比較方法（X）測定范圍的檢驗(yàn)：X的分布范圍是否合適，可用相關(guān)系數(shù)（r）作粗略估計(jì)，如r≥0.975或r2≥0.95，則認(rèn)為X范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠；如r<0.975，則使用部分個(gè)別差異法計(jì)算平均偏差。

1.3.4計(jì)算線性回歸方程：實(shí)驗(yàn)方法Y=bX+a。

1.3.5計(jì)算方法間的系統(tǒng)誤差：根據(jù)臨床使用要求，將各個(gè)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc代入回歸方程，計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法（Y）與比較方法（X）之間的系統(tǒng)誤差（SE）。

SE=|Yc-Xc|

SE（%）=（SE/Xc）×100%

1.3.6不同檢測系統(tǒng)間測定結(jié)果吸光度的比較。

1.4臨床可接受性能判斷 以CLIA′88對室間評估的允許誤差為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差（SE%）不大于允許誤差的1/2屬臨床可接受水平，即不同檢測系統(tǒng)間的測定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié)果

2.1不同檢測系統(tǒng)血清乳酸脫氫酶測定結(jié)果的比較 見表1。

2.2不同檢測系統(tǒng)血清酶測定結(jié)果的相關(guān)性分析 以試劑2檢測系統(tǒng)作為目標(biāo)檢測系統(tǒng)，試劑1檢測系統(tǒng)與其進(jìn)行相關(guān)與回歸分析，各檢測系統(tǒng)回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表2。各檢測系統(tǒng)間的相關(guān)系數(shù)均小于0.975，說明回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距不可靠，不可以用它們?nèi)ス烙?jì)不同檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差，并以醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差來判斷不同檢測系統(tǒng)間是否具有可比性。

2.3檢測系統(tǒng)可接受性能的評價(jià) 以試劑2作為目標(biāo)檢測系統(tǒng)，將不同酶的醫(yī)學(xué)決定水平濃度代入各自相應(yīng)的回歸方程，用以判斷各檢測系統(tǒng)的臨床可接受性能，見表3。

2.4兩種檢測試劑對于不同酶濃度在340nm檢測吸光度見表4。

3 討論

血清酶測定是臨床上最常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一，不同實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果間存在著較大差異。為實(shí)現(xiàn)血清酶測定結(jié)果的可比性，國際臨床化學(xué)聯(lián)合會（IFCC）等不同的專業(yè)學(xué)會先后提出了酶活性測定的推薦方法，在很大程度上改進(jìn)了測定結(jié)果的一致性。2002年，IFCC又提出了ALT、AST、GGT、LDH、CK測定新的參考方法，從根本上提出了酶活力檢測必須使用完整的檢測系統(tǒng)、依靠校準(zhǔn)品的定值，才能使酶檢測結(jié)果實(shí)現(xiàn)全球的可比性[4]。目前，酶參考品（reference material）的成功制備為實(shí)現(xiàn)血清酶測定結(jié)果的溯源性和可比性奠定了基礎(chǔ)[5]，應(yīng)用酶校準(zhǔn)品可明顯提高不同檢測系統(tǒng)間血清酶測定結(jié)果的可比性[6]，但酶參考品和酶校準(zhǔn)品制備困難，產(chǎn)量有限。在我國，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室按照自己的意愿，選擇需要的儀器、試劑、操作程序等組合的檢測系統(tǒng)（自建檢測系統(tǒng)），以此完成患者標(biāo)本的檢驗(yàn)。因此，面對國內(nèi)大量的實(shí)驗(yàn)室自行建立的檢測系統(tǒng)，應(yīng)該怎樣尋找檢測結(jié)果溯源性和可比性，是一個(gè)極大的現(xiàn)實(shí)問題。為了考查實(shí)驗(yàn)方法和比較方法的相關(guān)度，我們選用貝克曼復(fù)合校準(zhǔn)品以低、中、高、超高新鮮血清樣品在不同試劑盒的檢測系統(tǒng)上進(jìn)行測定，結(jié)果表明，不同檢測系統(tǒng)乳酸脫氫酶誤差均高于CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍，說明不同試劑盒檢測系統(tǒng)的誤差巨大，必須以比對試驗(yàn)來進(jìn)行驗(yàn)證。若原裝配套方法與比較方法的比對結(jié)果臨床可以接受，則可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度可以溯源，不同檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果具有可比性。配伍組設(shè)計(jì)資料的方差分析表明，不同試劑盒檢測系統(tǒng)血清乳酸脫氫酶測定結(jié)果的差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)與回歸分析表明，實(shí)驗(yàn)方法與比較方法間的相關(guān)系數(shù)（r）均<0.975，說明X的分布范圍不合適，可以用回歸統(tǒng)計(jì)的方法分析各檢測系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差。將不同血清乳酸脫氫酶的醫(yī)學(xué)決定水平值（Xc）代入相應(yīng)的回歸方程，計(jì)算出醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差，以方法學(xué)比較的系統(tǒng)誤差

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編輯/哈濤