聚氰基丙烯酸正丁酯納米載體促進紫杉醇粒抗膠質(zhì)瘤作用實驗研究

摘要：目的 紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒對鼠腦膠質(zhì)瘤進行了局部緩釋化療，觀察其對人腦膠質(zhì)瘤細胞系抑瘤作用。方法 將80只Wistar雌性大鼠隨機分成分為對照組（無血清1640），PBCA+NP組，紫杉醇組及紫杉醇+PBCA+NP組（20只/組）。結(jié)果 PBCA+NP組和紫杉醇組瘤均重分別為對照組的（82.1±1.7）%和（49.8±3.1）%，其中尤以聯(lián)合組腫瘤受抑最為顯著，其瘤均重僅為對照組（38，0±2.1）%。結(jié)論 紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒進行化療可有效抑制腦膠質(zhì)瘤細胞的生長。

關(guān)鍵詞：腦膠質(zhì)瘤：立體定向技術(shù)；紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒

紫杉醇（Paclitaxel，簡稱PTX）是從短葉紅豆杉（Taxus brevifolia）穩(wěn)定微管防止微管解聚及調(diào)節(jié)信號傳導(dǎo)的雙重作用機理而成為又一類新型抗腫瘤藥物[1]，對治療多種腫瘤有效；被用作一線廣譜抗癌藥物[2]。然而，由于紫杉醇資源匱乏，水溶性低，難以通過血腦屏障等，使其在臨床上的應(yīng)用受到很大程度的限制。為增加PTX的溶解度，降低毒副作用，采用靶向給藥和控緩釋技術(shù)來改善PTX的給藥方式和療效是目前研究的熱點。

1資料與方法

1.1紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒（藥物-PBCA-NP）的制備 稱取300mg Dextran-70置燒杯中，加蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓?.01mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至3.0，定容至50ml。于室溫、電磁攪拌下緩緩加入α-BCA 0.5ml（使?jié)舛葹?%），攪拌4h，以0.1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5，即得紫杉醇-PBCA-NP膠體溶液。

1.2人膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44和細胞培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44，蘇州醫(yī)學(xué)院取材于額葉星形膠質(zhì)瘤2-3級的患者，經(jīng)原代培養(yǎng)形成穩(wěn)定人膠質(zhì)瘤細胞系.本實驗的瘤株購于中國科學(xué)院上海細胞研究所。

1.3流式細胞儀檢測細胞的凋亡率 將SHG-44細胞（5×105）接種于6孔培養(yǎng)皿，實驗設(shè)計空白對照，單用PBCA+NP及單用紫杉醇（濃度為100 nmoL/L）為單藥對照組，及聯(lián)合藥物組，細胞培養(yǎng)24 h后，經(jīng)消化離心后，將細胞濃度調(diào)至1×l07～2 x 107/ml。將100μl細胞懸液中加人新鮮配制4%多聚甲醛100以固定30min。PBs漂洗1次，用RNase（50 mg/L）作用30min，以碘化丙錠（60 mg/L）綜合染液染色30 min后，經(jīng)流式細胞儀計數(shù)，每組重復(fù)3組上樣，檢測凋亡率。

1.4構(gòu)建荷瘤Wistar雌性大鼠及動物試驗 在無菌操作臺中按無菌手術(shù)原則操作，四肢固定后，均用0.2 ml腫瘤細胞懸液應(yīng)用立體定向技術(shù)成功建立了SHG-44鼠膠質(zhì)細胞移植模型。觀察Wistar雌性大鼠精神狀態(tài)，活動，飲食，待成瘤后（約3w）將80只瘤鼠隨機分成分為對照組（無血清1640），PBCA+NP組，紫杉醇組及紫杉醇+PBCA+NP組（20只/組）。給藥方式為尾靜脈注射（2 mg/kg體重，以無血清1640稀釋），紫杉醇采用腹腔注射（2 mg/kg體重），1次/d，共5次；對照組為局部注射等容無血清1640，配合腹腔注射等容生理鹽水。于治療結(jié)束14 d后后處死菏瘤Wistar雌性大鼠，切除腫瘤，去除脂肪組織，稱重.

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 成瘤大小、流式細胞儀結(jié)果等以（x±s）表示，以spss軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2結(jié)果

2.2流式細胞儀方法分析細胞的凋亡率 藥物作用細胞24 h后，細胞周期分析顯示，紫杉醇對SHG-44膠質(zhì)瘤細胞具有抑制作用。紫杉醇+PBCA+NP對SHG-44膠質(zhì)瘤細胞具有抑制作用。凋亡率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2荷瘤Wistar雌性大鼠生存狀態(tài)及移植瘤生長抑制 各組Wistar雌性大鼠在治療觀察期內(nèi)均存活，成瘤后Wistar雌性大鼠體重相繼略減輕，其中對照組最為明顯，活動少，反應(yīng)稍遲鈍。Wistar雌性大鼠成瘤后，經(jīng)5次治療后，對照組腫瘤仍持續(xù)生長外，各治療組生長趨緩，質(zhì)地稍硬。治療結(jié)束10 d時，瘤體已明顯小于對照組，PBCA+NP組和紫杉醇組瘤均重分別為對照組的（82.1±1.7）%和（49.8±3.1）%，其中尤以聯(lián)合組腫瘤受抑最為顯著，其瘤均重僅為對照組（38，0±2.1）%，抑瘤率（I R）顯著高于各單獨處理組.

3討論

腦質(zhì)瘤多浸潤性生長，手術(shù)很難將顱內(nèi)侵襲灶完全切除，膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)在所難免，且復(fù)發(fā)部位多在腫瘤原位及鄰近，因此局部治療最大限度殺傷腫瘤細胞成為膠質(zhì)瘤綜合治療中重要得環(huán)節(jié)。

實驗結(jié)果證明，在實驗室條件下，應(yīng)用立體定向技術(shù)成功建立了SHG-44鼠膠質(zhì)細胞移植模型，經(jīng)MRI影像、大體解剖和組織病理學(xué)證實，膠質(zhì)瘤發(fā)病部位恒定，大小、形態(tài)相似，成功率高。較好的復(fù)制了膠質(zhì)瘤的生物特性，因此該模型是較穩(wěn)定的理想動物模型，為探索膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制及實驗性治療向臨床過渡提供有效的研究手段。

實驗結(jié)果證明：紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒緩釋膜片可延長Wistar雌性大鼠的生存期，明顯抑制腫瘤的生長，使腫瘤的體積增長緩慢甚至縮小.這表明載藥紫杉醇+PBCA+NP提高了藥物的穩(wěn)定性，延長了藥物作用時間，使腫瘤局部長時間維持較高的藥物濃度殺死腫瘤細胞。為進一步實驗研究及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。提示具有臨床開發(fā)應(yīng)用前景.

參考文獻：

[1]Lhch A，Oieda B，Colomcr R，et 02。Cancer[J].2000，89（11）：2169-2175.

[2]Koziaru M，Lockman PR，Allen D.D.J.Controlled Release[J].2004，99：259-26.

編輯/許言