不同生長年限川黨參多糖\\總黃酮含量的分析比較

摘要：在川黨參主要供應地區(qū)獲取川黨參，從而具有一定代表性，通過嚴格反復實驗分析出川黨參生長年限對其多糖、總黃酮含量含量的影響，采用UV測定法檢測出總黃酮含量，并對其產(chǎn)生的差異進行分析比較探討。總結出不同年限生長川黨參錢3年均成遞增趨勢，然而4年生黨參卻減慢，得出結論從經(jīng)濟成本和藥用價值方面3年生川黨參比較適宜采摘。

關鍵詞：川黨參；生長年限；多糖；總黃酮

1引言

黨參中川黨參占重要地位因其耐抗性、便于培植受到很多人歡迎，其產(chǎn)地大多在華南及東南亞地區(qū)。川黨參在保健行業(yè)更受歡迎，在部分鄉(xiāng)村區(qū)域人們把其作為地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展的重點項目來做并且受益很好，所以對于川黨參的研究很有價值。川黨參是多年生草本植物，所以其生長年限及其生長代謝產(chǎn)物含量變化不同所以其生藥質量以及藥用價值也是有差異的。因此要獲得最大經(jīng)濟利益，川黨參的生長年限尤為關鍵，在保證川黨參生藥質量、藥用價值符合質量標準的前提下，考慮其生長期的長短對藥農(nóng)的生產(chǎn)投入所產(chǎn)生的經(jīng)濟負擔。本文對不同生長年限川黨參的多糖和總黃酮含量嘲進行分析比較，對川黨參生長年限和采收做了初步的分析，可以作為川黨參種植采收的參考。

2實驗部分

2．1儀器、試劑與材料UNlC0UV2000型紫外一可見分光光度計（上海精科儀器有限公司）；xc-100型數(shù)控超聲清洗器(西安康明超聲波設備儀器有限公司)；R-1005 (鄭州長城儀器有限公司)；XS205DU型分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。川黨參(采集于重慶市奉節(jié)縣，采集時間：2013年9月)。蘆丁標準品(99．8％，批號0781-200610，中國藥品生物制品檢定所)；葡萄糖標準品(99．8％，批號110833-200903，分析純，中國藥品生物制品檢定所)；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、石油醚、無水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿，苯酚，實驗所用試劑皆為分析純。實驗用水為自制蒸餾水[1]。

2．2實驗方法

2．2．1供試品溶液制備準確稱取不同年份的黨參粉5份，每份約5．00g，用石油醚(60℃~90℃)水浴回流脫脂兩次(5h/次)。揮干殘渣溶劑，置于圓底燒瓶，加70％乙醇40ml。浸泡20h，70°C下回流3h。過濾，另用少量85％乙醇多次洗滌濾渣，入提取液，轉入100ml。容量瓶，用85％乙醇定容，得測總黃酮的川黨參供試品液一。將提盡黃酮后的川黨參殘渣置于loomL圓底燒瓶中，加80％乙醇50mI。超聲提取20min，以除去單糖及部分苷類。揮干殘渣乙醇，加水50ml。在75°C水浴下回流3次，2h/次，合并兩次提取液，旋轉蒸發(fā)至10ml左右，用水定容于100ml容量瓶申，即為測多糖的川黨參供試品液二。

2．2．2多糖含量的測定

2．2．2．1校準曲線的繪制準確稱取105°C干燥至恒重的葡萄糖20.00mg，置于100mL容量瓶中用水稀釋至刻度100，即得o．2mg／ml葡萄糖標準溶液。準確吸取標準溶液0、0.2、0.4、0．6、0．8、1．0mL分別置于10ml具塞試管中，依次加水補足到1.0ml。，分別在試管中加入5％的苯酚溶液1ml，搖勻后迅速加入濃硫酸5ml，并冰浴冷卻，然后置于100°C水浴鍋中加熱10min，自來水下冷卻后以蒸餾水補至刻度，于490nm處測定吸光度，繪制校準曲線，以吸光度A對樣品濃度c作回歸分析，得到回歸方程后繪制校準曲線如圖1。表明糖含量在。0~0.02mg／ml范圍內具有線性特征。

2．2．2．2多糖含量的測定準確吸取供試品液二0．5ml。按照2．2．2．1節(jié)的方法測定其吸光度，計算出不同年份川黨參多糖含量。

2．2．2．3精密度、穩(wěn)定性實驗準確吸取供試品液二1ml，分別吸取6份，按2．2．2．1節(jié)的方法測定其吸光度，求得RsD為3．42％。以其中一份作為參考對象，在0.5、1、2、4、12、24h時測定其吸光度，求得RSD為2．45％。

2．2．2．4加標回收率實驗準確吸取4份黨參樣品液lmI。，分別加入0.2mg／mL葡萄糖標準液0、0.5、1、1．5，按照2．2．2．1節(jié)方法，測得吸光度A，計算平均回收率為99．94％，RSD為4．27％。

2．2．3總黃酮含量的測定

2．2．3．1校準曲線的繪制在120°C準確稱取減壓干燥至恒重的蘆丁對照樣品20mg，將60％乙醇用于溶劑溶解并定容至1000mI，制得0．02mg／ml的蘆丁標準溶液。分別用滴管吸取蘆丁的標準溶液0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0ml置于不同10mL的容量瓶中，加5％亞硝酸鈉溶液lmL并搖勻后放置10min，加1mL硝酸鋁溶液(10％)后搖勻并放置10min，加入1．0ml的氫氧化鈉（5％）。加60％乙醇至刻度后搖勻且靜置20min。以第一管為空白對照，于波長510nm掃描，測定吸光度。繪制吸光度一濃度曲線，求得回歸方程為A=1．43°C+0.0292，r=0．9995。圖2為其校準曲線。說明在0~0.01mg／mI范圍內吸光度成正相關且非常穩(wěn)定。

圖1多糖校準曲線

圖2總黃酮校準曲線

2．2．3．2總黃酮含量的測定準確吸取供試品液lml，按照2．3．1節(jié)的方法測定其吸光度，計算出不同年份川黨參總黃酮含量。

2．2．3．3精密度、穩(wěn)定性實驗準確吸取供試品液一1ml，共吸取6份，按2．2．3．1節(jié)的方法測定其吸光度，求其RSD為2．07％。以其中一份作為參考對象，在0.5、l、2、4、12、24h時測定其吸光度，求得RSD為4．88％。

2．2．3．4加標回收率實驗分別量取藏黨參的樣品液1mI．，共4份，置于10ml容量瓶里。準確加入0.02mg／mL的蘆丁標準品儲備液0、0.4、0.8、1．0ml，再加入80％的乙醇溶液補足至10mL，照2．2．3．1節(jié)方法，進行吸光度測定，求得回歸方程、平均回收率為114．53％，RSD4．50％。

3結果與討論

3．1不同生長年限川黨參多糖含量（見表1）。

由表1可知，川黨參生長曲線為駝峰型，并非隨年限增長而無限制增加代謝物含量，第2年相對增長率為20．74％左右，第3年相對增長率為86．53％左右，第4年卻出現(xiàn)相對負增長20．62％。其中3年生川黨參增長率及多糖含量最高。得出結論川黨參生長期3年內均為多糖積累階段，而3年積累最為迅速含量最高。多糖積累但不儲存，所做實驗為川黨參采摘作出指導作用

3．2不同生長年限川黨參總黃酮含量（見表2）。

根據(jù)表2可知，在川黨參種植過程中，總黃酮含量是根據(jù)生長年限的增加而增長的。第2年的增長率是83．33％，第3年的增長率是48．48％，第4年的增長率是21．09％。第2年的增長率最高，第3年也保持較高的增長速度，在這個時期，總黃酮含量都是以一個較為快速的速度增長的，到第4年時增長率降低，可見增長速度在放緩[2]。如果僅以總黃酮含量作為指標進行考察，選收4年生的川黨參總黃酮含量最高，但是考慮到第4年總黃酮增長速度在下降，加之多1年的生長，成本陪護費用也相應增加，綜合表1和表2，結合多糖含量、總黃酮含量進行考察，應該選擇采收3年生川黨參，既保證了生藥質量，又節(jié)約了種植成本。因此，采收3年生川黨參是較為合適的。

3．3結果分析經(jīng)過調查，在渝產(chǎn)川黨參種植區(qū)，由于各方面因素，大多數(shù)藥農(nóng)采挖移植2年后的川黨參作為藥材，可能導致部分川黨參藥材的生藥品質并未達到最佳。因此，綜合藥農(nóng)的生產(chǎn)成本、種植年限和生藥品質，可以選擇采挖3年生川黨參作為藥材，這樣可以保證其藥用效果。

4結論

黨參為補中益氣、健脾益肺大宗藥材，其藥用含量豐富，許多有效成分有待發(fā)掘，然而其糖類與總黃酮含量豐富已毋庸置疑，在提取糖類與總黃酮方面川黨參有點突出作為藥用種植最為合適。多糖是植物最為普遍的代謝產(chǎn)物，藥理實驗證明其具有增加機體免疫力，增加脾臟造血功能等功效。黃酮具有抗炎抗病毒等廣譜的生理活性和藥理作用。川黨參多糖黃酮的藥理研究也從一個側面印證了黨參補中益氣、健脾益肺的功效。多糖的測定有苯酚一硫酸法和蒽酮一硫酸法，蒽酮不便保存，所以苯酚溶液更容易保存，故而選用苯酚一硫酸法[3]。UV法是總黃酮含量測定的較為經(jīng)典的方法，操作簡便。可以作為川黨參采收的參考。

參考文獻：

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編輯/蘇小梅