云南新平縣蚊蟲調(diào)查及乙型腦炎病毒帶毒率和抗體調(diào)查分析

摘要：目的 了解云南省新平縣流行性乙型腦炎流行狀況及其特征，為云南省乙腦的防治提供科學依據(jù)。方法 在觀察點采集蚊蟲進行乙腦病毒分離和鑒定。對觀察點正常人群采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）檢測乙型腦炎IgG抗體。結果 三帶喙庫蚊屬于當?shù)貎?yōu)勢蚊種，占蚊蟲捕獲總數(shù)的71.59%；共分離到2株乙腦病毒；正常人血清乙腦病毒抗體陽性率為74.7%，其中>16歲年齡組的陽性率最高，達到了95%，0歲～5歲年齡組與其他組人群乙腦病毒抗體水平差異具有統(tǒng)計學意義。結論 三帶喙庫蚊屬為當?shù)貎?yōu)勢蚊屬，三帶喙庫蚊和中華按蚊均為攜帶和傳播乙型腦炎病毒的媒介，當?shù)亟】等巳褐写嬖谳^高的乙型腦炎病毒隱性感染現(xiàn)象。

關鍵詞：蚊類；流行性乙型腦炎；病毒的鑒定；血清學

流行性乙型腦炎（Japanese Encephalitis，JE），是由乙型腦炎病毒（Japanese Encephalitis virus，JEV）引起的一種人畜共患自然疫源性疾病，主要分布在亞洲，也是我國重要的傳染病之一，嚴重威脅人類特別是兒童的身體健康。該疾病多發(fā)生于蚊蟲較多的夏秋季節(jié)，其中三帶庫蚊為其主要傳播媒介。流行性乙型腦炎疫苗是預防和控制該病流行的最有效手段，通過監(jiān)測環(huán)境中蚊蟲JEV帶毒情況和監(jiān)測健康人群中JEV抗體水平的高低，能夠?qū)Ξ數(shù)豃E發(fā)病和流行情況進行預警。新平縣位于云南省元江紅河流域中部，歷史上屬于云南省乙型腦炎流行地區(qū)，以往對該縣有關JE調(diào)查較少，2012～2013年，我們在該縣開展了蚊蟲、乙腦病毒檢測及健康人群乙腦抗體水平調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查分析結果報告如下。

1資料與方法

1.1現(xiàn)場調(diào)查點的選擇與蚊蟲采集 北緯24°～25°、東經(jīng)105.5°～102°和海拔513m～1221m選擇2個自然村作為現(xiàn)場調(diào)查點。參照以往調(diào)查方法，在自然村的東西南北各選擇1戶人房和畜圈，自2012年10月～2013年8月間，每月連續(xù)2個夜晚（19：30～07：30）采用誘蚊燈通宵捕蚊，次日鑒定、登記。鑒定后的部分蚊蟲裝入1.8ml凍存管凍存于液氮罐中，帶回實驗室。

1.2蚊蟲乙型腦炎病毒檢測 參照乙型腦炎病毒檢測方法，從液氮罐中取出裝有三帶喙蚊和中華按蚊的凍存管，每組50～100只，將蚊蟲標本倒入預冷的無菌陶瓷研磨器中， 加維持液1.5ml， 研磨， 至無組織碎片； 分別按200 U/ml 和200 μg/ml 加入青霉素和鏈霉素， 混勻， 將全部液體移入Ep管中，然后放-80 ℃冰箱。參照以往的乙型腦炎病毒檢測方法，提取RNA，合成cDNA，進行病毒核酸RT-半套式PCR檢測等。

1.3健康人群乙型腦炎IgG抗體檢測 采用隨機抽樣的方法在兩個現(xiàn)場調(diào)查點按不同年齡和不同性別對健康人群采集靜脈血，其中，年齡組分為0～5歲、6～10歲、11～16歲、>16歲4個年齡組，每個年齡組40人，分離血清低溫保存，帶回實驗室進行JEV檢測。參照以往的方法，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）檢測JEV-IgG抗體水平。

1.4數(shù)據(jù)分析 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進行χ2檢驗，當P<0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1蚊蟲組成 共捕獲蚊類5屬21種，共6628只。經(jīng)過鑒定，庫蚊屬（Culex）5種，按蚊屬（Anopheles）12種，伊蚊屬（Aedes）2種，阿蚊屬（Armigeres）和小蚊屬（Mimomyia）和各1種（表1）。從捕獲的蚊蟲種類和數(shù)量上看，三帶喙庫蚊和中華按蚊分別占此次調(diào)查捕獲蚊類總數(shù)的71.59%、17.56%，屬該縣優(yōu)勢蚊種。

2.2蚊蟲JEV分離與鑒定 共對標本中的2屬2種24批2011只雌性成蚊進行了病毒分離，每批50～100只。結果從三帶喙庫蚊和中華按蚊中各分離到一株乙型腦炎病毒，蚊蟲標本總陽性率為8.33%，蚊體帶毒率0.10%。其中三帶喙庫蚊帶毒率為0.02%，中華按蚊帶毒率為0.09%。

2.3健康人群JEV-IgG抗體水平 共采集現(xiàn)場健康人群血清標本160份，11歲～16歲組血清標本因運輸途中保存不當丟失10份。如表2所示，共檢測健康人群血清標本150份，JEV-IgG抗體陽性112份，陽性率74%。其中各年齡組中陽性率最高的為6歲～10歲組和>16歲組，陽性率均超過90%，其次為11歲～16歲組。運用行成列表卡方檢驗，各年齡組之間陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=58.188，P<0.01）。6歲～10歲組與>16歲組（χ2=0.721，P>0.05），無顯著統(tǒng)計學差異。將6歲～10歲組與>16歲組合并后與11～16歲組進行檢驗，（χ2=0.898，P>0.05），無顯著統(tǒng)計學差異，與0～5歲組進行檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=51.300，P<0.01）。

3討論

新平縣海拔低，氣溫較高，濕度大，雨量多，這些都有利于蚊蟲的生存和常年大量繁殖。本次調(diào)查也發(fā)現(xiàn)，該縣蚊蟲種類較多，且三帶喙庫蚊和中華按蚊的種群數(shù)量高，為當?shù)貎?yōu)勢蚊蟲種群。這與云南其他縣市以往調(diào)查結果相似。

從蚊蟲JEV帶毒率調(diào)查結果來看，此次從新平縣采集的2011只三帶喙庫蚊和中華按蚊標本中檢測分離出了2株JEV，說明JEV能在該兩種蚊蟲中增殖發(fā)育。特別是三帶喙庫蚊，以往我國南方或云南從三帶喙庫蚊中分離到了大量的JEV。結合該蚊在云南分布廣、種群數(shù)量高等生物學習性，該蚊屬于我國南方和云南省JE主要媒介。對于中華按蚊與JE疾病關系，雖然該蚊在我國和云南屬于優(yōu)勢蚊蟲種群，但有實驗認為該蚊JE感染閾高，病毒較難經(jīng)唾液腺感染人體，是否是JEV媒介仍有待于進一步證實。

綜上所述，三帶喙庫蚊屬于新平縣JEV主要媒介，當?shù)靥幱?歲～5歲年齡組人群的JE抗體水平較低， 提示應加強該類人群JE疫苗的接種， 保護兒童免受JE感染。

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編輯/申磊