Tim—3在胃癌患者NK細胞上表達水平的臨床研究

【摘要】Tim-3是重要的免疫調(diào)控分子，在腫瘤免疫逃逸中的作用值得深入探討。結(jié)合臨床資料分析該分子表達與胃癌進展的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論健康對照組還是胃癌患者，在外周淋巴細胞群體中Tim-3主要表達于NK細胞而非B細胞或T細胞。擴大樣本進一步分析發(fā)現(xiàn)，胃癌患者NK細胞上Tim-3表達則顯著高于健康組，兩者存在統(tǒng)計學(xué)差異。這提示NK上Tim-3表達可能參與了胃癌病理進程。臨床樣本統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，Tim-3在胃癌患者外周血NK細胞上的表達水平與腫瘤分期以及腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究提示NK上Tim-3在胃癌的發(fā)生發(fā)展中誘導(dǎo)高表達，可能是評估胃癌進展的潛在指標。

【關(guān)鍵詞】胃癌;Tim-3;NK

【中圖分類號】R4 " "【文獻標識碼】B " "【文章編號】1671-8801（2014）011- 0108-02

胃癌是一種常見的惡性腫瘤，嚴重危害人民群眾的身體健康，已成為重要的社會問題。近年來，雖然手術(shù)、放化療等常規(guī)手段取得了很大的進步，但是無論是生存質(zhì)量還是生存期方面，對于進展期胃癌均沒有實質(zhì)性提升。腫瘤經(jīng)過漫長的時間，絕大部分散在出現(xiàn)的腫瘤細胞都能被機體免疫系統(tǒng)清除，但是一旦腫瘤細胞通過某種機制逃脫了免疫監(jiān)視，在器官形成集落式生長，則免疫系統(tǒng)很難再將其徹底清除。實質(zhì)上，經(jīng)過漫長的時間，腫瘤集落不斷生長并與機體免疫逐漸相互適應(yīng)，免疫系統(tǒng)甚至扮演了“幫兇”的角色。因此，免疫與腫瘤的關(guān)系非常密切，從免疫學(xué)角度看腫瘤發(fā)展對于認清腫瘤發(fā)生發(fā)展的規(guī)律大有幫助。

目前關(guān)于Tim-3與NK細胞的研究還存在較大爭議，特別是NK細胞上Tim-3表達的臨床意義報道甚少。本論文首先檢測了胃癌患者及健康人外周血NK細胞上 Tim-3的表達情況，分析Tim-3在NK細胞上的表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，探討NK細胞上的Tim-3在胃癌發(fā)生發(fā)展中的臨床意義。

一，材料與方法

自山東省章丘市人民醫(yī)院消化科和普外科收集初診胃癌患者62例，經(jīng)手術(shù)或活檢病理確診胃癌。正常對照組32例，為醫(yī)院體檢中心健康體檢者，男24例，女8例。所采集的外周血為入院血常規(guī)（EDTA抗凝）檢測后的多余血液，沒有對患者造成二次創(chuàng)傷，且經(jīng)醫(yī)院倫理備案批準。采血前未經(jīng)手術(shù)和放化療治療，并排除自身免疫性疾病、糖尿病等長期慢性疾病。初診胃癌患者為入院第2天清晨抽取空腹靜脈血1-2ml，以EDTA抗凝管保存。正常對照組為來本院健康體檢的人群，排除慢性疾病的健康人群，樣品是血常規(guī)檢測后廢棄的標本。

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用GraphPad Prism 5軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料用均數(shù)±標準差表示，兩組均數(shù)比較采用t檢驗，多組均數(shù)的比較采用單因素方差分析，計數(shù)資料比較采用Fisher確切概率法檢驗。檢驗水準α=0.05。

二，結(jié)果

流式細胞儀檢測Tim-3在胃癌患者與健康對照組外周血 CD3+T細胞、CD19+B細胞和 CD56+NK 細胞上的表達情況。結(jié)果Tim-3在胃癌患者及正常對照組外周血 CD3+T細胞基本不表達，在CD19+B細胞上低表達，而在CD56+NK細胞高表達。Tim-3 在胃癌患者外周血CD19+B 細胞上的表達（11.48±6.29，%）高于對照組（6.68±4.11，%），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。進一步擴大臨床樣本，分析62例胃癌患者及32例正常對照組外周血CD56+NK細胞上Tim-3的表達情況。結(jié)果胃癌患者外周血CD56+NK細胞上Tim-3的表達強度（2211±108.8，MFI）高于正常對照組（1258±59.31，MFI），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0174）。

將62例胃癌患者Tim-3在外周血 NK 細胞上的表達情況與其年齡、性別和臨床分期等病理特征進行分析。以Tim-3在胃癌患者外周血 CD56+NK細胞上的中位數(shù)（MFI=2110）為閾值：≥2110為高表達組，lt;2110為低表達組。顯示：Tim-3在 NK 細胞上的表達量在不同分期的各組中存在顯著差異（Plt;0.05），在年齡、性別各組中的差異無顯著性。

為了進一步了解腫瘤微環(huán)境中NK細胞表達 Tim-3情況，本部分對胃癌癌灶和對應(yīng)的癌遠端正常組織中浸潤的 CD45+CD56+NK細胞上該分子表達情況進行了流式檢測。結(jié)果所示：4例不同胃癌患者癌灶中CD45+CD56+NK細胞上 Tim-3 表達平均熒光強度平均數(shù)為2895，標準誤為292.3;對應(yīng)的癌旁正常組織中CD45+CD56+NK細胞上Tim-3表達平均熒光強度平均數(shù)為2302，標準誤為102.5。兩者相比，雖然癌灶中NK細胞上Tim-3表達高于對應(yīng)的癌旁正常，但兩者之間并不存在統(tǒng)計學(xué)差異。有一個非常有意思的發(fā)現(xiàn)，無論癌組織還是癌旁組織中NK細胞均能分為Tim-3+和Tim-3-NK兩個明顯的亞群。這兩個亞群的功能特征值的深入研究。

三，討論

Tim-3是Ⅰ型跨膜蛋白，屬于新發(fā)現(xiàn)的Tim家族成員。Tim-3最初認為其特異性表達于Th1細胞，隨著研究深入，該分子在CD8+Tc1 細胞、CD4+Th17、Treg，甚至在固有免疫細胞DC、單核巨噬細胞等免疫細胞均發(fā)現(xiàn)不同程度表達。Tim-3可與其配體半乳凝素-9（Galectin-9，Gal-9）結(jié)合，負向調(diào)節(jié)Th1細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在腫瘤免疫中也發(fā)揮著重要作用。

本論文首先分析了胃癌患者外周血淋巴細胞上 Tim-3 表達水平。結(jié)果顯示，胃癌患者及健康對照組中 Tim-3在主要表達于 CD56+NK細胞，在CD19+B細胞和 CD3+T細胞幾乎檢測不到，提示NK上Tim-3才是發(fā)揮功能的主體。進一步比較分析發(fā)現(xiàn)，胃癌患者Tim-3水平顯著高于正常對照。臨床樣本分析發(fā)現(xiàn)，Tim-3表達水平與胃癌臨床分期密切相關(guān)。進展晚期胃癌患者NK上Tim-3水平也顯著多于早期胃癌。上述結(jié)果提示，NK上Tim-3在促進胃癌病理發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，該分子在NK細胞上的表達情況可能作為評估胃癌患者病情的臨床指標。

綜上，胃癌患者NK細胞上的Tim-3表達與腫瘤負荷密切相關(guān)，且T-bet是調(diào)控該分子表達的關(guān)鍵因子。臨床分析表明NK上Tim-3表達水平與腫瘤分期相關(guān)，該分子是重要的臨床進展指標。

參考文獻：

【1】鄒小農(nóng)等，2003-2007年中國胃癌發(fā)病與死亡情況分析[J]，腫瘤，2012，02

【2】季加孚等，胃癌新輔助化療的現(xiàn)狀與展望[J]，中國腫瘤臨床，2012，39