35牡丹花粉植物甾醇的分析及其與油菜花粉的比較

毛文岳 段向東 邵琳雅 郭彥君 孫春燕 紀海鵬 黃健花

摘 要：采用GC-MS分析了牡丹花粉中的主要植物甾醇，并與油菜花粉的含量進行比較。結(jié)果表明：牡丹花粉中共檢出了5種甾醇，含量最高的甾醇為異巖藻甾醇（21.89 mg/g）;其次為新甾醇物質(zhì)Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-（2.68 mg/g）;β-谷甾醇及另外2種甾醇的含量均在1 mg/g以下。牡丹花粉含有的2種主要植物甾醇—異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-在油菜花粉中均有測得，但含量均低于牡丹花粉。

關(guān)鍵詞：牡丹花粉;植物甾醇;氣相色譜-質(zhì)譜;油菜花粉

自我國正式批準植物甾醇、甾醇酯作為新資源食品以來，植物甾醇越來越受到食品和藥品領域的關(guān)注?；ǚ鄣臓I養(yǎng)價值受到大眾廣泛認可，植物甾醇作為花粉的主要功能性成分之一，是近年來食品功能性成分研究領域的熱點之一。不同種子來源的花粉，營養(yǎng)成分差異顯著，所含甾醇物質(zhì)大相徑庭。油菜花粉的甾醇主要為豆甾醇、菜油甾醇、β-谷甾醇、24-亞甲基膽甾醇[1]，而板栗花粉中則為以下5種甾醇：膽固醇、（3β，24R）-麥角甾-5-烯-3-醇、豆甾醇、β-谷甾醇和（3β）-豆甾-5，24（28）-雙烯-3-醇[2]。研究發(fā)現(xiàn)，不同的甾醇物質(zhì)表現(xiàn)出抗氧化、抗癌、促進膽固醇降解代謝等不同的生理功能，差異顯著[3-4]。因此，有必要就尚未研究的植物花粉的甾醇物質(zhì)進行鑒定，尤其是借助現(xiàn)代檢測手段分析鑒定新的甾醇物質(zhì)，這不論是對于花粉產(chǎn)品的開發(fā)利用，還是對于甾醇在食品和藥品領域的應用都具有重要意義。

牡丹是我國特有的一種觀賞藥用植物，在我國已有2 000多年的藥用歷史，其根、皮、花均可入藥。我國牡丹種植面積近百萬畝，牡丹花朵大，花粉產(chǎn)量多，花粉年產(chǎn)量估計可達數(shù)千噸[5]，但牡丹花粉的利用率較低，亟待開發(fā)利用。牡丹花粉作為牡丹花雄蕊中的生殖細胞，營養(yǎng)物質(zhì)和藥用活性成分豐富，具有很高的食藥價值和經(jīng)濟價值[6-7]。查閱文獻發(fā)現(xiàn)，目前尚無研究涉及牡丹花粉的甾醇。

鑒于此，本研究采用氣質(zhì)技術(shù)，對牡丹花粉中的主要甾醇進行物質(zhì)鑒定，并將其含量與研究和開發(fā)利用較多的油菜花粉中的含量進行了比較，以期為牡丹花粉的開發(fā)利用提供基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

牡丹花粉，采自安徽亳州;油菜花粉，網(wǎng)購，產(chǎn)自內(nèi)蒙古;5α-膽甾烷醇標品 、 BSTFA+TMCS（99∶1 ）硅烷化試劑，均購自Sigma公司（美國）;其余化學試劑均為分析純，國藥化學試劑有限公司。

Trace GC Ultra 氣相色譜儀、ISQ 質(zhì)譜檢測儀，Thermo 公司（美國）;色譜柱：DB-5 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），Thermo 公司（美國）;水浴鍋、電子分析天平、漩渦振蕩儀等常見設備。

1.2 方法

樣品前處理：首先，按馮妹元[8]所述方法加入內(nèi)標5α-膽甾烷醇，加入6 mol/mL的鹽酸-乙醇溶液1.0 mL并于80 ℃加熱1 h酸解;然后，加入 KOH-乙醇溶液，按李志曉[9]所述方法進行衍生化。

甾醇測定：參考李志曉[9]的方法，采用氣相色譜-質(zhì)譜定性，并以5α-膽甾烷醇為內(nèi)標定量?；ǚ壑戌薮己康挠嬎愎饺缡剑?）：

甾醇含量（mg/g）=S×BA×M×1 000（1）式（1）中，S表示加入待測樣品中的內(nèi)標5α-膽甾烷醇的質(zhì)量、B表示所測樣品中某甾醇物質(zhì)的峰面積、A表示內(nèi)標5α-膽甾烷醇的峰面積、M表示稱取的花粉樣品質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)解譜后發(fā)現(xiàn)共檢出了5種甾醇，其中，出峰時間在15.26 min的異巖藻甾醇含量最高，牡丹花粉中的含量為21.89 mg/g（圖1）。該異巖藻甾醇經(jīng)硅烷化后的化學結(jié)構(gòu)式、質(zhì)譜圖見圖2。巖藻甾醇類多來源于藻類，體外實驗證實其具有抗腫瘤、抗氧化作用[10-11]。本研究首次從植物花粉中檢測出了異巖藻甾醇，發(fā)現(xiàn)其具有抑制脂肪酶活性的作用，具有潛在減肥功效[12]。樣品中同時測得了2.68 mg/g的新甾醇物質(zhì)Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，出峰時間15.06 min，該甾醇經(jīng)硅烷化后的化學結(jié)構(gòu)式和質(zhì)譜圖見圖3。另外，樣品中還測得了少量的β-谷甾醇、4-Methylcholesta-8，24-dien-3-ol，（3a，4a，5a）和9，19-cyclolanost-24-en-3-ol，（3a）-，含量均在1 mg/g以下，三者的出峰時間分別為16.22、16.84、17.03min，質(zhì)譜圖略。

鑒于牡丹花粉的兩種主要甾醇——異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，均為首次在植物花粉中測得，為驗證此類物質(zhì)是否在其他花粉中同樣存在，并評估其含量水平，以研究較多且有較多成熟市售花粉類產(chǎn)品的油菜花粉為代表，分析鑒定其甾醇物質(zhì)組成，發(fā)現(xiàn)這兩種甾醇在油菜花粉中均有測得，異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-的含量分別為6.47、0.49mg/g。油菜花粉中植物甾醇經(jīng)BSTFA+TMCS（99∶1）硅烷化的總離子流圖見圖4。

3 結(jié)論

牡丹花粉中共檢出了5種甾醇，含量最高的甾醇為異巖藻甾醇，含量為21.89 mg，該甾醇首次在植物花粉中測得;其次，為新甾醇物質(zhì)Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-，含量為2.68 mg/g;β-谷甾醇及另外兩種甾醇的含量均在1 mg/g以下。牡丹花粉所含有的兩種主要植物甾醇——異巖藻甾醇和Gorgost-5-en-3-ol，（3a）-在油菜花粉中均有測得，含量分別為6.47、0.49mg/g，均低于牡丹花粉的。

參考文獻

[1]楊開，王玏縈，徐夢婷，等. 油菜花粉甾醇的制備、分析及抗氧化活性研究[J].中國糧油學報，2018，33（1）：69-75.

[2]郭麗梅，王盼盼，陳曦. 板栗花粉甾醇類組分分析[J].食品科技，2013，38（4）：237-241.

[3]Srigley Cynthia T，Hansen Steven L，Smith Sean A，et al. sterols and stanols in foods and dietary supplements containing added phytosterols：A collaborative study[J].Journal of the American Oil Chemists Society，2018，95（3）：247-257.

[4]Vlahova-Vangelova，Dessislava，Balev，Dessislav，Dragoev，Stefan. Changes of fatty acid profiles and content of sterols，tocopherols and carotenoids in pork by antioxidant type phytonutrients[J]. Biointerface Research In Applied Chemistry，2021，11 （2 ）：9749-9761.

[5]張孟琴，孫亞真，范一霖. 牡丹花粉營養(yǎng)成分評價及相關(guān)性分析[J]. 食品研究與開發(fā)，2018，39（15）：154-160.

[6]武俊生，李捷，王靜靜，等. 牡丹花粉破壁率及其2種單萜苷的含量測定[J].西北藥學雜志，2020，35（4）：494-498.

[7]李志，李琳，石曉峰，等. 牡丹花粉口含片的制備工藝及抗氧化活性[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學學報，2020，55（1）：177-185.

[8]馮妹元. 常見食物中植物甾醇的氣相色譜分析方法和應用的研究[D].南昌：南昌大學，2006.

[9]李志曉. 加工過程對油茶籽油微量營養(yǎng)成分和抗氧化性能的影響[D].江蘇無錫：江南大學，2015.

[10]Hyun AhJung，Himanshu Kumar Bhakta，Byung-Sun Min，et al.Fucosterol activates the insulin signaling pathway in insulin resistant HepG2 cells via inhibiting PTP1B[J].Pharm.Res，2016（39）：1454-1464.

[11]楊玲，鄭超群，吳福珍，等.巖藻甾醇對卵巢癌細胞抑制作用的體外研究[J].北方藥學，2020，17（5）：145-147.

[12]Koth-Bong-Woo-Ri Kim，Min-Ji Kim，Dong-Hyun Ahn. Lipase inhibitory activity of chlorophyll a，isofucosterol and saringosterol isolated from chloroform fraction of Sargassum thunbergii[J].Natural Product Research，2014，28（16）：1310-1312.