高效液相色譜熒光法測(cè)定辣椒醬中的羅丹明B

劉謙 白帆 劉麗麗

摘要[目的]建立辣椒醬中羅丹明B的高效液相色譜熒光檢測(cè)法。[方法] 將樣品中的羅丹明B用一定比例的丙酮和正己烷提取，經(jīng)過氧化鋁固相萃取柱凈化濃縮后，用液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)其含量。[結(jié)果]試驗(yàn)得出，羅丹明B在0.005 ～0.050 mg/kg 濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999；方法的定量檢測(cè)限為0.005 mg/kg，平均回收率高。[結(jié)論]該試驗(yàn)建立的方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，適用于辣椒醬中羅丹明B的測(cè)定。

關(guān)鍵詞液相色譜；熒光檢測(cè)法；羅丹明B

中圖分類號(hào)O657.7+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）01-00248-02

作者簡(jiǎn)介劉謙（1980- ），女，河北保定人，工程師，碩士，從事食品的檢測(cè)研究，Email：chemliuq@163.com。

收稿日期20131129羅丹明B，俗稱“花粉紅”，又稱玫瑰紅B或堿性玫瑰精， 是一種人工合成的具有鮮桃紅色的染料，分子式為C28H31ClN2O3，分子量為479.017 5，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。羅丹明B常溫下為綠色結(jié)晶或紅紫色粉末，易溶于水、甲醇及乙醇，微溶于丙酮、氯仿、鹽酸和氫氧化鈉溶液。由于羅丹明B 在溶液中熒光現(xiàn)象比較強(qiáng)烈，在實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞熒光染色劑、有機(jī)玻璃和特色煙花爆竹、環(huán)境保護(hù)、鋼鐵生產(chǎn)、礦石生產(chǎn)等行業(yè)中得到了比較廣泛的應(yīng)用[1-4]。

圖1羅丹明B化學(xué)結(jié)構(gòu)式羅丹明B曾經(jīng)被用做食品添加劑，但也有研究結(jié)果表明[5-6]，羅丹明B有致癌性， 同時(shí)其可能造成人皮膚及內(nèi)臟紅染、心肌纖維斷裂、橫紋模糊和肺水腫等，該物質(zhì)的攝取、吸入及皮膚接觸均會(huì)造成急性和慢性中毒傷害。但羅丹明B 具有價(jià)格低廉的特點(diǎn)，脂溶性良好，比其他水溶性染料如誘惑紅、赤鮮紅和檸檬黃等更易于在辣椒及制品上染色且不易褪色，一些不法企業(yè)及商販用羅丹明B 作為食用色素對(duì)辣椒及其制品進(jìn)行染色，以次充好。我國(guó)將羅丹明B列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單（第一批）》進(jìn)行重點(diǎn)監(jiān)督，歐盟等國(guó)家也都不允許其在食品中使用。筆者采用液相色譜熒光檢測(cè)法測(cè)定辣椒醬中的羅丹明B，前處理采用有機(jī)溶劑提取，氧化鋁固相萃取柱凈化，得到辣椒醬中羅丹明B快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的檢測(cè)方法。

1材料與方法

1.1材料辣椒醬，市售。主要儀器：高效液相色譜儀，配熒光檢測(cè)器；固相萃取裝置；1/1000天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；漩渦混合器。主要試劑：甲醇、丙酮、正己烷，均為色譜純；水為去離子水；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品、氧化鋁萃取柱（1 000 mg/3 ml），上海安譜試劑公司。

1.2樣品的處理取辣椒醬樣品稱取2.00 g置于100 ml具塞離心管中，加入20 ml 20%丙酮的正己烷液，振蕩100 min，上層提取液慢慢加入氧化鋁層析柱中，用10 ml 20%丙酮的正己烷液洗滌殘?jiān)蠈犹崛∫郝尤胙趸X層析柱中，柱中保持液面為2 mm左右時(shí)上樣，流速1滴/s；待樣液完全流出后，用15 ml 20%丙酮的正己烷液洗柱，直至流出液顏色變淺，棄去全部淋洗液，用90%甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于10 ml容量瓶中，用0.45 μm針桶濾器過濾供LC測(cè)定。

1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取空白樣品，經(jīng)“1.2”處理后制備空白基質(zhì)溶液，配制羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 ng/ml。

1.4色譜條件色譜柱： C18 4.6 mm×250 mm，不銹鋼柱；流動(dòng)相：A泵甲醇B泵水（70∶30）；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）550 nm，發(fā)射波長(zhǎng)（Em）580 nm；柱溫：35 ℃。

2結(jié)果與分析

標(biāo)準(zhǔn)品特征離子譜圖在上述儀器條件下，9.5 min出峰且峰形尖銳而對(duì)稱，測(cè)試結(jié)果見圖1，空白樣品對(duì)照見圖2。

2.2樣品的提取和純化由于辣椒本身就含有比較多的油分，過固相萃取小柱時(shí)容易出現(xiàn)堵塞柱子的情況。SN/T2430-2010中提到需要使用凝膠色譜進(jìn)行前處理，由于GPC的采集時(shí)間長(zhǎng)，如果想提高凈化效果，就會(huì)犧牲采集時(shí)間，降低目標(biāo)物的回收率，否則就不能完全除去樣品中的油脂和顆粒，會(huì)堵塞萃取柱；GPC的有機(jī)試劑用量大，既提高了檢測(cè)成本，也在一定程度上造成了環(huán)境污染。該試驗(yàn)中采用丙酮和正己烷作為提取溶劑，效果比較好。

2.3流動(dòng)相的選擇試驗(yàn)分別對(duì)比了不同體積比的乙腈-水、甲醇-水作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-水做流動(dòng)相時(shí)，色譜峰比較寬，有時(shí)會(huì)有拖尾的現(xiàn)象；甲醇-水作為流動(dòng)相時(shí)，干擾峰與目標(biāo)物可以完全分離，出峰峰型好，靈敏度高。羅丹明B是堿性染料，pH對(duì)其靈敏度也有一定的影響。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在流動(dòng)相中加入0.1%的甲酸，對(duì)出峰效果和回收結(jié)果有很大的提高。

3結(jié)論

研究通過高效液相色譜熒光檢測(cè)法測(cè)定辣椒醬中羅丹明B含量，結(jié)果表明， 該方法具有前處理簡(jiǎn)單快速、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、可操作性強(qiáng)的特點(diǎn)， 適合大批次樣品的羅丹明B含量的檢測(cè)， 具有良好的應(yīng)用前景。

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