“滬191”麻疹減毒活疫苗為中國消除麻疹作出貢獻

麻疹是一種嚴(yán)重危害兒童健康的急性呼吸道傳染病，傳染性極強，易引起暴發(fā)流行。1960年，我國上海分離出麻疹流行病毒并研制成功“滬191”麻疹減毒活疫苗。1965年10月起，上海開始使用“滬191”麻疹減毒活疫苗。在疫苗使用前的1955-1964年，麻疹平均發(fā)病率為2024.36/10萬，其中大流行的1958年發(fā)病率為3510.5/10萬。疫苗使用后的1967-1974年平均發(fā)病率為97.25/10萬，發(fā)病率較使用疫苗前減少95.19％；1985年發(fā)病率降至1.07/10萬；1994年發(fā)病率最低，為0.30/10萬，較使用疫苗前減少99.99％。從全國情況來看，隨著麻疹疫苗的廣泛應(yīng)用，特別是1978年實施兒童計劃免疫后，我國麻疹控制工作取得了顯著成績。與計劃免疫前相比，我國20世紀(jì)90年代的麻疹發(fā)病率與死亡率均降低了95％以上，其中1995年麻疹報告發(fā)病率降至5/10萬的歷史最低水平。但2005年以來，全國大部分地區(qū)的麻疹發(fā)病率有所抬頭，每年報告病例數(shù)為9.96～14.42萬例，合年發(fā)病率7.67/10萬～10.13/10萬。因此，消除麻疹是今后我國免疫規(guī)劃工作的一大挑戰(zhàn)。

實施計劃免疫是控制乃至消滅疫苗所對應(yīng)傳染病的主要策略。繼人類消滅天花之后，消滅脊髓灰質(zhì)炎即將成為現(xiàn)實，而麻疹是世界衛(wèi)生組織(WHO)擬定的下一個將被消除的傳染病。麻疹病毒雖然有8個基因組，但只有一個血清型，抗原性穩(wěn)定，人感染后可產(chǎn)生持久的免疫力。由于人是唯一宿主且有安全、有效的疫苗加以預(yù)防，故消除麻疹在理論和技術(shù)上都是可行的。WHO美洲區(qū)于2000年成功消除麻疹的事實也已證實了這一點。WHO歐洲區(qū)和東地中海區(qū)分別提出在2007年和2010年消除麻疹的目標(biāo)，包括我國在內(nèi)的WHO西太平洋區(qū)所有國家亦于2005年承諾將在2012年消除麻疹。2006年11月，我國衛(wèi)生部發(fā)布《2006-2012年全國消除麻疹行動計劃》，提出了到2012年，全國麻疹發(fā)病率控制在1/100萬以下(不包括輸入病例)且無本土麻疹病毒傳播的目標(biāo)，同時希望通過消除麻疹工作促進免疫規(guī)劃工作發(fā)展。具體工作指標(biāo)為：1)鞏固和提高國家免疫規(guī)劃疫苗接種率，以縣為單位計的適齡兒童麻疹疫苗常規(guī)免疫2劑接種率達到95％以上；2)在入托、入學(xué)兒童中，2劑麻疹疫苗接種率達到95％以上；3)麻疹疫苗強化免疫接種率達到95％以上；4)麻疹暴發(fā)疫情調(diào)查率和血清學(xué)確診率均達到100％；5)以省為單位計的麻疹發(fā)病率在1/10萬以下時，麻疹疑似病例個案調(diào)查率達到100％，血清標(biāo)本采集率達到80％以上；6)建立國家、省、市(地)三級麻疹實驗室網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)實驗室達到WHO認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)。

1 “滬191”麻疹疫苗的免疫效應(yīng)

1.1 國內(nèi)、外主要麻疹疫苗病毒株

上世紀(jì)50年代，國外建立了幾株麻疹減毒活疫苗株，國內(nèi)20世紀(jì)60年代初唯一由本土分離、建立并批準(zhǔn)使用的是“滬191'’減毒活疫苗株。國內(nèi)、外目前使用的主要麻疹疫苗株有：1)美國早期使用的Edmonston(Ed)株，1954年分離，由36～37℃培養(yǎng)條件下，經(jīng)原代人胚腎細胞(HK)傳24代、原代人羊膜細胞(HAM)傳28代、雞胚羊膜腔傳6代、原代雞胚細胞(CEC)傳5～8代建立；2)美國早期和歐洲目前仍在使用的、由Ed株衍生而來的Sehwarz株，系1962年由Ed株繼續(xù)在CEC上(32℃)培養(yǎng)傳至85-103代建立；3)美國目前使用的、由Ed株衍生而來的Morraten株，系1968年由Ed株繼續(xù)在CEC上(32℃)培養(yǎng)傳至40～43代建立；4)俄羅斯等東歐國家使用的Leningrad-16(L-16)株，由前蘇聯(lián)于1968年用原代豚鼠腎細胞和原代鵪鶉胚細胞傳代培養(yǎng)總28代建立；5)日本使用的CAM-70株，由原代猴腎細胞傳3代、HK傳8代、雞胚羊膜腔傳90代、雞胚絨毛膜傳35代、CEC上36℃培養(yǎng)蝕斑純化傳3代、再CEC上32℃培養(yǎng)傳26代建立；6)我國使用的“滬191”株。

1.1.1 “滬191”麻疹疫苗株的建立及應(yīng)用

上海生物制品研究所于1960年冬季在上海麻疹流行期間，從一名2歲男孩出疹前(有發(fā)熱和柯氏斑)的血液標(biāo)本并經(jīng)接種HK分離而得。之后，通過在HK上連續(xù)傳33代，適應(yīng)于HAM再連續(xù)傳39代，然后適應(yīng)于CEC傳至第5代，將培養(yǎng)溫度由37℃降至(3l±1)℃，再由CEC傳至第10代，經(jīng)各項檢定和包括猴子等在內(nèi)的動物安全性試驗、以及在人體中進行的臨床反應(yīng)性和免疫原性研究，建立了中國第一株麻疹減毒活疫苗株——“滬191”株，1965年5月獲國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)生產(chǎn)和應(yīng)用，1978年獲得中國科學(xué)大會獎。

“滬191”麻疹減毒活疫苗的生產(chǎn)至今已有近45年的歷史，生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量也在不斷改進。1984年之前生產(chǎn)的是液體疫苗，保存及運輸條件要求高，疫苗穩(wěn)定性差，效期僅3-6個月。1985年起改為凍干疫苗，穩(wěn)定性大幅提高，效期延長至18個月。疫苗的內(nèi)在質(zhì)量方面，1992年通過中國疫苗項目與荷蘭國立公共衛(wèi)生和環(huán)境保護研究所協(xié)作，將“滬191”株純化為無雞白血病病毒污染的純化毒株，進一步提高了麻疹疫苗的安全性和有效性。此外，國家對麻疹疫苗的標(biāo)準(zhǔn)不斷提高，每5年對疫苗生產(chǎn)和檢定規(guī)程進行修訂，并從2005年起規(guī)范了使用劑量由原來每劑0.2mL改為國際通用的0.5mL。南“滬191'’株生產(chǎn)的麻疹減毒活疫苗至今已在我國應(yīng)用超過20億劑，是世界上產(chǎn)量最大的疫苗株之一，為我國控制和消除麻疹作出了巨大貢獻。

1.1.2 “滬191”麻疹疫苗的免疫效果及抗體持久性

活疫苗病毒株的減毒水平?jīng)Q定了疫苗的臨床反應(yīng)性和免疫原性，而毒株的減毒是經(jīng)控制實驗的培養(yǎng)條件和病毒傳代水平(即傳代代次)、以及最終通過對人體的臨床觀察而確定的。上世紀(jì)60-80年代對不同傳代水平的“滬191”疫苗進行的臨床研究顯示，早期CEC傳10代以前疫苗的免疫原性雖好，但反應(yīng)性較高，發(fā)熱率達65％，高熱率為26％，皮疹率是13％；CEC傳15-20代疫苗的平均發(fā)熱率為47％，高熱率為4.3％，皮疹率為5.2％；CEC傳21-26代疫苗的平均發(fā)熱率為31％，高熱率為3.1％，皮疹率為0.3％；CEC傳27～33代疫苗的平均發(fā)熱率低于20％，高熱率降至1.3％，基本無皮疹反應(yīng)。所有代次疫苗對人體的免疫原性即抗體陽轉(zhuǎn)率均達到96％-100％，但抗體幾何平均滴度(GMT)隨疫苗代次的增加而減低，由早代次的大于200、中間代次的68～138降至高代次的39～62。即：“滬191”疫苗株隨著傳代代次的增高，其臨床反應(yīng)性降低，免疫原性特別是抗體水平也呈下降趨勢。兼顧臨床反應(yīng)性和免疫原性，選擇CEC傳25代左右的疫苗較合適。從2001年起，按照國家規(guī)定新建立了“滬191”麻疹毒種的三級種子庫，固定CEC傳25代毒種為生產(chǎn)疫苗的工作種子批，使每年及每一批生產(chǎn)的“滬191”麻疹疫苗保持一致性。

為進一步了解“滬191”麻疹疫苗與國際同類疫苗的差距，1974年在人T封閉地區(qū)用美國的Sehwarz株和前蘇聯(lián)的L-16株麻疹疫苗進行了長達14年的比較觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，“滬191”疫苗的臨床反應(yīng)性與Sehwarz疫苗相似，比L-16疫苗略高；抗體陽轉(zhuǎn)率和抗體GMT水平，“滬191”疫苗分別為98.6％和76，Schwarz疫苗分別為83.5％和96，L-16疫苗分別為96.9％和71；免疫持久性方面，“滬191”疫苗最好，L-16疫苗最差(第14年的抗體累計陰轉(zhuǎn)率，“滬191”疫苗為9.8％，Sehwarz疫苗為11.9％，L-16疫苗為16.7％)。綜合分析可以看出，“滬191”株反應(yīng)適中，免疫性良好，不遜于美國的Sehwarz株，且明顯優(yōu)于前蘇聯(lián)的L-16株。

另一項對“滬191”麻疹疫苗的免疫持久性研究是1973年在浙江省象山縣高塘島鄉(xiāng)建立的觀察基地進行的。在該研究中，726名易感兒童經(jīng)1針疫苗免疫后連續(xù)16年每年進行血清學(xué)和流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在第16年時仍有83.2％的疫苗免疫人群保持著足夠的抵抗野毒的能力，說明“滬191”麻疹疫苗的免疫持久性良好。

1.2 “滬191”麻疹疫苗在我國消除麻疹行動中的作用

近年來，全國麻疹疫情的特點是：發(fā)病率明顯波動、地區(qū)間交替高發(fā)，部分省甚至持續(xù)高發(fā)，局部地區(qū)時有暴發(fā)；15歲以下、特別是5歲以下小年齡組是口前麻疹流行的主要人群，中、西部地區(qū)尤為突出；部分地區(qū)成人麻疹發(fā)病率水平較高；東部地區(qū)流動人口病例所占比例較高等。分析流行的主要因素是易感人群積累，包括常規(guī)免疫接種率不高，局部地區(qū)存在免疫空白，城鄉(xiāng)接合部、城區(qū)、流動人口免疫服務(wù)管理跟不上；強化免疫不徹底；育齡期婦女抗體水平較低等。目前麻疹發(fā)病情況與消除麻疹目標(biāo)的差距約為100倍。相比之下，WHO美洲區(qū)通過開展“初始”強化免疫和“后續(xù)”強化免疫策略，已成為第一個成功實現(xiàn)消除麻疹的地區(qū)。我國衛(wèi)生部也已多次召集專題研討會，陳竺部長作了重要指示。2008年起，已分批在全國各省、市、自治區(qū)開展了大規(guī)模的麻疹強化免疫，并協(xié)調(diào)麻疹疫苗的生產(chǎn)和供應(yīng)。2008年全國生產(chǎn)“滬191”麻疹疫苗約1.5億劑，2009年近2億劑，2010年計劃至少為1.75億劑。從貴州省2004年開展強化免疫、2005年起麻疹疫情即大幅度下降以及海南省2006年開展強化免疫前后麻疹發(fā)病數(shù)由1173例下降為37例、發(fā)病率由14.17/10萬下降為0.44/10萬的顯著成效來看，我國通過進一步采取強化免疫策略來實現(xiàn)消除麻疹的最終目標(biāo)是可行的。

2 含麻疹疫苗成分的聯(lián)合疫苗

早在1990年，由5個國際組織共同發(fā)起的“全球兒童疫苗計劃(CVI)”就將開發(fā)聯(lián)合疫苗作為疫苗發(fā)展方向的重要內(nèi)容。聯(lián)合疫苗的優(yōu)越性在于集多種單價疫苗的功能于一體，注射1針就能同時預(yù)防多種傳染病，故不僅可減少注射次數(shù)、節(jié)約疾病控制資源，而且有助于提高疫苗免疫接種的覆蓋率，同時降低疫苗包裝、運輸、儲藏和預(yù)防接種等間接成本。國外在上世紀(jì)70年代開發(fā)上市了由麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹不同組合配制的二聯(lián)和三聯(lián)疫苗(簡稱麻腮風(fēng)三聯(lián)疫苗)。我國對病毒性聯(lián)合疫苗的開發(fā)起步較晚，直至2000年才由上海生物制品研究所在國內(nèi)率先開發(fā)成功麻疹和腮腺炎二聯(lián)活疫苗。

2.1 含麻疹疫苗成分的二聯(lián)疫苗

2.1.1 麻疹和腮腺炎二聯(lián)活疫苗

上海生物制品研究所于1979年通過國際交流獲得兒株腮腺炎疫苗病毒，經(jīng)研究建立了S₇₉株腮腺炎疫苗株，1984年獲得國家批準(zhǔn)用于腮腺炎疫苗生產(chǎn)。后又通過5年多努力，于2000開發(fā)成功由“滬191”麻疹疫苗和S₇₉株腮腺炎疫苗配制的麻疹和腮腺炎二聯(lián)活疫苗。2004年，武漢生物制品研究所也開發(fā)成功由“滬191”麻疹疫苗和Wm84株腮腺炎疫苗配制的麻疹和腮腺炎二聯(lián)活疫苗。

2.1.2 麻疹和風(fēng)疹二聯(lián)活癌苗

北京生物制品研究所于1994年研究成功我國自己的、適應(yīng)于人二倍體細胞的BRDⅡ株風(fēng)疹減毒活疫苗，之后又研究與“滬191”麻疹疫苗聯(lián)合的麻疹和風(fēng)疹二聯(lián)活疫苗，并于2002年獲得批準(zhǔn)。

2.2 麻腮風(fēng)三聯(lián)疫苗(MMR)

在成功開發(fā)二聯(lián)疫苗的基礎(chǔ)上，北京天壇生物制品股份有限公司(原北京生物制品研究所)于2002年首先開發(fā)成功由“滬191”麻疹疫苗、S₇₉株腮腺炎疫苗和BRDⅡ株風(fēng)疹疫苗聯(lián)合組成的MMR。上海生物制品研究所也于2007年11月研究成功由同樣三種毒株疫苗組成的MMR。對這兩家國產(chǎn)MMR與美國默克公司產(chǎn)品進行的l臨床比較研究結(jié)果顯示，三種產(chǎn)品的免疫原性和臨床反應(yīng)性基本一致，但國產(chǎn)MMR中的“滬191”麻疹疫苗的免疫原性優(yōu)于進口疫苗，說明國產(chǎn)MMR的質(zhì)量達到了國際水平。

2.3 麻腮風(fēng)和水痘四聯(lián)疫苗(MMRV)

國外于2007年宣布在MMR的基礎(chǔ)上開發(fā)成功與OKa株水痘疫苗聯(lián)合的MMRV四聯(lián)疫苗。研究四聯(lián)疫苗的技術(shù)難度更大，不僅要解決4種活病毒之間更復(fù)雜的相互干擾作用，而且首先要制備出4種高滴度單價病毒原液，以克服4種病毒配制時相互稀釋而達不到單價疫苗所要求的最低病毒含量，其次需要選擇適合4種病毒的凍干穩(wěn)定劑和凍干工藝，最后還需要有抗4種病毒的抗血清，建立用不同細胞檢測產(chǎn)品中的每種病毒含量的檢定技術(shù)等。

OKa株水痘活疫苗是由日本大阪大學(xué)微生物病研究院(BIKEN)的高橋理明等于1974年研究成功的，也是目前WHO唯一認(rèn)可的國際性水痘活疫苗。由于水痘病毒有在細胞內(nèi)不易釋放的特性，故水痘疫苗的生產(chǎn)技術(shù)難度較大，產(chǎn)量受到限制。上海生物制品研究所于1996年從日本BIKEN引進OKa株疫苗毒種和生產(chǎn)技術(shù)，產(chǎn)品經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定和臨床考核，于2000年獲得國家批準(zhǔn)，成為國內(nèi)第一個生產(chǎn)水痘活疫苗的單位。目前，上海生物制品研究所正在加緊MMRV的研究，以期為保障兒童健康和推進我國預(yù)防衛(wèi)生事業(yè)作出新的貢獻。