飼料中三聚氰胺在養(yǎng)殖水體中的分布與遷移

樊銀明等

摘要 [目的] 研究三聚氰胺進入水體系統(tǒng)后的遷移情況。[方法] 利用室內模擬水生態(tài)系統(tǒng)，通過在飼料中添加三聚氰胺，測定不同暴露時間水體、金魚藻、沉積物以及羅非魚和田螺肌肉中三聚氰胺的含量。[結果] 給藥期間水體、金魚藻、沉積物以及羅非魚和田螺肌肉中三聚氰胺含量都呈增加趨勢，金魚藻對三聚氰胺的吸附性較強。停藥期間羅非魚肌肉中三聚氰胺的含量顯著下降，水體中的三聚氰胺含量呈緩慢下降趨勢，而金魚藻、沉積物和田螺肌肉中三聚氰胺的含量呈緩慢增加趨勢。試驗后期，各介質中三聚氰胺的濃度逐漸趨于穩(wěn)定。[結論] 該研究為了解三聚氰胺在養(yǎng)殖水體中的分配和遷移規(guī)律提供了基礎數據。

關鍵詞 三聚氰胺；養(yǎng)殖水體；分布；遷移

中圖分類號 S931.3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）13-03911-02

Abstract [Objective] The research aimed to study the migration situations of melamine in water system. [Method] Using indoor stimulated aquatic ecosystem， melamine was added in fish feed to determine the content of melamine in water， hornwort， sediment， tilapia muscles and winkle muscles at different exposure time. [Result] During the period of drug administration，melamine content in the water， hornwort， sediment， tilapia muscles and winkle muscles showed the increasing trends， hornwort had stronger adsorption to melamine. After drug administration，melamine content in the tilapia muscles was significantly reduced， melamine content in the water was slowly decreased， the content of melamine in the hornwort， sediment and winkle muscles slowly increased. In the late test period， the concentration of melamine in all the media of the aquatic system was gradually stabilized. [Conclusion] The research provided basic data for understanding the distribution and migration laws of melamine in aquaculture water.

Key words Melamine； Aquaculture water；Distribution； Migration

魚類是人體攝取動物蛋白的主要食物來源之一，尤其是在亞熱帶和熱帶地區(qū)。在水產養(yǎng)殖中，飼料是養(yǎng)殖魚類的主要食物來源。但是，各種飼料添加劑的不合理使用以及環(huán)境中的污染物以各種方式進入養(yǎng)殖水體中都可能會使一些有毒有害物質在水產品中殘留和蓄積，對消費者的健康構成威脅。我國養(yǎng)殖魚類產量遠超過天然捕撈魚類，因此魚體內污染物的殘留狀況尤為值得重視[1-3]。

為了提高飼料的表觀含氮量，一些不法企業(yè)在魚粉、肉松粉、豆粕、濃縮料等原料中加入以“生物蛋白精”等名稱出現的三聚氰胺產品[4]。三聚氰胺（C3N6H6）是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料，主要用于生產三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫(yī)藥等行業(yè)[5]。三聚氰胺對水產品[6-10]和動物[11-18]的毒性研究已有許多報道，對人體的危害主要表現為腎臟毒性作用[13，18]。但尚未見到三聚氰胺在養(yǎng)殖水體各介質的分布與遷移的研究報道。

為了進一步研究三聚氰胺進入水體系統(tǒng)后的遷移情況，筆者利用一個模擬水生態(tài)系統(tǒng)[19-20]，通過在飼料中添加三聚氰胺，測定不同暴露時間下水體、金魚藻、沉積物以及羅非魚和田螺肌肉中三聚氰胺的含量，研究其變化規(guī)律，為今后了解使用含三聚氰胺的飼料后水生態(tài)系統(tǒng)中各介質中三聚氰胺的積累遷移規(guī)律提供了基礎數據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-20AT反相高效液相色譜儀（島津企業(yè)管理（中國）有限公司）；7890A-5975C氣相色譜-質譜儀（美國Agilent公司）；KDC-80低速離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；KQ-100DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Smart2Pure超純水系統(tǒng)（電導率0.055 μS/cm，德國TKA公司）；上海安亭250和500 μl微量進樣器（上海安亭微量進樣器廠）；N-EVAP112氮吹儀（美國Organomation公司）；NN-GT351M家用微波爐（上海松下微波爐有限公司）；XW-80A旋渦混合儀（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司）；AUW320電子分析天平（島津企業(yè)管理（中國）有限公司）；JPB-607A便攜式溶解氧測定儀（上海精密科學儀器有限公司）；PHS-3C型pH計（上海儀電科學儀器股份有限公司）?；旌闲完栯x子交換固相萃取柱（60 mg，3 ml，德國CNW Technologies GmbH）；N，O-雙三甲基-硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%三甲基氯硅烷（TMCS）（美國Regis technologies， Inc）；三聚氰胺純品型（99.9%），為上海阿拉丁試劑；三聚氰胺化學純（99%），上海阿拉丁試劑；三聚氰酸標準品，純度為99.0%（德國Dr.Ehrenstorfer公司）；三聚氰酸一酰胺標準品，純度為99.0%（德國Dr.Ehrenstorfer公司）；三聚氰酸二酰胺標準品，純度為98.0%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；氨水分析純，購自廣州化學試劑廠；吡啶、甲醇、乙腈，均為色譜純（德國CNW Technologies GmbH）

1.2 模擬養(yǎng)殖系統(tǒng)

試驗采用室內靜水養(yǎng)殖系統(tǒng)，在聚乙烯水族箱（50 cm×50 cm×50 cm）中進行，放入約10 kg不含三聚氰胺的干凈土壤，加入已曝氣24 h自來水約100 L，缸內放養(yǎng)大小勻稱、體質健康、平均體重80～100 g的羅非魚20尾（雌雄約各占一半）；田螺60只；金魚藻200 g。采用自然光照周期，控制水溫在（25±2）℃，pH為（7.0±0.2），溶氧量在5 mg/L以上，持續(xù)充氧，定時投喂明珠牌（珠江水產研究所飼料廠）觀賞魚飼料。所有生物試養(yǎng)3～8 d，保證系統(tǒng)穩(wěn)定后，開始進行飼料輸入。三聚氰胺按照10 g/kg添加到基礎飼料中，每缸每次添加25 g，每日定時投喂2次，飼養(yǎng)10 d。第11～20天投喂不含三聚氰胺的空白飼料，飼養(yǎng)10 d。對照組設置3個平行，投喂基礎空白飼料，飼養(yǎng)20 d。

1.3 樣品的采集及保存

分別在投喂添加三聚氰胺飼料的第1、3、6、10天及投喂空白飼料后第1、3、6、10天 （即試驗第11、13、16、20天），從3個加標試驗水族箱中各采集水樣50 ml、表層泥樣10 g，羅非魚2尾，田螺6只，金魚藻10 g，經處理后將各類樣品分別混勻，其中羅非魚去磷，去皮，去魚刺，取魚肉，田螺去殼后取螺肉搗碎收集樣品并編號。所取水樣置于冰箱內保存7 d內分析，生物樣在30 d內完成分析。同時從空白試驗水族箱中各取3個平行樣，采集及制樣方法與加標樣一致。

1.4 樣品的預處理

水樣先經0.45 μm濾膜過濾，再過0.22 μm濾膜，高效液相色譜儀進樣20 μl直接測定。

沉積物經風干、研碎、混勻，過60目篩后準確稱取2 g（精確到0.01 g）過60目篩于50 ml圓底塑料離心管中，加入10 ml 5%氨化甲醇，渦旋1 min，超聲5 min，于4 000 r/min離心5 min，收集上清液；底部殘渣按以上提取步驟重復操作1次后，合并2次上清液；取5 ml合并后的上清液于50 ℃下氮氣吹干，用1 ml流動相定容，渦旋1 min，過0.22 μm濾膜，供高效液相色譜測定。

金魚藻經洗凈表面，去除殘留水分，于陰涼處風干，搗碎，準確稱量1.00 g于50 ml圓底塑料離心管中后，加入10 ml 5%氨化甲醇，渦旋1 min，超聲5 min，于4 000 r/min下離心5 min，收集上清液；底部殘渣按以上提取步驟重復操作1次后，合并2次上清液；取5 ml合并后的上清液調節(jié)pH至6.0，采用MCX小柱進行凈化，6 ml 5%氨化甲醇洗脫，于50 ℃下氮氣吹干，用1 ml流動相定容，渦旋1 min，過0.22 μm濾膜，供高效液相色譜測定。

羅非魚和田螺肌肉樣品經解凍后，分別稱取（1.00±0.01）g試樣置于50 ml離心管中，用10 ml甲醇提取，再經過混合型陽離子交換柱凈化，最后用3 ml 5%氨水甲醇溶液洗脫并收集至5 ml離心管內。洗脫液經氮吹后，進行衍生化供氣相色譜-質譜測定，參照張燕萍[19]等的樣品處理。

1.5 測定條件

1.5.1

3 小結

（1）在用含三聚氰胺的飼料喂養(yǎng)期間，水體、金魚藻、沉積物、魚肉和螺肉中三聚氰胺的含量隨飼養(yǎng)天數的增加而增加，且金魚藻中三聚氰胺含量顯著增加。當體內三聚氰胺濃度較高時，羅非魚的活躍程度受到嚴重影響。

（2）在使用不含三聚氰胺的飼料飼養(yǎng)后，魚肉中三聚氰胺的含量顯著下降，7 d后低于0.2 mg/kg，魚的不健康癥狀逐漸消失，生理活動趨向正常。

（3）三聚氰胺在魚肉中的累積和消除速度均較快。在水體、沉積物、金魚藻中富集較多且不易消除，螺肉中雖然富集量低但也不易消除。

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