補(bǔ)腎益氣中藥抗皮膚光老化作用研究進(jìn)展

李偉　陳麗娟　王加志

皮膚光老化屬于光感性皮膚病范疇，本病的發(fā)生除與光線、光感物有關(guān)外，個(gè)體敏感性在發(fā)病過程中占重要地位。其臨床主要表現(xiàn)為皮膚紋理改變（干燥粗糙、皺紋加深）和皮膚色素異常（點(diǎn)狀色素沉著或色素減退斑點(diǎn)），嚴(yán)重者可誘發(fā)癌變。發(fā)病機(jī)制為表皮細(xì)胞萎縮，黑素細(xì)胞數(shù)量減少或分布局限，膠原纖維、彈力纖維組織結(jié)構(gòu)缺失，無定形彈力蛋白樣物質(zhì)沉積，毛細(xì)血管擴(kuò)張等病理組織學(xué)改變等特點(diǎn)[1]。現(xiàn)代研究認(rèn)為皮膚光老化的發(fā)生機(jī)理，主要集中在基質(zhì)異常降解、自由基、免疫抑制三方面[2-4]，其中自由基損傷一直是研究熱點(diǎn)，而隨著研究的深入，研究重點(diǎn)也由防護(hù)UV損傷到抗膠原降解和調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)通路上。

早在《素問·上古天真論》就有：“天壽過度，氣脈常通，腎氣有余也”的認(rèn)識(shí)，明確提出腎氣盛衰是機(jī)體生長(zhǎng)壯老已之根本，也是判斷生長(zhǎng)發(fā)育狀況及衰老程度的客觀標(biāo)志?！镀諠?jì)方·諸虛門·補(bǔ)虛駐顏色》有云：“夫血?dú)庹呷酥?，又心者生之本，神之變，其華在面，其充在血脈，服藥以駐顏色，當(dāng)以益氣血為先”，指明了中醫(yī)藥抗衰美容的治療方向。近年來，我國(guó)學(xué)者運(yùn)用補(bǔ)益中藥在防治光老化方面進(jìn)行了各種嘗試，肯定了中醫(yī)藥對(duì)皮膚光老化的防治作用，現(xiàn)分類綜述如下。

1 補(bǔ)腎藥

1.1杜仲：目前對(duì)杜仲的研究主要是其乙醇提取物對(duì)抗紫外線致皮膚成纖維細(xì)胞（ESF-1）皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞）光老化的作用上，以UVA、UVB梯度劑量照射細(xì)胞建立光老化模型，用不同濃度的杜仲乙醇提取物干預(yù)，測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量，采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中Ⅰ型膠原蛋白（ColⅠ）、基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）的含量。發(fā)現(xiàn)杜仲50%乙醇提取物能明顯提高細(xì)胞活性，提高SOD活性，降低細(xì)胞中的MDA含量及LDH活力，并且能抑制UVA引起的MMP-1及MMP-3的異常分泌，降低ColⅠ的降解，在體實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中均證實(shí)杜仲通過提高細(xì)胞抗氧自由基的能力，對(duì)UVA和UVB致ESF-1 細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞的光老化具有良好的防護(hù)作用[5-7]。

1.2冬蟲夏草：通過在體和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩種方式，研究其主要活性成分蟲草多糖（CordycepsPolysac charides，CP）對(duì)光老化的保護(hù)作用，以8-甲氧補(bǔ)骨脂素聯(lián)合UVA（8-MOP/UVA）誘導(dǎo)皮膚成纖維細(xì)胞和小鼠皮膚致光老化，用HE染色、MTT、羥脯氨酸、丙二醛（MDA）含量檢測(cè)及SOD活力分析等方法觀察蟲草多糖對(duì)成纖維細(xì)胞光老化過程中的形態(tài)、活力、膠原合成及抗氧化能力的影響。結(jié)果光老化組細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變，增殖能力明顯下降，羥脯氨酸含量下降，MDA含量升高，SOD活力下降，蟲草保護(hù)組明顯改善[8-9]。

2 補(bǔ)氣藥

2.1黃芪：王詩晗[10]以無毛小鼠UV照射建立光老化模型，以黃芪醇提物不同濃度（4g/Kg，8g /Kg，16g /Kg）混懸液灌胃給藥進(jìn)行干預(yù)，通過觀察不同組別的小鼠皮膚光老化模型皮膚組織中HYP含量、MDA含量及SOD活性的變化，來評(píng)價(jià)皮膚受損程度和藥物的防治作用。發(fā)現(xiàn)各濃度的黃芪醇提物均可提高無毛小鼠皮膚組織SOD活性和增加HYP含量，減少M(fèi)DA生成，呈劑量依賴。李燃等[11]探討黃芪甲苷水包油乳膏外用對(duì)皮膚光老化的保護(hù)作用機(jī)制。以BALB/c小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分為模型組、模型+基質(zhì)組、模型+黃芪甲苷組和正常對(duì)照組。RT-PCR測(cè)定轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子受體II（TGF-βRII）、Smad 7的mRNA表達(dá)水平，免疫組化觀察TGF-βRII、Smad 7在小鼠皮膚組織中的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果黃芪甲苷可以通過上調(diào)TGF-βRⅡ表達(dá)和下調(diào)Smad 7表達(dá)而改變TGF-B通路的信號(hào)傳導(dǎo)參與抗光老化。劉昕等[12]觀察黃芪甲苷對(duì)長(zhǎng)波紫外線（UVA）輻射導(dǎo)致的人成纖維細(xì)胞衰老的抑制以及對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）和金屬蛋白酶組織抑制因子l（TIMP-1）等老化相關(guān)基因表達(dá)的影響。分離培養(yǎng)人原代成纖維細(xì)胞，分為空白對(duì)照組、黃芪甲苷組、UVA 組和UVA+黃芪甲苷組，以10J/cm2 UVA進(jìn)行照射，并加入20g/ml黃芪甲苷干預(yù)處理。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)衰老相關(guān)β半乳糖苷酶表達(dá)，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)上清液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-βl（TGF-β1）的含量，實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)MMP-l和TIMP-l的mRNA表達(dá)水平變化。結(jié)果： UVA組β半乳糖苷酶陽性細(xì)胞數(shù)則顯著升高，其它各組β半乳糖苷酶陽性細(xì)胞比率明顯降低；UVA照射則明顯減少成纖維細(xì)胞TGF-β1分泌量，UVA 照射前加入黃芪甲苷可增加TGF-β1分泌量；UVA 能夠誘導(dǎo)MMP-l和TIMP-1的mRNA表達(dá)水平升高，而黃芪甲苷可在一定程度上對(duì)兩種基因表達(dá)起抑制作用。黃芪甲苷可有效延緩UVA所致的人成纖維細(xì)胞光老化進(jìn)程，其機(jī)制可能與促進(jìn)TGF分泌和抑制膠原降解有關(guān)。

2.2紅景天：沈干等[13] 研究紅景天苷對(duì)UVB輻射誘發(fā)的人角質(zhì)形成細(xì)胞光老化的防護(hù)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)紅景天苷能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，提高SOD、GSH、CAT等抗氧化酶的活性，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生。結(jié)果證實(shí)紅景天對(duì)UVB輻射所造成的皮膚光老化的防護(hù)作用機(jī)理，可能是通過促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞的增殖、提高抗氧化酶的活性以減少自由基損害來實(shí)現(xiàn)的。

2.3人參：鄧茂等[14]通過紫外線誘導(dǎo)經(jīng)8-甲氧補(bǔ)骨脂素處理過的體外培養(yǎng)真皮成纖維細(xì)胞建立光老化模型，用人參皂苷Rb與芳維A酸乙酯分別對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-1和MMP-3）表達(dá)的改變。結(jié)果人參皂甙Rb與陽性對(duì)照芳維A酸乙酯均能明顯抑制成纖維細(xì)胞的MMP-1和MMP-3表達(dá)。人參皂甙Rb對(duì)光老化成纖維細(xì)胞有一定的防治作用，其強(qiáng)度與芳維A酸乙酯大致相當(dāng)。程基焱等[15]為闡明人參皂苷Rb1對(duì)光老化的防治機(jī)理，探索中藥對(duì)光老化的防治手段，建立體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞光老化模型，芳維A酸乙酯為陽性對(duì)照藥，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，研究人參皂苷Rb1對(duì)光老化皮膚中成纖維細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對(duì)培養(yǎng)成纖維細(xì)胞胞質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)有顯著抑制作用；中藥組和陽性對(duì)照組與其表達(dá)的抑制作用相比較，差異無顯著性。說明人參皂苷對(duì)光老化的防護(hù)作用機(jī)理可能均通過調(diào)節(jié)MMPs活性實(shí)現(xiàn)的。

2.4絞股藍(lán)：王麗紅等[16]用絞股藍(lán)提取液灌胃給藥，研究藥物對(duì)光老化模型小鼠皮膚組織的影響，發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)組的小鼠皮膚組織變化與正常小鼠最為接近，不同濃度的絞股藍(lán)均能明顯提高SOD活性并使MDA含量明顯降低，中高劑量組還使HYP 含量明顯提高，絞股藍(lán)對(duì)紫外線引起的皮膚光老化的防護(hù)機(jī)理可能是提高SOD活性，清除自由基和增加HYP含量。陶冶等[17]探討絞股藍(lán)總皂苷含藥血清對(duì)光老化人永生化皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT）細(xì)胞分泌腫瘤壞死因α（TNF-α）及調(diào)節(jié)核因子-κβ（NF-κβ）表達(dá)的干預(yù)作用。采用中波紫外線（UVB）照射建立光老化HaCaT細(xì)胞模型，并給予含不同濃度絞股藍(lán)總皂苷的大鼠血清進(jìn)行干預(yù)，采用ELISA、Western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞分泌TNF-α含量及NF-κβ蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，紫外線（UV）模型組細(xì)胞培養(yǎng)上清液TNF-α含量及細(xì)胞NF-κβ表達(dá)水平顯著上調(diào)；低、中、高劑量含藥血清組中TNF-α含量及NF-κβ蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)。絞股藍(lán)總皂苷皮膚光老化的保護(hù)作用與NF-κβ信號(hào)通路可能相關(guān)。

3 小結(jié)與展望

隨著環(huán)境的破壞、光污染的日益嚴(yán)重，皮膚光感疾病發(fā)病越來越高，人們對(duì)皮膚光老化的防治日益迫切。中藥在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，注重辨證施治的個(gè)體化方案，更使得其在皮膚光老化的防治中占有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。大部分補(bǔ)腎益氣藥能夠提高皮膚抗氧化酶活性，抑制ROS誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，清除和減少自由基代謝產(chǎn)物的堆積，提高或維持皮膚膠原蛋白含量、調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶及TGF-β通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，從分子機(jī)制上肯定了中藥對(duì)抗皮膚光老化的作用，使得中藥防治皮膚光老化有效可行。但從目前的研究可以看出，人們對(duì)中藥防治光老化的機(jī)制研究大多數(shù)集中在抗自由基和調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶活性方面，對(duì)于皮膚光老化免疫機(jī)制和相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)深入研究較少。在中藥抗皮膚光老化藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究中，以提取物研究居多，單體成分較少，這也顯示了中醫(yī)藥在光老化的預(yù)防及治療方面具有巨大潛力可供發(fā)掘。怎樣合理運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)的研究手段，結(jié)合中醫(yī)理論，進(jìn)一步探討中醫(yī)藥防治光老化的作用機(jī)理、效量關(guān)系，使中醫(yī)藥為皮膚光老化防治方面做出更大貢獻(xiàn)，是我們今后努力的方向。

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[收稿日期]2014-05-07 [修回日期]2014-06-10

編輯/李陽利