換法檢測血清同型半胱氨酸在常規(guī)生化檢驗中的運用探析

王在斌

【摘要】目的：對我院實施酶轉(zhuǎn)換法測定Hcy水平的情況進行觀察，并總結(jié)該法在常規(guī)生化檢驗中的應(yīng)用價值。方法：應(yīng)用酶轉(zhuǎn)換法測定Hcy的精密度、抗干擾性及回收率等，參照NCCLS標準。結(jié)果：應(yīng)用酶轉(zhuǎn)換法檢測低值質(zhì)控血清與高值質(zhì)控血清的Hcy精密度均低于5%，精密度較高。循環(huán)酶法的測定均值為（12.9±6.6）μmol/L，酶轉(zhuǎn)換法的測定均值為（12.8±7.3）μmol/L，兩組數(shù)據(jù)間比較差異無統(tǒng)計學意義（t=0.055，P>0.05），兩種方法經(jīng)回歸分析具有良好的相關(guān)性（r2=0.898）。酶轉(zhuǎn)換法的Hcy干擾性測定偏差<10%?；厥章势骄?01.1%。試劑穩(wěn)定性較好。結(jié)論：酶轉(zhuǎn)換法檢測血清Hcy具有較高的精密度和較強的抗干擾度，試劑穩(wěn)定性好，回收率高，適合于實驗室生化檢驗的應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】酶轉(zhuǎn)換法；血清同型半胱氨酸；生化檢驗

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）10-0110-02

同型半胱氨酸（Hcy）為蛋氨酸的代謝中間產(chǎn)物，屬于含硫氨基酸，目前已被證實與許多血管類病變的發(fā)病和發(fā)展密切相關(guān)[1]。也有報道指出，與傳統(tǒng)的檢測指標相比較，Hcy具有更高的應(yīng)用價值，對檢測與防治心血管疾病具有重要意義[2]。對Hcy的實驗室測定方法很多，包括蔞光偏振免疫分析法、氨基酸分析儀法、高效液相色譜分析法、酶聯(lián)免疫分析法、離子色譜法、循環(huán)酶法、毛細管電泳法等，但相關(guān)方法多顯示出較復(fù)雜的操作性或較為昂貴的實驗器械、試劑，不易被患者所接受，不利于臨床普及應(yīng)用。隨著檢驗醫(yī)學的研究水平不斷進步，目前已有研究提出采用酶轉(zhuǎn)化法實施Hcy的檢測[3]，該方法的特點是可直接應(yīng)用常規(guī)的自動生化分析儀來進行測定，簡單快捷，利于臨床廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)對我院實施酶轉(zhuǎn)換法測定Hcy水平的情況進行觀察，并總結(jié)該法在常規(guī)生化檢驗中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1儀器設(shè)備

全自動生化儀由美國雅培公司提供，型號Abbot Aeroset。

1.1.2試劑

Hcy試劑盒由上海復(fù)星長征醫(yī)學科學有限公司生產(chǎn)，內(nèi)含：50 mmol/L的Tris緩沖液（試劑1），50 mmol/L的FeCl3（試劑2），500 U/L的Hcy酶，5 mmol/L的磷酸吡哆醛，2 mmol/L的二乙基對苯二胺硫酸鹽，5 mmol/L的二硫蘇糖醇。對照試劑內(nèi)含：0.2 mmol/L的還原型輔酶，0.1 mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸，0.5 mmol/L的話膦氯化氫，5 mmol/L的α-酮戊二酸，5 kU/L的Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶，10 kU/L谷氨酸脫氫酶，3 kU/L的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶，5 kU/L的腺苷脫氨酶。

1.1.3測定樣本

定值質(zhì)控血清樣本由上海復(fù)星長征醫(yī)學科學有限公司生產(chǎn)，包括濃度10 μmol/L的Hcy低值質(zhì)控血清，濃度20μmol/L的Hcy高值質(zhì)控血清。取我院2013年3月至2014年2月間健康查體病例80例為臨床樣本，患者均未發(fā)生黃疸、脂血或溶血，患者男性48例，女性32例，年齡25-59歲，平均（43.8±5.6）歲?；颊呔隗w檢時采血（空腹）4 ml，并于1 h內(nèi)進行檢測，離心機轉(zhuǎn)速3000 r/min，分離血清后進行檢測。

1.2試驗方法

1.2.1精密度試驗

分別量取低值和高值質(zhì)控血清進行測定，每日上午和下午分別進行一次測定，測定時取雙份測定，兩次測定之間時間間隔不低于2 h，連續(xù)以相同測定方法檢測20 d后，計算出不同質(zhì)控樣本的精密度。

1.2.2對比試驗

在受試樣本中，每日隨機選取10個樣本進行測定，測定前對樣本進行編碼，首次測定從樣本1至樣本10的順序測定，二次測定采用逆序測定，測定儀器為美國雅培公司的全自動生化儀，通過回歸分析獲得酶轉(zhuǎn)換法測定結(jié)果。

1.2.3抗干擾試驗

分別應(yīng)用血紅蛋白干擾物、甘油三酯干擾物、膽紅素干擾物和維生素C干擾物進行干擾試驗，以生理鹽水作為對照，對各受試樣本進行2次分析，并對照樣本進行比較。

1.2.4回收試驗

取混合血清樣本均分為3份，每份0.9 ml，于每一份血清樣本內(nèi)分別加入濃度20 μmol/L標準溶液、濃度40 μmol/L標準溶液和生理鹽水，加入量均為0.1 mL。對每個測試樣本進行4次分析測定，獲得回收樣本結(jié)果。

1.2.5穩(wěn)定性試驗

將利用自動化生化分析儀測定Hcy含量的低值和高值質(zhì)控血清樣本置于儀器試劑倉內(nèi)，保存溫度為2℃-8℃，并于置入后24 h、48 h和72 h進行穩(wěn)定性測試，每個樣本均于測定日上午和下午各測定一次，取均值。

1.3檢測結(jié)果評價

所有血樣檢測操作辦法均嚴格按照相應(yīng)試劑盒說明。評價方法參照美國臨床實驗室標準化委員會NCCLS標準，評價試劑的精密度、抗干擾性及回收率等，進行Hcy與對比試劑的統(tǒng)計學比較分析。

1.4統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件進行處理，計量資料應(yīng)用t檢驗，相關(guān)性采用回歸分析。

2 結(jié)果

2.1試劑精密度

如表1所示，應(yīng)用酶轉(zhuǎn)換法檢測低值質(zhì)控血清與高值質(zhì)控血清的Hcy精密度均低于5%，說明精密度較高。

2.2對比試驗

循環(huán)酶法的測定均值為（12.9±6.6）μmol/L，酶轉(zhuǎn)換法的測定均值為（12.8±7.3）μmol/L，兩組數(shù)據(jù)間比較差異無統(tǒng)計學意義（t=0.055，P>0.05），兩種方法經(jīng)回歸分析具有良好的相關(guān)性（r2=0.898）。

2.3抗干擾試驗

本組中分別采用干擾試劑濃度血紅蛋白<2 g/L，總膽紅素<340 μmol/L，甘油三酯<72 mmol/L，維生素C<10 g/L，如表2所示，酶轉(zhuǎn)換法的Hcy干擾性測定偏差<10%。

2.4回收試驗

分別加入濃度20 μmol/L標準溶液、濃度40 μmol/L標準溶液和生理鹽水的回收率為97.2%、103.8%和102.3%，平均101.1%。

2.5穩(wěn)定性試驗

如表3所示為穩(wěn)定性試驗結(jié)果數(shù)據(jù)，試劑穩(wěn)定性較好。

3 討論

Hcy水平與高血壓、冠心病等血管類病變密切相關(guān)，并成為其發(fā)病的獨立危險因素，因而研究Hcy的臨床測定方法具有重要的應(yīng)用價值[4-5]。本組研究采用的Hcy試劑主要采用酶轉(zhuǎn)換法測定Hcy水平，給臨床檢測帶來便捷，也提高了診斷效率，相比于傳統(tǒng)的Hcy檢測方法更具有實用性，易被醫(yī)患認同[6]。

本科轉(zhuǎn)換法測定Hcy的原理為：將受試樣本內(nèi)的Hcy經(jīng)二硫蘇糖醇還原形成還原型Hcy，再通過Hcy酶分解，由于Hcy酶具有極高的特異性，對Hcy識別度高，可準確的將Hcy分解為硫化氫、α氧代丁酸、NH3等產(chǎn)物。氧化劑FeCl3可促使分解獲得的硫化氫與呈色劑二乙基對苯二胺硫酸鹽發(fā)生化學反應(yīng)生成甲基藍色化物，該物質(zhì)與樣本中Hcy的濃度變化成正相關(guān)性，利用660 nm的波長進行吸光度測定，結(jié)果值可表達原樣本內(nèi)Hcy水平。

本組研究在NCCLS標準指導(dǎo)下對酶轉(zhuǎn)換法Hcy試劑進行精密度、抗干擾度、回收率、穩(wěn)定性等的試驗，并以循環(huán)酶法為對照，結(jié)果顯示酶轉(zhuǎn)換法檢測血清Hcy具有較高的精密度和較強的抗干擾度，試劑穩(wěn)定性好，回收率高，適合于實驗室生化檢驗的應(yīng)用。

參考文獻：

[1] 臨沂市漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布及其與同型半胱氨酸水平的相關(guān)性[J]. 中華醫(yī)學遺傳學雜志，2012，29（6）：705-707.

[2] 張曉坤，黎文成，古雅玨，等. 酶轉(zhuǎn)換法檢測血清同型半胱氨酸在常規(guī)生化檢驗中的評價[J]. 中國醫(yī)藥指南，2011，9（19）：5-7.

[3] 沈國平，邢建明，毛水瑩，等. 酶轉(zhuǎn)換法測定同型半胱氨酸的方法學評價[J]. 醫(yī)學研究雜志，2012，41（3）：131-132.

[4] 李觀華，張啟貴，劉曉峰，等. 血清同型半胱氨酸與高血壓之間關(guān)系的研究[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志，2011，32（20）：2411-2413.

[5] 邢曉光. 酶轉(zhuǎn)換法檢測同型半胱氨酸的評價及其對冠心病的早期診斷價值[J]. 檢驗醫(yī)學，2012，27（7）：571-573.

[6] 劉思波. 血漿同型半胱氨酸水平與代謝綜合征及其各相關(guān)因子的相關(guān)性研究[J]. 中國醫(yī)藥指南，2012，10（17）：510-512.