湖北地方茶樹種質(zhì)資源中酯型兒茶素含量研究

金孝芳　賈尚智　石亞亞　曹丹　龔自明

摘 要 以26份湖北地方茶樹種質(zhì)資源為供試材料，采用高效液相色譜分析檢測(cè)其春、夏、秋茶中CG、ECG、GCG、EGCG等4種主要酯型兒茶素組分含量。結(jié)果表明，CG、ECG、EGCG和酯型兒茶素總量在不同季節(jié)中的平均含量順序?yàn)橄牟?春茶>秋茶，GCG的順序?yàn)榇翰?夏茶>秋茶；在春、夏、秋茶中，絕大部分茶樹種質(zhì)資源酯型兒茶素組分含量間表現(xiàn)出的變化趨勢(shì)為EGCG>GCG>ECG>CG。各茶樹種質(zhì)資源春、夏、秋茶中酯型兒茶素的變異系數(shù)在13.21%～36.99%之間，季節(jié)間的變輻較小，個(gè)體間的變幅較大?；邗バ蛢翰杷氐哪昃烤垲惙治鲲@示，第2類群中CG和ECG含量高，第4類群中GCG和酯型兒茶素總量含量高。鄂茶7號(hào)、五峰310、五峰602、宣恩65等4個(gè)資源的夏茶和五峰108的夏茶、秋茶、年平均EGCG含量均在9.0%以上，可視為高EGCG茶樹種質(zhì)資源，可在今后育種和生產(chǎn)中加以利用。

關(guān)鍵詞 湖北；茶樹種質(zhì)資源；酯型兒茶素；EGCG；高效液相色譜

中圖分類號(hào) S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

茶樹中含有豐富的兒茶素，其含量一般為茶鮮葉干重的12%～24%，包括酯型兒茶素（復(fù)雜兒茶素）和非酯型兒茶素（簡單兒茶素），是茶葉中主要化學(xué)成分之一[1]。其中，酯型兒茶素所占比例最大，主要由兒茶素沒食子酸酯（CG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（GCG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）等4種組分組成。有研究表明，酯型兒茶素不僅是影響茶葉品質(zhì)好壞的關(guān)鍵因子之一[2-4]，還具有抗氧化、防癌抗癌、降低血脂、除膽固醇、抑制細(xì)菌病毒、抗突變等保健功能[5-9]。目前，酯型兒茶素尚不能人工合成，茶樹是其唯一來源，因此，近年來國內(nèi)相關(guān)學(xué)者開展了高酯型兒茶素茶樹種質(zhì)資源的篩選研究[10-12]。湖北省種茶歷史悠久，境內(nèi)茶樹種質(zhì)資源十分豐富。本文通過對(duì)收集保存于湖北省茶樹種質(zhì)資源圃的26份湖北地方茶樹種質(zhì)資源中主要酯型兒茶素組分進(jìn)行系統(tǒng)分析，旨在了解各種質(zhì)資源中主要酯型兒茶素組分的含量，從而為湖北省地方茶樹種質(zhì)資源的開發(fā)和利用提供科學(xué)參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以湖北省茶樹種質(zhì)資源圃中收集保存的26份湖北地方茶樹種質(zhì)資源作為供試材料（表1）。采摘各茶樹資源的春、夏、秋季一芽二葉新梢鮮葉，蒸青固樣，烘至足干，保存?zhèn)溆谩?/p>

CG（純度>98%）、ECG（純度>98%）、GCG（純度>98%）、EGCG（純度>98%）等4種酯型兒茶素標(biāo)準(zhǔn)樣品均購于國家標(biāo)準(zhǔn)品研究中心。乙腈和冰乙酸均為色譜純級(jí)試劑，水為娃哈哈純凈水。

1.2 方法

1.2.1 固樣方法 待鋁鍋中的水蒸汽大量逸出時(shí)，投入茶鮮葉，平攤于蒸架上，加蓋蒸3 min，取出茶樣，平攤于竹篩上晾干，移入鼓風(fēng)干燥箱110 ℃烘6 min，取出置竹篩上攤涼5 min，再次移入鼓風(fēng)干燥箱80 ℃烘至足干，裝袋、封口，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 試液制備方法 稱取0.50 g磨碎茶樣置于150 mL三角錐瓶中，加沸純凈水80 mL，立即移入沸水浴中浸提30 min；浸提完畢后，立即趁熱過濾并洗滌茶渣數(shù)次，濾液冷卻后定容至250 mL；搖均后，取一定量過0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.2.3 色譜分析條件 色譜柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：0.3%乙酸水溶液（v/v），流動(dòng)相B：乙腈；流速：0.8 mL/min，檢測(cè)波長：278 nm，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL。流動(dòng)相梯度冼脫程序見表2。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取各酯型兒茶素標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶于一定量的25%乙腈水溶液中，分別配制成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，制作工作曲線。

1.2.5 定性定量方法 根據(jù)酯型兒茶素（CG、ECG、GCG、EGCG）標(biāo)樣及相對(duì)保留時(shí)間作為定性方法，以峰面積計(jì)算其含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2003、SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同季節(jié)中酯型兒茶素含量分析

不同季節(jié)中酯型兒茶素含量的測(cè)試分析結(jié)果（表3）表明，酯型兒茶素含量變異幅度較大。CG含量春茶為0.37%～1.09%，夏茶為0.46%～1.51%，秋茶0.30%～0.97%，其春、夏、秋茶的平均含量順序?yàn)椋合牟?春茶>秋茶。ECG含量春茶為0.79%～2.39%，夏茶為1.40%～4.22%，秋茶為0.79%～2.60%，其春、夏、秋茶的平均含量順序?yàn)椋合牟?春茶>秋茶。GCG含量春茶為1.97%～4.59%，夏茶為1.66%～3.81%，秋茶為0.39%～3.07%，其春、夏、秋茶的平均含量順序?yàn)椋捍翰?夏茶>秋茶。EGCG含量春茶為4.39%～8.30%，夏茶為4.50%～10.63%，秋茶為3.99%～9.14%，其春、夏、秋茶的平均含量順序?yàn)椋合牟?春茶>秋茶。酯型兒茶素總量春茶為8.14%～13.74%，夏茶為9.97%～17.15%，秋茶為7.23%～14.17%，其春、夏、秋茶的平均含量順序?yàn)椋合牟?春茶>秋茶。在春茶中，各茶樹種質(zhì)資源酯型兒茶素組分含量間的變化趨勢(shì)為EGCG>GCG>ECG>CG；除夏茶中鄂茶2號(hào)、鄂茶10號(hào)等2份資源和秋茶中鄂茶2號(hào)、鄂茶6號(hào)、鄂茶10號(hào)等3份資源表現(xiàn)出不同的變化規(guī)律（EGCG>ECG>GCG>CG）外，其余茶樹資源在夏、秋茶中酯型兒茶素組分含量間的變化趨勢(shì)也均為EGCG>GCG>ECG>CG。

夏茶中CG含量的變異系數(shù)最大，為36.99%，春茶中酯型兒茶素總量的變異系數(shù)最小，為13.21%，這表明參試茶樹種質(zhì)資源酯型兒茶素含量的變異系數(shù)均較大，且其變異系數(shù)的變幅范圍也較大。此外，CG、ECG、GCG、EGCG和酯型兒茶素總量在不同季節(jié)（春、夏、秋）間的變異系數(shù)變輻較小，但其個(gè)體間的變異系數(shù)變幅較大。

2.2 茶樹種質(zhì)資源中酯型兒茶素含量綜合評(píng)價(jià)

基于酯型兒茶素含量綜合評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)分析見表4，從表4可知，在26份地方茶樹種質(zhì)資源中，CG、ECG、GCG、EGCG、酯型兒茶素總量的3季（春、夏、秋）含量平均值變化范圍分別為0.39%～1.11%、1.05%～3.07%、1.93%～3.56%、4.49%～9.36%、8.69%～14.74%，各組分含量間的總體變化趨勢(shì)為EGCG>GCG>ECG>CG。各組分3季含量平均值的變異系數(shù)最大的是ECG含量，為29.66%，其次為CG、EGCG、GCG和酯型兒茶素總量，變異系數(shù)的變化范圍較大。

2.3 茶樹種質(zhì)資源中酯型兒茶素含量聚類分析

根據(jù)各茶樹種質(zhì)資源中CG、ECG、GCG、EGCG、酯型兒茶素總量等組分的3季含量平均值進(jìn)行聚類分析，可以將26份茶樹種質(zhì)資源聚分為4個(gè)類群（圖1）。第1類群包括HBW-1、HBW-2、鄂茶5號(hào)、五峰210、五峰211、鄂茶4號(hào)、五峰602、五峰310、鄂茶3號(hào)、五峰212、鄂茶6號(hào)、鄂茶8號(hào)、五峰401、賀勝1號(hào)、五峰107、鶴峰40、鄂茶1號(hào)等17份資源，第2類群包括鄂茶2號(hào)、鄂茶10號(hào)等2份資源，第3類群包括鄂茶9號(hào)、鶴峰6號(hào)、五峰115等3份資源，第4類群包括鶴峰15、宣恩65、鄂茶7號(hào)、五峰108等4份資源。依據(jù)聚類分析結(jié)果對(duì)各類群的酯型兒茶素組分進(jìn)行比較分析（表5），可以看出第2類群中CG和ECG含量高，第4類群中GCG和酯型兒茶素總量含量高；對(duì)于EGCG而言，第1類群和第4類群中均存在高EGCG茶樹種質(zhì)資源。

3 討論與結(jié)論

通過對(duì)26份湖北地方茶樹種質(zhì)資源中主要酯型兒茶素組分含量分析，CG、ECG、EGCG和酯型兒茶素總量的春、夏、秋茶平均含量順序?yàn)椋合牟?春茶>秋茶，而GCG的春、夏、秋茶平均含量順序?yàn)椋捍翰?夏茶>秋茶；除夏茶中鄂茶2號(hào)、鄂茶10號(hào)等2份資源和秋茶中鄂茶2號(hào)、鄂茶6號(hào)、鄂茶10號(hào)等3份資源的酯型兒茶素組分含量間表現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)（EGCG>ECG>GCG>CG）外，其余茶樹種質(zhì)資源在春、夏、秋茶中表現(xiàn)出的變化趨勢(shì)均為EGCG>GCG>ECG>CG；各資源中CG、ECG、GCG和EGCG的年平均含量間的總體變化趨勢(shì)也為EGCG>GCG>ECG>CG。此外，26份茶樹種質(zhì)資源春、夏、秋茶中CG、ECG、GCG、EGCG和酯型兒茶素總量的變異系數(shù)變化范圍為13.21%～36.99%，變異系數(shù)及其變幅范圍均較大，這表明湖北地方茶樹種質(zhì)資源在酯型兒茶素組分上存在著豐富的遺傳多樣性；CG、ECG、GCG、EGCG和酯型兒茶素總量在不同季節(jié)間的變異系數(shù)變輻較小，但個(gè)體間的變異系數(shù)變幅較大。根據(jù)各茶樹種質(zhì)資源中CG、ECG、GCG、EGCG和酯型兒茶素總量的年均含量進(jìn)行聚類分析，可以將26份茶樹種質(zhì)資源聚分為4個(gè)類群，第2類群中CG和ECG含量高，第4類群中GCG和酯型兒茶素總量含量高。對(duì)于EGCG而言，第1類群和第4類群中均存在高EGCG茶樹種質(zhì)資源。

EGCG是茶葉酯型兒茶素的核心組分，是茶葉功能性的關(guān)鍵因子之一。目前，EGCG尚不能人工合成，茶樹是EGCG的唯一來源，因此近年來國內(nèi)相關(guān)學(xué)者開展了高EGCG茶樹種質(zhì)資源的篩選研究工作[11-15]。對(duì)于茶樹新梢中EGCG含量需高達(dá)多少才可視為高EGCG特異性資源尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，林金科等[13]研究認(rèn)為含量超過13%的視為高EGCG資源，唐曉波等[15]研究認(rèn)為含量超過9%的視為高EGCG資源，而龔志華等[16]研究認(rèn)為含量超過7%的視為高EGCG資源。因此，本試驗(yàn)的26份湖北地方茶樹種質(zhì)資源中，鄂茶7號(hào)、五峰310、五峰602、宣恩65等4個(gè)資源的夏茶EGCG含量均在9.0%以上，五峰108的夏茶、秋茶及年平均EGCG含量也均在9.0%以上，這些資源可視為高EGCG資源，既可作為茶樹品質(zhì)遺傳改良的重要種質(zhì)資源，又可作為從茶樹鮮葉中直接提取EGCG的特異資源，這對(duì)于茶樹新品種選育、EGCG工廠化生產(chǎn)等方面都具有重要意義。

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