84消毒液對藻酸鹽印模消毒的滅菌效果研究

唐秋玉等

【摘要】目的 選用不同濃度的84消毒液，對藻酸鹽印模用不同時間的浸泡消毒，觀察其抑菌效果，找出適合臨床運用的藻酸鹽印模的消毒方法。方法 制取藻酸鹽印模，分別浸泡在配置金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌4種菌懸液中，再分別浸泡5組不同濃度有效氯含量的84消毒液，共20個小組，每組50個印模，共1000個，觀察每個組印模的抑菌效果。結(jié)果 有效氯濃度8000 mg/L 浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L 浸泡20 min組和有效氯濃度800 mg/L 浸泡20 min組3個組對印模表面以上4種細菌滅菌效果較好，組間滅菌率比較，P>0.05，無統(tǒng)計學意義；有效氯濃度400 mg/L 浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L 浸泡30 min組2個組對印模表面以上4種細菌滅菌效果較差，組間滅菌率比較，P<0.05，有統(tǒng)計學意義；有效氯濃度400 mg/L 浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L 浸泡30 min組分別與其他3組滅菌率比較，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。結(jié)論 84消毒液有效氯濃度≥ 800 mg/L，對藻酸鹽印模表面大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和白色念珠菌抑菌效果較好。

【關(guān)鍵詞】84消毒液、藻酸鹽印模、浸泡、消毒、滅菌

【Abstract】 Objective： Selection of different concentrations of 84 disinfectant for disinfecting alginate impression soaked at different times to observe the inhibitory effect of bacterium， identify a suitable disinfection methods of alginate impression for clinical application. Methods： Preparation of alginate impression ， respectively immersed in the configuration of Staphylococcus aureus ， Escherichia coli ， Bacillus subtilis and Candida albicans four kinds of bacterial suspension . Then respectively soaked in five 84 disinfectant of different concentrations of chlorine content ， a total of 20 groups ， each group has 50 impressions， a total of 1000 impressions ， the group observed inhibitory effect of each impression. Results： The chlorine concentration 8000 mg / L soak 15 min group ， the chlorine concentration 2000 mg / L for 20 min group and the chlorine concentration 800 mg / L for 20 min group， three groups impressions inhibitory effect of bacterium were better to above four bacteria ， compare the sterilization rate of 3 groups ， P> 0.05， not statistically significant ； The chlorine concentration of 400 mg / L soak 30 min group and the chlorine concentration 200 mg / L soak 30 min group ， two groups impressions inhibitory effect of bacterium were worse to above four bacteria， compare the sterilization rate of 2 groups ， P <0.05， statistically significant ； The chlorine concentration 400 mg / L soak 30 min group and the chlorine concentration 200 mg / L soak 30 min group ， respectively compare with other three groups of sterilization rate ， P <0.05， statistically significant. Conclusion： The chlorine concentration of 84 disinfectant ≥ 800 mg / L， inhibitory effect is better to Escherichia coli， Staphylococcus aureus， Bacillus subtilis and Candida albicans on the surface of alginate impression.

【key words 】 84 disinfectant ， alginate impression ， soak， disinfect ， inhibitory effect of bacterium

【中圖分類號】R78 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0006-01

口腔科是血源性傳染疾病發(fā)病率較高的科室，因為醫(yī)護人員中絕大多數(shù)都會接觸到病人的血液、唾液及口腔其他分泌物，這些都極有可能帶有大量的傳染性微生物，例如常見的乙肝病毒，腸道致病菌——大腸桿菌，還有金黃色葡萄球菌等[1]，曾有研究者對未經(jīng)消毒的印模進行檢測，發(fā)現(xiàn)印模的表面存在HBV（hepatitis B virus，乙型肝炎病毒）和HIV（Human Immunodeficiency Virus，人類免疫缺陷病毒）[2]。研究表明，口腔科醫(yī)護人員血清HbsAg（hepatitis B surface antigen，乙肝表面抗原）陽性率是其他科室的4倍[3]。在口腔制取的印模不進行有效地消毒，及其容易被感染。尤其是艾滋病和乙型肝炎，是現(xiàn)在傳播性極強的傳染病，在醫(yī)護人員與病人、醫(yī)護人員與醫(yī)護人員、病人與病人之間極易交叉感染，因此，做好消毒工作對醫(yī)護人員及患者的健康非常重要。CDC（Centers for Disease Control， 疾病控制中心）認為，每一個在口腔科就診的病人都應(yīng)該被看作是病原菌攜帶者，每一個口腔印模都應(yīng)該進行消毒[4]。

本實驗選用具有代表性的常用消毒劑——84消毒液，對藻酸鹽印模進行浸泡消毒，觀察其滅菌效果，找出適合臨床的藻酸鹽印模消毒方法。

1.2.4 制備菌懸液

在超凈臺上，將接種環(huán)放在酒精燈上加熱滅菌3次，等接種環(huán)冷卻后分別將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌4種菌種接種在無菌的平板上，再將這些分別接種的4種細菌平板放入恒溫培養(yǎng)箱中，24 h后觀察是否接種上，并達到所需用量，備用。用比濁儀將4種細菌分別和蒸餾水配置出500 ml 1.0 × 108 個/ml的金黃色葡萄球菌菌懸液、大腸桿菌菌懸液、白色念珠菌菌懸液、枯草桿菌菌懸液，每次現(xiàn)用現(xiàn)配，確保菌懸液中的細菌量。

1.2.5 印模抑菌實驗分組

分為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、枯草桿菌四個大組，每個大組又根據(jù)84消毒液的有效氯濃度和浸泡時間不同，又分為五個小組：①有效氯濃度為8000 mg/L浸泡15 min；②有效氯濃度為2000 mg/L浸泡 20 min；③有效氯濃度為800 mg/L浸泡 20 min；④有效氯濃度為400 mg/L浸泡 30 min；⑤有效氯濃度為200 mg/L浸泡 30min。共20個小組，每個小組取50個印模，共1000個印模，如圖2所示。

1.2.5.1 制取印模

根據(jù)藻酸鹽印模材料規(guī)定的水粉比例和金屬盒的大小，反復(fù)測量出制取一個印模最適合的蒸餾水與藻酸鹽印模的比例為57 ml ： 21 g。先將橡皮碗、調(diào)拌刀、金屬托盤放入立式壓力蒸汽滅菌器中經(jīng)過121℃ 120 KP滅菌20min后，量取11 ml 蒸餾水放入干燥無菌的橡皮碗中，蒸餾水控制在20℃，在用電子天平秤取4 g 藻酸鹽印模材料放入橡皮碗中，用0.5min調(diào)拌均勻后，裝入沒有打孔的金屬盒中，保證底面完全被印模材料覆蓋，沒有氣泡產(chǎn)生，3 min后垂直取下，室溫控制在23℃左右。

1.2.5.2 印模染菌、消毒、培養(yǎng)細菌

將制取的印模分別浸泡在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、枯草桿菌4種菌懸液中3 min；然后取出印模浸泡在不同有效氯濃度的84消毒液中，浸泡相應(yīng)的時間；待時間達到后，取出印模，在無菌的超凈臺上晾干，將底面輕壓于平板上，如圖3所示。在平板上記錄好時間和分組，放入電熱恒溫培養(yǎng)箱中，將溫度調(diào)至36.8℃，24 h后觀察平板上是不是有菌落生成。操作中要盡量防止其他細菌污染，避免交叉污染。

1.3 統(tǒng)計學分析

運用x2檢驗處理所得數(shù)據(jù)，檢驗水準為雙側(cè)α=0.05。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析。

3 討論

藻酸鹽印模材料因其有良好的流動性和制取的印模精確，價格低廉，使用方便等優(yōu)點，在臨床上被普遍應(yīng)用。因其為水膠體印模材料，水分的吸收和缺失極易導(dǎo)致印模的尺寸發(fā)生變化，所以不同藻酸鹽印模材料與消毒劑的種類及浸泡時間存在一定聯(lián)系。84消毒液能殺滅細菌芽胞及各類致病細菌，具有高效、廣譜、無毒、能殺滅結(jié)核分支桿菌，價格低廉等特點，被臨床廣泛使用。有研究結(jié)果表示，當所有濃度的84消毒液消毒5、10min時對結(jié)核桿菌均不能達到滅菌作用，有效氯濃度8000mg/L消毒15min時對結(jié)核桿菌有滅菌作用，有效氯濃度2000mg/L 、800mg/L消毒20min時對結(jié)核桿菌有滅菌作用，有效氯濃度400mg/L 、200mg/L消毒30min時對結(jié)核桿菌有滅菌作用，有效氯濃度80mg/L消毒60min時也對結(jié)核桿菌也有滅菌作用[6]。因為有效氯濃度8000 mg/L消毒15 min滅菌效果較好，用來作為參考指標，而藻酸鹽印模浸泡在84消毒液中超過30分鐘就會對印模尺寸變化產(chǎn)生不利影響[7]。所以不選擇超過30分鐘的浸泡濃度，選擇有效氯濃度8000 mg/L浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L浸泡20 min組和有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組、有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L浸泡30 min組5個組之間做比較，最終為臨床找到最適合的藻酸鹽印模消毒方法。

金黃色葡萄球菌是美國公職分析化學師協(xié)會（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）消毒實驗所規(guī)定的標準菌種，大腸桿菌是腸道菌的代表，也是一種條件致病菌，為革蘭氏陰性菌，白色念珠菌是真菌殺滅實驗所規(guī)定的標準菌種，也是口腔最常見的條件致病菌，尤其是長期使用活動義齒的人，口腔中常有許多白色念珠菌黏附，枯草桿菌對消毒劑有很強的抗性，一般認為是滅菌實驗所必選的，本實驗中選擇對枯草桿菌的滅菌效果實驗，作為評定84消毒液對藻酸鹽印模消毒的參考指標[8]。選擇這4種具有代表性的細菌對它們進行消毒，可了解本實驗中84消毒液對口腔條件致病微生物的殺菌抑菌效果，未選用厭氧菌是因為印模表面的細菌是暴露在空氣中的，厭氧菌不用消毒也會死亡。

本實驗結(jié)果顯示，有效氯濃度8000 mg/L 浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L 浸泡20 min組、有效氯濃度800 mg/L 浸泡20 min組、有效氯濃度400 mg/L 浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L 浸泡30 min組，五個組不同有效氯濃度與時間分別對印模表面的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌3種細菌消毒后的滅菌率做比較，滅菌效果均較好，P>0.5，沒有統(tǒng)計學意義，提示這3種細菌對84消毒液的敏感性較強，這與韓秀欣[2]的實驗結(jié)果相似，正如王利民[9]等人認為的，以上3種細菌對消毒劑的敏感性均較強。而枯草桿菌滅菌率隨有效氯含量的降低而降低，有效氯濃度400 mg/L 浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L 浸泡30 min組，兩個組的滅菌率分別為76%和46%，滅菌效果較差，提示與其他3種細菌相比，對84消毒液敏感性較弱，抗菌性較強。

出現(xiàn)以上結(jié)果的原因可能是：84消毒液的主要成分為次氯酸鈉，次氯酸鈉在水中可分解出次氯酸，次氯酸侵入細胞內(nèi)與蛋白質(zhì)發(fā)生氧化作用破壞其磷酸脫氫酶，使其新陳代謝失調(diào)而導(dǎo)致細菌死亡[10]。次氯酸鈉分解產(chǎn)生的氯離子顯著改變細菌的滲透壓，也可導(dǎo)致細菌死亡[11]。然而，枯草桿菌可以產(chǎn)生芽孢，當以孢子形式存在時，對高溫、酸堿、擠壓和溫度變化都有極強的抵御能力，對84消毒液亦是如此。

在枯草桿菌和白色念珠菌兩個大組中，滅菌率隨著有效氯濃度的降低而逐漸減小，這與李排兵等人的研究結(jié)果[12]相似，當有效氯濃度升高，滅菌效果越好。而大腸桿菌和金黃色葡萄球菌這兩個大組的滅菌率并沒有隨著有效氯濃度的降低而逐漸減小。

本實驗結(jié)果中，大腸桿菌組有效氯濃度8000 mg/L 浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L 浸泡20 min組和有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組，三個組滅菌率為100%，認為消毒合格，而有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組滅菌率為98%，認為消毒不合格。而閆翠英等人實驗發(fā)現(xiàn)，有效氯濃度500 mg/L浸泡15min，對大腸桿菌的滅菌率達99.99%[13]。本實驗結(jié)果可能存在以下原因：①有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組與有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組兩組比較，由于浸泡時間較短，不能產(chǎn)生較好的滅菌強度；②由于所取印模個數(shù)較少，即使一個印模產(chǎn)生細菌也會對整組的滅菌率造成較大的影響。從統(tǒng)計學上看，這5個組間沒有統(tǒng)計學意義，即可認為消毒效果相同。根據(jù)我國對抗菌塑料的標準規(guī)定：滅菌率大于90%可報告有抗菌作用，大于99%可報告有強抗菌作用[14]，因此，可以認為這5個組均有抗菌作用。

金黃色葡萄球菌組：有效氯濃度8000 mg/L浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L浸泡20 min組和有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組三個組中，滅菌率都達到了100%，消毒合格；而有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組的滅菌率為96%，有效氯濃度200 mg/L浸泡30 min組的滅菌率為98%，都沒有達到歐洲的消毒實驗標準，但在浸泡相同時間下，隨著有效氯濃度的降低，滅菌率反而升高，可能存在以下原因：在操作過程中，可能因為操作不當，使消毒后的印模或培養(yǎng)基沾染上細菌，造成誤差；由于所取印模個數(shù)較少，即使一個印模產(chǎn)生細菌也會對整組的滅菌率造成較大的影響。從統(tǒng)計學上看，這5個組間沒有統(tǒng)計學意義，即可認為消毒效果相同，這五個組均有抗菌作用。

枯草桿菌組：有效氯濃度降低，滅菌率也隨之減小。在有效氯濃度8000 mg/L浸泡15 min組和有效氯濃度2000 mg/L浸泡20 min組兩個組中，合格率為100%，消毒合格，而有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組滅菌率為96%，雖未消毒合格，但與前兩組對比沒有統(tǒng)計學意義，可認為消毒強度一樣，可認為這兩個組有抗菌作用。有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組和有效氯濃度200 mg/L浸泡30 min組的滅菌率分別為76%和46%，與前三組相比有統(tǒng)計學意義。由此可以看出，相同浸泡時間下，低濃度的84消毒液對枯草桿菌的消毒效果較差。

白色念珠菌組：有效氯濃度8000 mg/L浸泡15 min組、有效氯濃度2000 mg/L 浸泡20 min組和有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min組三個組中，滅菌率都達到了100%，消毒合格。而有效氯濃度400 mg/L浸泡30 min組的滅菌率為96%，有效氯濃度200 mg/L浸泡30 min組的滅菌率為94%，都沒有消毒合格，在浸泡同樣的時間下，有效氯濃度下降，滅菌率也基本呈下降趨勢。從統(tǒng)計學上看，這5個組間沒有統(tǒng)計學意義，即可認為消毒效果相同，這五個組均有抗菌作用。

按照歐洲消毒實驗標準，本實驗選用84消毒液有效氯濃度8000 mg/L浸泡15 min、有效氯濃度2000 mg/L 浸泡20 min和有效氯濃度800 mg/L浸泡20 min，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和白色念珠菌4種細菌的滅菌率均達到合格。

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