費(fèi)約果葉片槲皮素的提取工藝研究

馬澤剛等

摘要[目的]研究費(fèi)約果葉片槲皮素提取工藝，優(yōu)選最佳提取條件。[方法]以提取率、槲皮素收率和槲皮素純度為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)法，考察提取溶劑、提取溫度、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素收率的影響，優(yōu)選出最佳提取工藝條件。[結(jié)果]最佳槲皮素提取工藝是在50 ℃條件下，將費(fèi)約果葉片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素純度分別為3.486%、0.0334%、0.958%。[結(jié)論]此法高效、成本低、操作方便、工藝簡單，為費(fèi)約果葉片槲皮素提取工藝的進(jìn)一步研究提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞費(fèi)約果葉片；槲皮素；提取工藝

中圖分類號(hào)S667.9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）36-12881-02

Abstract[Objective] To determine the optimal extraction technology of quercetin from the leaves of Feijoa sellowiana Berg. [Method] Taking extraction rate， purity and yield of quercetin as the indices， effects of extraction solvent， extraction temperature， extraction time， solid to liquid ratio and extraction times on the extraction rate of quercetin were studied. And the optimal extraction technology was selected. [Result] The optimal extraction technology was as follow： leaves of Feijoa sellowiana Berg powder was added into 90% alcohol with the ratio of l∶ 10 （g/ml） under 50 ℃， the leaves was by reflux extraction for 4 times with each time for 2 h. The extraction rate， extraction rate of quercetin， and purity of quercetin were 3.486%，0.033 4%and 0.958%， respectively. [Conclusion] The extraction technology was efficient， economical， convenient and this study provided a scientific basis for optimizing the extraction technology of quercetin.

Key wordsLeaves of Feijoa sellowiana Berg； Quercetin； Extraction technique

費(fèi)約果（Feijoa sellowiana Berg）又名鳳梨番石榴、巴西番石榴、無花果番石榴，系桃金娘科費(fèi)約果屬常綠灌木或小喬木。費(fèi)約果葉片主要化學(xué)成分包括維生素E、黃酮、豆甾醇、β-胡蘿卜素、對(duì)羥基苯乙醇和多酚類成分[1]，具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫和抗炎等藥理作用[2]。費(fèi)約果葉片中含有豐富的黃酮物質(zhì)，研究表明，黃酮類化合物能防治心腦血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)疾病，具有抗炎抑菌、降低血糖以及增強(qiáng)免疫功能等藥理作用[3-4]。槲皮素是黃酮類化合物中最具代表性的生理活性物質(zhì)之一，其在天然產(chǎn)物中以單體和苷的形式大量存在。近年來研究表明槲皮素具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗自由基以及保護(hù)血管等[5-6]。目前對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取工藝研究的文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。筆者采用HPLC分析法，以提取率、槲皮素收率、槲皮素純度為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)比較了不同提取因素對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響，以期為費(fèi)約果葉片的開發(fā)利用提供了理論參考和試驗(yàn)指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1材料

費(fèi)約果葉片于2013年9月中旬由四川樂山同泰生物科技有限公司提供。

1.2儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），高效液相色譜儀（美國Agilent公司）。槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)111566200402，中國藥品生物制品檢定所），甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3方法

1.3.1槲皮素含量的測定。

1.3.1.1色譜條件。

色譜柱為XDB C18（4.5×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇∶0.1%磷酸溶液（60∶40），柱溫25 ℃，檢測波長360 nm，流速0.6 ml/min。

1.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

稱取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品4.8 mg，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇溶液并定容至刻度，然后精密吸取5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度。如此反復(fù)再稀釋2次。分別吸取25 μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積的積分值（y）為縱坐標(biāo)、槲皮素濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=56 296x-202.77（r2=0999 8）。

1.3.2單因素試驗(yàn)。

1.3.2.1提取溶劑的選擇。

取費(fèi)約果葉片粉末（60目）5 g，提取溶劑分別用10倍粉末量的水，20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇，pH=8、10、13的NaOH溶液，50 ℃下回流提取2 h。抽濾，濾渣用相應(yīng)溶劑洗滌，合并并濃縮濾液，置于10 ml容量瓶中，定容，搖勻，得供試品溶液。平行提取3次。然后分別吸取25 μl 注入液相色譜儀，測槲皮素含量，計(jì)算收率和純度。

1.3.2.2提取溫度的選擇。

取費(fèi)約果葉片粉末（60目）5 g，提取溶劑為10倍粉末量的90%乙醇，分別在40、50、60、70、80、90 ℃下回流提取2 h。抽濾，濾渣用相應(yīng)溶劑洗滌，合并并濃縮濾液，置于10 ml容量瓶中，定容，搖勻，得供試品溶液。平行提取3次。然后分別吸取25 μl注入液相色譜儀，測槲皮素含量，計(jì)算收率和純度。

1.3.2.3提取時(shí)間的選擇。

取費(fèi)約果葉片粉末（60目）5 g，提取溶劑為10倍粉末量的90%乙醇，50 ℃下分別回流提取1、2、3、4、5 h。抽濾，濾渣用相應(yīng)溶劑洗滌，合并并濃縮濾液，置于10 ml容量瓶中，定容，搖勻，得供試品溶液。平行提取3次。然后分別吸取25 μl 注入液相色譜儀，測槲皮素含量，計(jì)算收率和純度。

2結(jié)果與分析

2.1提取溶劑對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響

由表1可見，使用乙醇作為溶劑時(shí)的提取效果比水和堿水作為溶劑的提取效果好。當(dāng)乙醇濃度在20%～60%時(shí)，隨著乙醇濃度的不斷增大，槲皮素的收率也增大；當(dāng)乙醇濃度在60%～100%時(shí)，隨著乙醇濃度的不斷增大，槲皮素的收率不斷減小，當(dāng)乙醇濃度達(dá)100%時(shí)，高效液相色譜儀未檢測出槲皮素。當(dāng)乙醇濃度達(dá)60%時(shí)，槲皮素的收率最大，但水溶性雜質(zhì)也容易被提取出來，導(dǎo)致其純度較低。因此，綜合槲皮素的收率和純度來考慮，確定提取溶劑為90%乙醇。

2.2提取溫度對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響

從表2可以看出，隨著提取溫度的升高，槲皮素收率呈上升趨勢(shì)，當(dāng)溫度達(dá)90 ℃時(shí)，槲皮素收率最大，但其純度較低，其他水溶性雜質(zhì)含量高多。因此，綜合槲皮素的收率和純度來考慮，確定提取溫度為50 ℃。

2.3提取時(shí)間對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響

由表3可見，隨著提取時(shí)間的增長，槲皮素收率呈上升趨勢(shì)，但其變化不大，可能是此因素不是提取槲皮素的主要因素。因此，綜合槲皮素的收率和純度來考慮，確定提取時(shí)間為2 h。

2.4料液比對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（表4），隨著固液比增加，槲皮素的收率增加較為明顯，當(dāng)提取料液比達(dá)1∶10以后，收率增加較小。綜合槲皮素的收率和純度來考慮，因此確定最佳料液比為1∶10。

2.5提取次數(shù)對(duì)費(fèi)約果葉片槲皮素提取的影響

從表5可以看出，隨著提取次數(shù)增加，提取率、槲皮素的收率增加，純度也在增加。但提取次數(shù)分別為4次、5次時(shí)，提取率、槲皮素的收率及純度變化不大?？紤]試驗(yàn)實(shí)際情況，因此最佳提取次數(shù)為4次。

3討論

綜上所述，最佳槲皮素的提取工藝為在50 ℃條件下，將費(fèi)約果葉片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素純度分別為3.486%、0033 4%、0.958%。通過驗(yàn)證試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其結(jié)果與預(yù)測結(jié)果接近，表明該提取工藝穩(wěn)定、可行?，F(xiàn)有技術(shù)中，尚未見有費(fèi)約果葉片槲皮素提取技術(shù)的報(bào)道。同時(shí)該試驗(yàn)也為今后費(fèi)約果葉片的開發(fā)利用提供了理論參考和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

[1] DAVID B D.FeijoasOrigins，Cultivation and uses[M].New Zealand：The Horticucture and Food Research Institute of New Zealand Ltd.，2002：7-79.

[2] VUOTTO M L，BASILE A，MOSCATIELLO V，et al.Antimicrobial and antioxidant activities of Feijoa sellowiana fruit[J].Int J Antimicrob Agents，2000，13（3）：197-201.

[3] 宋慧，李勇.黃酮類化合物的保健作用[J].中國食物與營養(yǎng)，2004（11）：45-47.

[4] 曹緯國，劉志勤，邵云，等.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào)，2003，3（12）：2241-2247.

[5] 陳輝.槲皮素的心血管保護(hù)作用[J].國際心血管病雜志，2007，34（2）：57-59.

[6] 舒毅，譚陶，張恩字，等.槲皮素的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].華西藥學(xué)雜志，2008，23（6）：689-691.