豬變形桿菌病的研究進(jìn)展

劉澤文　袁芳艷　田永祥等

摘要豬變形桿菌病是由奇異變形桿菌引起的豬的一種細(xì)菌性人畜共患傳染病。對(duì)奇異變形桿菌的特性、豬奇異變形桿菌的臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷和豬奇異變形桿菌病的綜合防治措施等方面進(jìn)行了綜述，以期為規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)該病的防治提供借鑒。

關(guān)鍵詞豬；奇異變形桿菌；診斷；防治

中圖分類(lèi)號(hào)S828文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）12-03578-02

基金項(xiàng)目湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（2011620001003）；動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（2012ZD156）。

作者簡(jiǎn)介劉澤文（1969-），男，湖北赤壁人，副研究員，從事畜禽疾病診斷與預(yù)防研究。*通訊作者，研究員，從事畜禽傳染病研究。

變形桿菌（Proteus vulgaris）是人和動(dòng)物的寄生菌和病原菌。變形桿菌屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無(wú)恒變形桿菌，其中奇異變形桿菌（Proteus mirabilis，PM）是致病性較為嚴(yán)重的致病菌，廣泛分布于人和動(dòng)物的體表、黏膜及消化道，其產(chǎn)生的毒素可引起中毒，是一種常見(jiàn)的條件性致病菌[1]。當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)，PM可以感染人和動(dòng)物，引起發(fā)病。我國(guó)也有豬[2]、雞[3]和犢牛[4]發(fā)生奇異變形桿菌發(fā)病的報(bào)道。近年來(lái)，奇異變形桿菌病已成為危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細(xì)菌性傳染病[5-6]，由于其還可以引起人類(lèi)的原發(fā)性或繼發(fā)性感染，造成人類(lèi)食物中毒。因此，對(duì)這種人畜共患新傳染病應(yīng)引起高度重視。

1 奇異變形桿菌的特性

豬奇異變形桿菌屬于腸桿菌科、變形桿菌屬，是革蘭氏陰性細(xì)菌，有鞭毛，變形桿菌呈明顯的多形性，有球形和絲狀形，大小約（0.4～0.6）μm×（1～3）μm，為周身鞭毛菌，運(yùn)動(dòng)活潑。該菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在固體培養(yǎng)基上呈擴(kuò)散生長(zhǎng)，形成以菌種部位為中心的厚薄交替、同心圓形的層層波狀菌苔。在培養(yǎng)基中添加0.1%石碳酸或0.4%硼酸，可以抑制其擴(kuò)散生長(zhǎng)，形成一般的單個(gè)菌落。在SS平板上可以形成圓形、扁薄、半透明的菌落[7]。培養(yǎng)物有特殊臭味，在血瓊脂平板上有溶血現(xiàn)象。

奇異變形桿菌氧化酶、賴(lài)氨酸脫羧酶、吲哚、枸櫞酸、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、賴(lài)氨酸、鳥(niǎo)氨酸均呈陰性；苯丙氨酸脫氨酶、脲酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶呈陽(yáng)性；能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)少量氣；不能發(fā)酵乳糖和衛(wèi)矛醇；不能產(chǎn)生靛基質(zhì)；有動(dòng)力；能產(chǎn)生H2S；不能分解枸櫞酸鹽[8]。

2 豬奇異變形桿菌病的臨床診斷

2.1 臨床癥狀發(fā)病豬食欲廢絕，皮膚蒼白，被毛粗亂，體溫升高，達(dá)42 ℃以上，咳嗽，呼吸加快。當(dāng)體溫升高至41 ℃以上時(shí)，病豬氣喘，呼吸急促，腹式呼吸，犬坐，張口伸舌，肺部聽(tīng)診，濕性羅音明顯。病初偶有嘔吐，繼而腹瀉。水樣糞便中有黏液，具有腐敗臭味。大多數(shù)病豬四肢乏力，步態(tài)不穩(wěn)，腹部皮膚潮紅，眼結(jié)膜充血，頸下與腹下發(fā)紺。重癥者鼻孔流出泡沫樣黏液。

2.2病理變化病死豬的肺明顯腫脹，呈紅色肝變，觸之堅(jiān)實(shí)，肺的尖葉與心葉彌漫性出血，隔葉有出血斑塊，氣管和支氣管內(nèi)充以大量白色泡沫樣黏液，肺與心包有的與胸膜粘連。肺門(mén)淋巴結(jié)腫脹，充、出血，橫切面濕潤(rùn)，呈大理石樣變。胃黏膜潰瘍，易脫落，胃底部充、出血。空腸與回腸黏膜有微量出血和潰瘍，腸壁增生、腫脹，腸內(nèi)容物呈灰黃色或黃綠色，附有黏液，且具有特殊氣味，小腸黏膜彌慢性出血。 腸系膜淋巴結(jié)水腫， 回盲口無(wú)出血。

2.3病理組織學(xué)變化取病死豬的肺與腸等組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)肺細(xì)支氣管周?chē)罅苛馨图?xì)胞浸潤(rùn)，其黏膜上皮壞死、脫落。黏膜下層血管充血，并有多量淋巴細(xì)胞和少量單核吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁充血，肺泡內(nèi)有滲出的細(xì)胞，與單核吞噬白細(xì)胞形成含鐵血黃素；小腸絨毛上皮壞死、脫落，黏膜層和黏膜下層血管充血，有單核吞噬細(xì)胞、嗜酸中性白細(xì)胞、酸性白細(xì)胞浸潤(rùn)，腸絨毛和腸腺杯狀細(xì)胞明顯擴(kuò)大；肺門(mén)淋巴結(jié)、淋巴小結(jié)數(shù)量增多，明顯擴(kuò)大，生發(fā)中心明顯，淋巴竇內(nèi)皮活化，有較多的單核吞噬細(xì)胞，淋巴結(jié)內(nèi)血管充血；腎小球血管內(nèi)皮輕度增生，腎小管上皮顆粒變性或壞死，腎小管腔內(nèi)有尿圓柱；肝淤血，肝細(xì)胞變性。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離與鑒定分離細(xì)菌可用病豬的胃、小腸、盲腸內(nèi)容物及結(jié)腸黏膜、腸系膜淋巴結(jié)、肺臟及肺門(mén)淋巴結(jié)等。無(wú)菌采集病豬病料，分別接種于鮮血瓊脂平板和普通肉湯培養(yǎng)基中，將接種的鮮血瓊脂平板放置于37 ℃下培養(yǎng)24 h后，可見(jiàn)由細(xì)菌接種點(diǎn)向周?chē)w徙性擴(kuò)散生長(zhǎng)的灰色平鋪菌落，且以接種點(diǎn)為中心形成水波紋狀圓心圈，覆蓋整個(gè)平板上；另外，血平板變黑，散發(fā)出特殊的腐敗性臭味。普通肉湯培養(yǎng)基于37 ℃下培養(yǎng)24 h后呈均勻混濁樣，并有氣泡產(chǎn)生。培養(yǎng)物經(jīng)革蘭氏染色，油鏡觀察均可見(jiàn)革蘭氏陰性桿菌，大小不等但較為一致，無(wú)芽孢和莢膜。分離的細(xì)菌接種于麥康凱平板中，沒(méi)有粉紅色菌落形成。

3.2生化鑒定將分離的細(xì)菌按照豬奇異變形桿菌的生化特性進(jìn)行生化試驗(yàn)，應(yīng)與該菌的生化特性相符合。

3.3動(dòng)物致病性試驗(yàn)取已培養(yǎng)24 h的肉湯培養(yǎng)物按照0.2 ml/只的劑量腹腔注射試驗(yàn)組小白鼠4 只；對(duì)照組4只小白鼠則腹腔注射生理鹽水0.2 ml/只。試驗(yàn)組小白鼠在接種肉湯培養(yǎng)物后24～48 h期間相繼出現(xiàn)腹瀉癥狀，并陸續(xù)全部死亡。對(duì)照組小白鼠沒(méi)有異常表現(xiàn)。取死亡小白鼠的肝臟接種于鮮血瓊脂平板中，于37 ℃下培養(yǎng)24 h后可見(jiàn)鮮血瓊脂平板上生長(zhǎng)有遷徙性擴(kuò)散的灰色平鋪菌落。取該灰色平鋪菌落進(jìn)行革蘭氏染色并鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏陰性、大小不等的桿菌。對(duì)照組的小白鼠的肝臟接種于鮮血瓊脂平板中，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h后沒(méi)有觀察到任何菌落。

3.4奇異變形桿菌的分子生物學(xué)檢測(cè)林紅樂(lè)等[9]針對(duì)編碼奇異變形桿菌脲酶調(diào)節(jié)子的基因序列設(shè)計(jì)2條PCR引物，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為225 bp，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCR檢測(cè)PM的結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致，PCR方法較傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更加快捷，在4 h內(nèi)即可完成擴(kuò)增反應(yīng)，PCR方法敏感度可達(dá)30 cfu/ml。蘇良等[10]也針對(duì)奇異變形桿菌脲酶調(diào)節(jié)子編碼基因特異性序列的6個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)4條LAMP引物，建立一種檢測(cè)奇異變形桿菌快速且特異的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢測(cè)方法，該方法檢測(cè)奇異變形桿菌的特異性與普通PCR相同，但其敏感性比普通PCR 高10倍，且檢測(cè)速度更快，在 60 min內(nèi)即可完成擴(kuò)增反應(yīng)。

4豬奇異變形桿菌病的防治措施

雖然該病已經(jīng)成為危害養(yǎng)豬業(yè)較為嚴(yán)重的一種新的細(xì)菌性傳染病，但其重要性還未引起養(yǎng)豬行業(yè)的足夠重視，還未研制出有效的疫苗對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防，因此該病的防治只能從加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和進(jìn)行藥物治療2個(gè)方面進(jìn)行。

4.1飼養(yǎng)管理措施預(yù)防該病首先必須加強(qiáng)生物安全管理和改善飼養(yǎng)管理，對(duì)環(huán)境、飼料、飲水供應(yīng)等的管理應(yīng)嚴(yán)格加強(qiáng)，改善豬舍的衛(wèi)生條件，特別注意通風(fēng)、保持干燥、防寒及降低飼養(yǎng)密度。在各階段都盡量實(shí)行全進(jìn)全出，以便豬舍在全部豬出欄后徹底消毒7 d以上。

4.2藥物治療豬變形桿菌容易對(duì)臨床常用的抗生素產(chǎn)生耐藥性。夏修三等[11]對(duì)從人體內(nèi)分離的28株奇異變形桿菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明奇異變形桿菌對(duì)一代頭孢菌素頭孢唑啉耐藥率為100%，對(duì)二代頭孢呋辛的耐藥率為51.9%，對(duì)氨芐西林的耐藥率為73.7%，對(duì)諾氟沙星的耐藥率為50%。因此在確診該病病原以后應(yīng)根據(jù)細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用敏感的抗菌藥物進(jìn)行預(yù)防和治療。對(duì)有嚴(yán)重脫水的仔豬則另外加服補(bǔ)液鹽水和電解多維溶液。為了預(yù)防該病的再次發(fā)生，養(yǎng)殖場(chǎng)也可在飼料中添加適量的敏感抗菌藥物進(jìn)行預(yù)防。

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