分光光度法測(cè)定植酸含量

郝紅英　周芳　周彩榮　葉文見

摘要 [目的] 為了尋找適合于標(biāo)準(zhǔn)植酸的測(cè)定及微量測(cè)定的方法。[方法] 采用可見分光光度法， 測(cè)定植酸的含量。[結(jié)果] 在標(biāo)準(zhǔn)曲線下，植酸濃度在0～32 μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，方程為：Y=-2.284 2X+0.384 1（R=0.997 3），平均回收率為97.35%，RSD為4.82%（n=4）。[結(jié)論]該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可作為植酸的定量分析方法。

關(guān)鍵詞 植酸；含量；可見分光光度法

中圖分類號(hào)S121文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）07-01907-01

植酸是一種重要的有機(jī)磷系添加劑，具有獨(dú)特的生理功能和化學(xué)性質(zhì)，在食品、醫(yī)藥、金屬防腐、日化工業(yè)及塑料加工等方面具有廣泛的應(yīng)用[1]。植酸的測(cè)定方法主要有硝酸釷滴定法、測(cè)磷分光光度法、高壓液相色譜法、測(cè)鐵分光光度法[2-5]。其中，硝酸釷滴定法操作簡(jiǎn)單快速，但結(jié)果偏高；測(cè)磷分光光度法測(cè)定準(zhǔn)確度高， 精密度好，但硝化較麻煩；高壓液相色譜法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，但儀器昂貴；測(cè)鐵分光光度法采用植酸為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定準(zhǔn)確度與測(cè)磷法相近， 但它無需硝化，操作簡(jiǎn)便，適合于有標(biāo)準(zhǔn)植酸的測(cè)定及微量測(cè)定。該研究采用三氯化鐵比色法測(cè)定植酸含量。

1材料與方法

以磺基水楊酸為顯色劑，在505 nm波長(zhǎng)下，pH為2～3左右的酸性介質(zhì)中，磺基水楊酸與Fe3+形成紫紅色絡(luò)合物，可滿足鐵含量測(cè)定的要求。在酸性介質(zhì)中植酸能與三價(jià)鐵鹽專一定量沉淀，沉淀形式為[（C6H6）（OH）H3（PO4）5]3Fe7，而不受其他酸溶性磷的影響。濾去沉淀物，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定剩下鐵的濃度，即可測(cè)得與菲丁結(jié)合的鐵濃度[6-7]。

取植酸提取液2 ml，加入濃度15%TCA 2 ml，在10 ml硬質(zhì)玻璃試管中混勻，于4 ℃冰箱中靜置2 h后，4 000 r/min離心30 min；吸取上清2 ml，用0.75 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH為6.0～6.5，加蒸餾水至30 ml，混勻。取3 ml稀釋液，加1 ml濃度0.3%磺基水楊酸、濃度0.03%FeCl3·6H2O試劑，混勻后于505 nm處比色。

植酸含量=100×0.384 1-吸光度12.284 2

2結(jié)果與分析

2.1入射光波長(zhǎng)的選擇入射光的波長(zhǎng)應(yīng)根據(jù)吸收光譜曲線，以選擇溶液具有最大吸收時(shí)的波長(zhǎng)為宜。取7號(hào)液，以1號(hào)空白液為參比溶液，掃描出最大吸收波長(zhǎng)為505 nm。

2.2顯色時(shí)間的選擇準(zhǔn)確吸取一定量的試樣，每次只改變一個(gè)時(shí)間因素，測(cè)定吸光度（A），選出適宜的顯色時(shí)間。由圖1可知，顯色時(shí)間以15～20 min為宜。

圖1吸光度與顯色時(shí)間的關(guān)系2.3酸度的影響酸度對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大的影響。隨著pH的變化，磺基水楊酸與Fe3+的顯色反應(yīng)呈現(xiàn)不同的顏色。在pH為2～3時(shí)，生成紫紅色絡(luò)合物；在pH為4～7時(shí)，生成棕橙色絡(luò)合物；在pH為8～10時(shí)，生成黃色絡(luò)合物。所以，在顯色反應(yīng)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制pH。該試驗(yàn)選用的pH為2～3。

2.4 工作曲線分別取0.1 g/L 植酸標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4 ml于10 ml 玻璃試管中，分別加蒸餾水3.0、2.8、2.6、2.4、2.2、2.0、1.6 ml，分別加1 ml濃度0.03%FeCl3·6H2O、濃度0.3%磺基水楊酸試劑，搖勻，待測(cè)。 在505 nm處，以1號(hào)為參比溶液，測(cè)定所配制的2～9號(hào)溶液的吸光度，并作出工作曲線（圖2）。按照確定的試驗(yàn)條件，加入標(biāo)準(zhǔn)植酸，測(cè)定回收率。由表1可知，4個(gè)樣品的添加量的回收率范圍為93.3%～104.0%，總平均為97.35%，表明采用三氯化鐵比色法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)植酸的含量時(shí)回收率較好，結(jié)果穩(wěn)定。