胰腺癌診斷中蛋白芯片檢測(cè)法與化學(xué)發(fā)光法的對(duì)比研究

李慶鑫 付茂利 雷云靜

【摘 要】目的：探討多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)對(duì)胰腺癌診斷的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：應(yīng)用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片與化學(xué)發(fā)光技術(shù)，對(duì)40例健康體檢者和36例胰腺癌病人進(jìn)行多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)兩種方法在對(duì)健康體檢組陽性率和特異性經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析沒有顯著性差異（P>0.05）；對(duì)已患胰腺癌的36例患者CA199差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， CA242、CA125、CEA 3項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)在對(duì)提高胰腺癌診斷的陽性率和特異性方面具有一定的相關(guān)性，但多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片在健康體檢中的應(yīng)用價(jià)值優(yōu)于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，而對(duì)確診的胰腺癌患者，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)優(yōu)于多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】多腫瘤標(biāo)志物；蛋白芯片；化學(xué)發(fā)光；胰腺癌；C-12

【中圖分類號(hào)】R730.43 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）04-2108-02

胰腺腫瘤是威脅人類健康的主要因素之一，也是世界上死亡最高的疾病之一。因此，對(duì)于胰腺腫瘤的早期診斷、早期治療尤為重要。但是，從前的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)無論是化學(xué)發(fā)光還是酶聯(lián)免疫分析均較為單一，其漏檢率較高，陽性率較低，耽誤或（和）加重了病情。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片[1]在腫瘤的早期診斷、治療、預(yù)后隨訪中已廣應(yīng)用。我們中心使用芯片法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)臨床上與胰腺腫瘤高度相關(guān)的CA199、CA242、CA125、CEA 4種標(biāo)志物[2]，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

觀察組為我院住院的胰腺癌患者36例，其中男22例，女14例，平均年齡63.5±15.2歲。所有患者均經(jīng)影像學(xué)檢查或病理證實(shí)。健康對(duì)照組為本院健康體檢合格人群40例，男26例，女14例，平均年齡35.4±11.5歲。檢測(cè)對(duì)象為血清。

1.2方法

采以上被檢者靜脈血2-4ml，不加抗凝劑，靜置30分鐘，3000r/min 離心5min，吸出血清置-20℃待測(cè)。HD-2001A系列生物芯片檢測(cè)儀，由上海數(shù)康生物科技有限公司研制生產(chǎn)。蛋白芯片檢測(cè)試劑盒，由上海數(shù)康生物科技有限公司研制生產(chǎn)，批號(hào)S20110702，檢測(cè)CA199，NSE，CEA，CA242， Ferritin，Bata-HCG， AFP，F(xiàn)ree-PSA， PSA，CA125， HGH， CA153等12項(xiàng)指標(biāo)水平。化學(xué)發(fā)光儀為ADVIA centaur XP，試劑為隨機(jī)原裝試劑。

1.3 測(cè)定原理

多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是基于雙抗體夾心法的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，在固相基質(zhì)上包被12種腫瘤標(biāo)志物的抗體，捕捉被檢者血清中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物，結(jié)合第二抗體（標(biāo)有示蹤標(biāo)記物），然后催化化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，用專門的芯片閱讀儀讀取光信號(hào)，對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)，嚴(yán)格按照多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片診斷系統(tǒng)操作規(guī)則完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料采用 ±s表示，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS18.0軟件，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

蛋白芯片試劑盒提供的12種腫瘤標(biāo)志物的正常參考范圍是CA199<35.0U/ml，NSE<13.0ng/ml，CEA<5.0ng/ml，CA242<20.0U/ml， Ferritin<322ng/ml（男），F(xiàn)erritin<219ng/ml（女），Bata-HCG<3.0ng/ml， AFP<20.0ng/ml，F(xiàn)ree-PSA<1.0

ng/ml， PSA<5.0ng/ml，CA125<35.0U/ml， HGH<7.50ng/ml， CA153<35.0 U/ml。西門子化學(xué)發(fā)光儀ADVIA centaur XP試劑提供的參考值為：CEA<5.0ng/ml，CA242<20.0U/ml，CA199<37.0U/ml，CA125<35.0U/ml。大于以上各值判為陽性，2種方法測(cè)定胰腺癌相關(guān)的4項(xiàng)指標(biāo)的符合率均大于80%，總符合率為88.4%。正常對(duì)照組2種方法P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組除CA199差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其他3項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

胰腺癌起病隱匿、病情進(jìn)展快、惡性程度高，其5年生存率不到1%，藥物治療僅能維持生命約5～6個(gè)月[3]。目前胰腺癌檢測(cè)主要依靠影像學(xué)、病理學(xué)和血清生化檢測(cè)。其中影像學(xué)方法可知腫瘤的大致部位，但只可用于檢測(cè)直徑較大的腫瘤。病理學(xué)檢測(cè)通過腫瘤的組織，細(xì)胞對(duì)腫瘤進(jìn)行確診，但對(duì)人有創(chuàng)傷。而且這兩種方法檢測(cè)的范圍多為中晚期病人，不利于胰腺癌患者的早期診斷和治療。腫瘤標(biāo)志物亦非腫瘤特有的物質(zhì)，而正常組織和細(xì)胞以及機(jī)體在炎癥狀態(tài)下都可表達(dá)，只不過是表達(dá)的量有所不同，這主要取決于腫瘤細(xì)胞的生物特性的復(fù)雜性及多態(tài)性。因此大多數(shù)學(xué)者均主張采用聯(lián)檢的方法[4-5]，聯(lián)檢可彌補(bǔ)單項(xiàng)檢測(cè)的不足，有助于提高胰腺癌的檢出率。上海數(shù)康生物科技有限公司研發(fā)并生產(chǎn)的多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片診斷系統(tǒng)（簡(jiǎn)稱C-12）是利用生物芯片技術(shù)的并行檢測(cè)能力，在固相基礎(chǔ)上預(yù)置12種腫瘤標(biāo)志物對(duì)應(yīng)的單克隆抗體，用于俘獲被測(cè)血清中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物，與免疫復(fù)合物進(jìn)行酶促光化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，測(cè)光系統(tǒng)根據(jù)光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行線性定量分析，一次檢測(cè)可以獲得12項(xiàng)指標(biāo)的含量。該方法避免了衛(wèi)生資源的浪費(fèi)，減輕了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。從本文表1結(jié)果可見，多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片的應(yīng)用與化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)在健康體檢組比較，兩種方法其結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析沒有顯性差異（P>0.05），但化學(xué)發(fā)光的儀器和試劑比蛋白芯片試劑盒成本高很多。血清用量C-12型蛋白芯片法僅為0.3ml，而化學(xué)發(fā)光法最少需要1.5ml血清。檢測(cè)時(shí)間蛋白芯片法遠(yuǎn)少于化學(xué)發(fā)光法。對(duì)于臨床已經(jīng)確認(rèn)的36例胰腺癌病人，對(duì)l2種腫瘤標(biāo)志物用蛋白芯片和化學(xué)發(fā)光同時(shí)用兩種方法進(jìn)行聯(lián)檢結(jié)果表明，蛋白芯片檢測(cè)絕大多數(shù)結(jié)果與化學(xué)發(fā)光較為一致，除CA199差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， CA242、CA125、CEA 3項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。其靈敏度化學(xué)發(fā)光優(yōu)于蛋白芯片。

綜上所述，多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)作為一種腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)檢技術(shù)，具有省時(shí)省力、快速敏感等特點(diǎn)。對(duì)健康體檢者尤為實(shí)用，對(duì)腫瘤患者在治療、預(yù)后判斷有一定的參考價(jià)值。當(dāng)腫瘤確診后，建議用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)，有利于病情的監(jiān)測(cè)和判斷預(yù)后。

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