HPLC法測定參芪生血顆粒中黃芪甲苷的含量

徐曉艷 賈光偉

【摘 要】目的：建立高效液相色譜法測定生血顆粒中黃芪甲苷含量的方法。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（75：25）為流動相；對參芪生血顆粒中的黃芪甲苷進(jìn)行測定。結(jié)果：過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和三批樣品的含量測定，建立了制劑中黃芪甲苷的高效液相色譜含測方法。其回歸方程為Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998；加樣回收率為99.42%，RSD=1.59%。根據(jù)3批樣品的含量測試結(jié)果，規(guī)定含量限度為不少于7.4mg/袋。結(jié)論：建立的含量測定方法是控制本品內(nèi)在質(zhì)量的較理想方法。

【關(guān)鍵詞】參芪生血顆粒；黃芪甲苷；含量測定

【中圖分類號】R743.34 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）04-1965-01

Determination of Astragaloside in Ginseng and astragalus shengxue particles by HPLC

XU Xiao-yan JIA Guang-wei

（Liaocheng People's Hospital of Shandong Province， Shandong Liaocheng 252000， China）

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of astragaloside in shengxue particles by HPLC.Methods：the content determination used HPLC，chromatographic conditions were carried out as following：column was packed with the octadecyl silane chemically bonded silica，flowing phase was composed with methanol-water （75：25）. Results：The HPLC method for determination of Astragaloside in this preparation was established through methodology of systematic investigation and determination of three batch sample.The regression equation was Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998； recovery was 99.42%， RSD=1.59%. According to the content of the test results of three batches of samples requiring content limit is not less than 7.4mg / bags. Conclusion：The quality standard research method was the ideal way to control the quality of the products.

【Key words】Ginseng and astragalus shengxue particles；Preparation； Quality standard research

參芪生血顆粒是在我院自制制劑生血湯的基礎(chǔ)上改造而成。方中含有當(dāng)歸、地黃、人參、黃芪、川芎、仙茅、淫羊藿、茯苓等。臨床上用于治療血虛等癥，目前主要用于治療再生障礙性貧血。為控制本品的內(nèi)在質(zhì)量，制定可控性強(qiáng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用HPLC法對本制劑中黃芪甲苷進(jìn)行了含量測定方法的研究，通過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和三批樣品的含量測定，建立了本制劑中黃芪甲苷的含測方法，并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器： Agilent 1100系列高效液相色譜儀、ELSD-Alltech蒸發(fā)光散射檢測器、TSP-AS3000自動進(jìn)樣器，色譜柱：CAPCELL PAK C18 5?；250×4.6mm（UG120）。

1.2 試劑：乙醇、正丁醇、甲醇（GR），黃芪甲苷對照品（批號： 0781-200311，中國藥品生物制品檢定所），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水（75：25）為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器，理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品（批號： 0781-200311，中國藥品生物制品檢定所）5.17mg，至5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取2ml至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含黃芪甲苷0.2068mg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取各水提工藝項下所得提取液體積的1/25（相當(dāng)于黃芪2g），蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨洗液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取黃芪甲苷對照品2.06mg，加甲醇定溶至5ml，分別吸取2、4、6、8、10?l，分別注入高效液相色譜儀，測其峰面積積分值，以對照品相應(yīng)的峰面積的對數(shù)值為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得黃芪甲苷回歸方程為Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998（n=5），

黃芪甲苷含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)果表明進(jìn)樣量在2.024～10.12?g范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實驗 分別精密吸取對照品溶液4?l，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值的自然對數(shù)及其平均值，計算精密度，測定對照品的平均值 =6.563，RSD%為0.323%。

結(jié)果RSD小于2%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實驗 取供試品溶液，在12小時內(nèi)分別進(jìn)樣5次（0、2、4、8、12小時），測定峰面積積分值，結(jié)果峰面積積分值的自然對數(shù)及其平均值、RSD%見表3。

結(jié)果RSD小于2%，表明供試品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.6 重現(xiàn)性實驗 取同一批號樣品，按3.4.3項下供試品溶液制備方法，平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣20?l，按上述色譜條件操作，測定結(jié)果見表4。

結(jié)果RSD小于2%，表明此方法重現(xiàn)性好。

2.7 加樣回收率實驗 取批號為070502的樣品15g，平均分5份，分別加入對照品溶液（黃芪甲苷對照品7.00mg，加甲醇至10ml）1ml，按3.4.5方法測定，計算出回收率。結(jié)果見表5。

結(jié)果RSD小于2%，該方法回收率良好。

2.8 樣品測定 取三批樣品，分別平行制備2份供試品溶液，按上述方法分別測定黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表6。

根據(jù)三批樣品測定結(jié)果，并結(jié)合藥典中有關(guān)規(guī)定[1]，暫規(guī)定本品每袋含黃芪以黃芪甲苷，不得少于7.4mg。

2.9 空白實驗 取不含黃芪的空白樣品，照正文方法進(jìn)行試驗，結(jié)果：空白品在與對照品峰保留時間相同的位置，無干擾峰出現(xiàn)。

3 小結(jié)與討論

3.1 本文采用HPLC法對制劑中的活性成分黃芪甲苷進(jìn)行了含量測定，通過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和三批樣品的含量測定，建立了制劑中黃芪甲苷的高效液相色譜含測方法。

3.2 本方法具有靈敏度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是控制本品內(nèi)在質(zhì)量較好的含量測定方法。

3.3 在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，根據(jù)三批樣品測定結(jié)果，并結(jié)合藥典中有關(guān)規(guī)定[1]，并規(guī)定黃芪甲苷含量限度為不少于7.4mg/袋。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）[S].北京中國醫(yī)藥科技出版社， 2010