HPLC—ELSD法測正心泰膠囊中黃芪甲苷的含量

鄭凱 鄭琰

【摘 要】目的：建立HPLC-ESLD法測定正心泰膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法：采用Aglient C18 色譜柱；漂移管溫度：50℃；載氣壓力：30 PSI 流動相：乙腈-水（32：68）；流速：1.0mL/min，柱溫：20℃。結(jié)果：黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.4169-8.036ug范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)線性關(guān)系良好（r=0.9994）；平均回收率（n=6）為101.3%，RSD為1.7% 。結(jié)論：本法簡捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為評價正心泰膠囊中黃芪甲苷的質(zhì)控方法。

【關(guān)鍵詞】蒸發(fā)光散射檢測器； 高效液相色譜；黃芪甲苷；正心泰膠囊

【中圖分類號】R286 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）04-1957-02

Conten Determination of Astragaloside IV IN Zhengxintai Capsule by HPLC-ESLD

ZhengKai

（ChaoYang Institute for Food and Drug Control，ChaoYang 122000）

【ABSTRACT】Objective：To establish a method for determination of Astragaloside IV in Zhengxintai CapsuLe by HPLC-ESLD. Methods：A column of Aglient C18 was adopted； drgt temperature：50℃；carrier gas pressrue：30psi； the moile phase was mixture of acetonitrile-water（32：68）at a flow rate of 1.0mL·min-1；column temperture：20℃.Results：The linear range of Astragaloside IV was0.4169-8.036ug（r=0.9994）.The average recovery（n=6）was 101.3%，and RSD was 1.7%. Conclusion：the method is simple，accurate，and can be used for the quantitative analysis of Astragaloside IV in Zhengxintai Capsule.

【KEY WORDS】ELSD；HPLC；Astragalosid IV； Zhengxintai CapsuLe

正心泰膠囊收在于《中國藥典》2010年版一部，由黃芪、葛根、丹參、槲寄生、山楂、川穹等六味中藥材組成的復(fù)方制劑。具有補(bǔ)氣活血，化瘀通絡(luò)，用于氣虛血瘀所致的胸痹，癥見胸痛、胸悶、心悸、氣短、乏力；冠心病心絞痛見上述癥候者。藥典規(guī)定含量測定以葛根素為指標(biāo)成分，有關(guān)黃芪甲苷含量未作規(guī)定，本研究為正心泰膠囊中黃芪甲苷含量的測定建立一種簡單、快速的檢驗方法。

1 儀器與試藥

Waters E2695型高效液相色譜儀 Waters 2424 ESLD蒸發(fā)光檢測器；賽多利斯CPA225D電子分析天平（十萬分之一）

黃芪甲苷對照品（批號：110781-200612中國藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純，美國天地公司），水為超純水，其他試劑均為分析純，正心泰膠囊，見表2

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent C18 （4.6mm×250mm，5um）；蒸發(fā)光散射檢測器；漂移管溫度50℃；載氣壓力：30 psi；流動相：乙腈-水（32：68）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：20℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成含0.2mg/ml和0.1mg/ml的溶液。

2.2.2 供試品溶液

取供試品內(nèi)容物，研細(xì)，取約4.0g，精密稱定置具塞錐形瓶中，精加甲醇100mL，稱重，超聲30min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取50mL，置水浴上蒸干。殘渣加水50mL使溶解。用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次50mL，合并正丁醇提取液，用100mL氨試液洗滌1次，再用正丁醇飽和的水100mL洗滌一次，取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移5mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.3干擾實驗

為進(jìn)一步考察試驗的合理性，按照處方量制得不含黃芪的陰性對照溶液，依法測定，結(jié)果陰性對照溶液在對照品相應(yīng)的保留時間處無色譜峰，表明陰性對照無干擾，專屬性好，見圖一。

A

A、對照品

B C

B、樣品 C、陰性對照

圖1：正心泰膠囊HPLC色譜圖

2.4精密度試驗

精密吸取供試品溶液20uL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD=1.3%（n=6），表明精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗

對同一批號（批號：130308）樣品，依法平行提取6份，測定，結(jié)果黃芪甲苷含量平均值為45ug·粒-1，RSD=1.5%（n=6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液20uL，分別于配制后0、2、4、8、16、24h注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD=1.7%（n=6）。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 線性關(guān)系考察

分別精密吸取黃芪甲苷對照品溶液（0.4107mg·mL-1）1、2、5、10、15、20uL，注入液相色譜儀，用外標(biāo)兩點對數(shù)方程計算。以對照品進(jìn)樣量（ug）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：logY=1.3021logX+6.0803 r=0.9995 結(jié)果表明，黃芪甲苷在0.4107-8.024ug范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)線性關(guān)系良好。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，每份2g，精密量取50mL對照品溶液（0.008214mg·mL-1），加入樣品中，再精密量取甲醇50mL加入樣品中，依法提取，測定。計算回收率（n=6）。結(jié)果平均回收率為101.3%，RSD=1.3%，見表1.表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度高。

2.9 含量測定

分別精密吸取對照品溶液2、5uL與供試品溶液20uL，注入液相色譜儀，平行測定2次，用外標(biāo)兩點對數(shù)方程計算，結(jié)果見表2

3 討論

3.1 提取方法考察

本研究對樣品的提取方法進(jìn)行了考察，分別采用沸水浴上加熱回流1h，超聲處理1h，超聲處理30min。結(jié)果顯示，3種提取方法結(jié)果相差不大（RSD=0.1%），故選擇超聲處理30min。

3.2 測定目的

黃芪甲苷結(jié)構(gòu)為三萜皂苷，為黃芪中十多種皂苷的主要成分，也是黃芪制劑質(zhì)量檢驗的指標(biāo)成分，通過建立黃芩甲苷測定方法，可以更加有效的控制本產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 張蓮珠 HPLC測定黃芪甲苷概況【J】.中成藥.2005，27（5）：587-587.

[2] 劉瑋錦 蔡大可 劉亮鋒 賴平 HPLC測定當(dāng)歸補(bǔ)血片中黃芪甲苷的含量【J】.藥物分析雜志.2009.29.第9期.（1553-1555）.

[3] 中國藥典【S】.一部，2010：283-284.

[4] 雷健 胡雪蓮 金一南 路勇 邢茂 張恩娟 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定益生膠囊中黃芪甲苷含量【J】.中國藥業(yè).201年第21卷第16期.（47-48）.

[5] 史志輝 史萌 吳錦妮 宋忠興 唐志書 HPLC-ELSD法測定扶正散結(jié)膠囊中黃芪甲苷的含量【J】.現(xiàn)代中醫(yī)藥.2013年第2期.（86-88）.

[6] 曹紅 邢俊波 趙晶HPLC-ELSD測定腎炎清片中黃芪甲苷的含量【J】.中國醫(yī)藥指南.2013年第1卷第16期.（426-427）.