高效液相色譜法測定宮炎康顆粒中芍藥苷含量

楊 玲，楊 浩

（陜西省腫瘤醫(yī)院，陜西 西安 710061）

宮炎康顆粒是由當(dāng)歸、赤芍、川芎、北敗醬、香附、柴胡、澤蘭、紅花等12味藥材經(jīng)加工制成的顆粒劑，具有活血化瘀、解毒消腫之功效，臨床上主要用于慢性盆腔炎[1]。目前該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有鑒別項(xiàng)，未建立有效成分的含量測定，其主要有效成分是芍藥苷，經(jīng)參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2－8]，筆者采用高效液相色譜法對芍藥苷的含量進(jìn)行測定，該法操作簡便、分離良好、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀；Sartorius BS224S型電子天平；KQ3200DE型數(shù)控型超聲波清洗器。芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110736－200833）；宮炎康顆粒（市售品，批號(hào)為 20120506，20121130，20110921，規(guī)格為 8.30 mg /袋）；乙腈、甲醇均為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent TC C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；檢測波長:230nm；流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸溶液（15∶85）:流速:0.8mL/min；進(jìn)樣量:10 μL；柱溫:30℃。在此色譜條件下，參照 2010年版《中國藥典（一部）》赤芍含量測定項(xiàng)下將理論板數(shù)，按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000[9]。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品[7]0.005 2 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每1 mL溶液中約含芍藥苷30 μg）。取裝量差異項(xiàng)下本品，研細(xì)，精密稱定0.5 g，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率150 W，頻率40 kHz）20 min，取出放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，以0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方另取除赤芍藥材外的其他藥味，照供試品溶液處理方法制備成不含赤芍的陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):分別取2.2項(xiàng)下3種溶液，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜主峰相同位置上有保留時(shí)間一致的峰出現(xiàn)，而陰性對照品溶液色譜在相應(yīng)位置沒有峰出現(xiàn)，(見圖1)，表明該法專屬性強(qiáng)。

線性關(guān)系考察:精密稱取芍藥苷對照品，加甲醇配制成質(zhì)量濃度依次為 7.6，15.2，30.4，60.8，121.6 μg /mL 的溶液，各吸取10μL，依次進(jìn)樣，記錄色譜圖，以對照品溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝1.4×106X－6 070，r＝0.999 6(n＝5)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在 0.08～1.21 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對照溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.8%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取新制備的供試品溶液（批號(hào)為20120506），分別在 0，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果進(jìn)樣量為 10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.9%(n＝5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):分別精密稱取樣品（批號(hào)為20120506）5份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD為0.4%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):分別取已知芍藥苷含量（批號(hào)為20120506）的供試品內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉適量（約為含量測定的1/2量）精密稱定，共5份，分別置具塞三角瓶中，精密加入相當(dāng)于含量1/2量的芍藥苷對照品溶液（0.152 g /L，1.5 mL），按含量測定方法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2.4 樣品含量測定

取對照品及3批樣品，依法制備對照品溶液及供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20120506，20121130，20110921的3批樣品中，芍藥苷平均含量為 8.29，7.87，8.00 mg/袋。

3 討論

赤芍為宮炎康顆粒方中的主要藥味，本試驗(yàn)制訂的赤芍含量測定方法簡單、重復(fù)性好、精密度高。

取芍藥苷對照品溶液，在200～400 nm波長處掃描，結(jié)果芍藥苷在230，266，349 nm波長處處均有最大吸收，為與藥典規(guī)定一致。故確定以230 nm為測定波長。

比較了多種流動(dòng)相，流動(dòng)相A為甲醇－0.05 mol/L磷酸二氫鉀（33 ∶67），流動(dòng)相 B 為乙腈 －0.1% 磷酸溶液（15 ∶85），流動(dòng)相C為乙腈－0.1%磷酸溶液（10∶90），最終選擇了流動(dòng)相B，其分離好，柱溫低，理論板數(shù)高，供試品主峰與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，保留時(shí)間適中。

本試驗(yàn)中還比較了樣品超聲處理時(shí)間，分別取10，20，30 min，結(jié)果超聲20 min與超聲30 min芍藥苷的含量無明顯差異，即超聲20 min可提取完全，故超聲處理時(shí)間定為20 min。

參考文獻(xiàn):

[1]WS3－B－3921－98，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二十冊）[S].

[2]韓 平，胡 敏，曹 陽，等.高效液相色譜法測定芍黃通便湯中芍藥苷含量[J].中國藥業(yè)，2011，20（24）:51 －52.

[3]王 芳，胡雪蓮，陳 琳，等.高效液相色譜法測定胃靈膠囊中芍藥苷含量[J].中國藥業(yè)，2011，20（1）:17 －18.

[4]程新萍，孫文基，李新生.赤芍藥材中芍藥甙的含量考察[J].西北藥學(xué)雜志，1998，13（1）:41.

[5]謝曉梅，余長柱，徐衡，等.赤芍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究——芍藥苷的含量測定[J].中國中藥雜志，2004，29（8）:759 －761.

[6]周海玲，許舜軍，楊 柳.HPLC法測定赤芍中芍藥苷的含量[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2011，18（4）:487 － 488.

[7]周紅濤，駱亦奇，胡世林，等.赤芍與白芍的化學(xué)成分含量比較研究[J].中國藥學(xué)雜志，2003，38（9）:654 －657.

[8]林 海，胡 黎.不同產(chǎn)地赤芍中芍藥苷的含量測定[J].中國醫(yī)藥指南，2009，7（16）:91 －92.

[9]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:147 －148.