雷公藤配伍甘草治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎減毒增效作用研究

馬 哲，張 穎，梁茂新

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 杏林學(xué)院，遼寧 沈陽 110167；2.遼寧省食品藥品監(jiān)督管理局 技術(shù)審評中心，遼寧 沈陽 110003；3. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 方劑學(xué)科，遼寧 沈陽 110847)

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雷公藤配伍甘草治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎減毒增效作用研究

馬 哲1，張 穎2，梁茂新3*

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 杏林學(xué)院，遼寧 沈陽 110167；2.遼寧省食品藥品監(jiān)督管理局 技術(shù)審評中心，遼寧 沈陽 110003；3. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 方劑學(xué)科，遼寧 沈陽 110847)

目的：對雷公藤與甘草配伍前后的藥效和毒性進行比較研究，初步探討傳統(tǒng)中藥配伍減毒增效理論的科學(xué)內(nèi)涵。方法：以昆明種小鼠和Wistar大鼠為試驗動物，研究雷公藤配伍甘草前后ig給藥對受試動物的鎮(zhèn)痛、抗炎作用及毒性的影響。采用熱板法和醋酸致小鼠扭體反應(yīng)進行鎮(zhèn)痛實驗；采用角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)進行抗炎藥效學(xué)實驗。結(jié)果：雷公藤與甘草配伍前后均能明顯延遲小鼠舔后足時間，并能減少醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，抑制率均在24%以上；對角叉菜膠引起的足跖腫脹，1～4h的抑制率在21%以上；對DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)有明顯的抑制作用，抑制率為47.9%，且與甘草配伍后雷公藤的藥理作用有顯著提高。結(jié)論：甘草可以明顯增強雷公藤的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，提示中藥的配伍減毒增效作用可通過降低毒性藥物用量，并配伍增效藥物而實現(xiàn)。

雷公藤；甘草；配伍；減毒增效

配伍減毒增效是中醫(yī)藥理論中的一大特色，“七情合和”[1]和“君臣佐使”[2]等制方理論奠定了中藥配伍減毒增效作用的理論基礎(chǔ)。隨著科學(xué)的進步，學(xué)者們對中醫(yī)藥配伍理論也進行了若干探討[3]，然而從本質(zhì)上來講，“減毒”“增效”是方劑學(xué)“君臣佐使”配伍理論內(nèi)涵的核心[4]。如何科學(xué)使用有毒藥物，實現(xiàn)減毒增效，成為臨床研究的永恒課題[5]。在研究復(fù)方雷公藤湯對腎病大鼠減毒增效作用實驗中發(fā)現(xiàn)[6-8]，該復(fù)方對雷公藤起到減毒增效的作用。為排除干擾，先易后難，擬從減毒配伍基本單元入手，選取甘草與雷公藤配伍考察其對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的減毒增效作用，為揭示中藥配伍減毒增效理論的物質(zhì)基礎(chǔ)和相互作用機制提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g；Wistar 大鼠，體重140～160g；以上動物由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(遼)2004-0016。

1.2 藥物與試劑

角叉菜膠(批號：20080317)，醋酸(批號：20090413)，2,4-二硝基氯苯(DNCB)(批號：20080313)，95%醫(yī)用酒精(批號：20090408)，以上試劑均購于國藥集團；生理鹽水，沈陽志鷹制藥廠生產(chǎn)，批號：100112603。雷公藤、甘草飲片購于東北大藥房，按雷公藤∶甘草(6∶1)的比例常規(guī)煎煮2次，去藥渣后合并藥液，濃縮成干膏，臨用時取蒸餾水制成混懸液。

2 方法

2.1 對實驗性炎癥的抑制作用

2.1.1 對角叉菜膠引起的足跖腫脹的抑制作用 取大鼠30只，體重140～160g，雌雄各半，隨機分成3組，即對照組(同容量生理鹽水)、雷公藤組(雷公藤2 000mg/kg)、雷公藤甘草配伍組(雷公藤2 000mg/kg，甘草650mg/kg)，每組10只。灌胃給藥，1次/天，連續(xù)7天，末次給藥30min后，分別在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1mL/只致炎，隨后分別于1、2、4、6h，采用玻璃容器法測量大鼠足跖致炎前及致炎后容積。并按下述公式分別計算腫脹率(%)和抑制率(%)：

腫脹率(%)=(致炎后足容積-致炎前足容積)/ 致炎前足容積×100%

抑制率(%)=(對照組平均腫脹率-給藥組平均腫脹率)/ 對照組平均腫脹率×100%

2.1.2 對DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響 取昆明種小鼠30只，體重18～22g，雌雄各半，分組情況同“2.1.1”項。給藥方法分別為對照組(同容量生理鹽水)、雷公藤組(雷公藤4 500mg/kg)、雷公藤配伍甘草組(雷公藤4 500mg/kg，甘草1 500mg/kg)。分別用濃度為5%的2,4-二硝基氯苯(DNCB)乙醇液涂于小鼠腹部皮膚致敏，致敏前1天各組動物ig給藥，1次/天，連續(xù)9天，致敏7天后用1% DNCB(溶于橄欖油中)分別涂于小鼠右耳，1天后處死小鼠，7mm打孔器取兩側(cè)耳片稱量兩耳重量，以小鼠兩耳重之差為遲發(fā)性超敏反應(yīng)值，比較各組反應(yīng)值。

2.2 鎮(zhèn)痛作用

2.2.1 熱板法 取小鼠50只，18～22g，雌性。實驗前篩選小鼠，調(diào)節(jié)恒溫水浴裝置，使熱板溫度為(55±0.5)℃，將反應(yīng)潛伏期低于5s及高于30s的動物剔除。選合格小鼠30只，分組及給藥同“2.1.2”項，采用ig給藥，給藥后30、45、60min分別測各鼠痛閾值，60s不舐后足者立即取出，其痛閾值按60s計算。

痛閾提高率(%)=(給藥后痛反應(yīng)時間-給藥前痛反應(yīng)時間)/給藥后痛反應(yīng)時間×100%

2.2.2 扭體法 取體重18～22g小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥同“2.1.2”項。采用ig給藥，1次/天，連續(xù)3天，末次給藥30min，ip0.6%醋酸溶液0.2mL，記錄15min內(nèi)小鼠扭體數(shù)。計算各組小鼠扭體次數(shù)均值，各給藥組與對照組進行比較。

抑制率=(空白組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/空白組扭體次數(shù)×100%

3 結(jié)果

3.1 對角叉菜膠引起的大鼠足腫脹的影響

由表1可見，雷公藤組、配伍組能抑制角叉菜膠引起的足跖腫脹，且在1～4h內(nèi)抑制作用比較明顯(P<0.01)，6h以后抑制作用下降。雷公藤與甘草配伍組與雷公藤組2h時差異較顯著(P<0.05)，其余時間差異不顯著。

表1 雷公藤甘草配伍對角叉菜膠引起的大鼠足腫脹的影響

注：與對照組比較*P<0.05，**P<0.01；配伍組與雷公藤組比較，△P<0.05，△△P<0.01；( )內(nèi)為抑制率，下表同。

3.2 對DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響

實驗結(jié)果表明，雷公藤組、配伍組均可顯著抑制DNCB誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹，與對照組相比，P<0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，而配伍組與雷公藤組組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果見表2。

3.3 對小鼠熱板法實驗的影響

各組對小鼠熱板法實驗的影響如表3所示，雷公藤組與配伍組對熱刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)均有明顯的抑制作用(P<0.01)，且雷公藤與甘草配伍后較單用鎮(zhèn)痛作用顯著增強(P<0.01)。

表2 雷公藤甘草配對DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響

表3 雷公藤與甘草配伍對熱刺激引起小鼠疼痛反應(yīng)的影響

3.4 對醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響

由表4可以看出，雷公藤對醋酸引起的小鼠的扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，與對照組比較差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與甘草配伍后可以增強雷公藤的鎮(zhèn)痛作用，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 雷公藤與甘草配伍對醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響

4 討論

雷公藤與甘草配伍后，對抑制熱刺激和醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)均較單用雷公藤時有顯著提高；對角叉菜膠引起的大鼠足腫脹的抑制作用、DNCB引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的抑制作用有一定的提高，但差異不明顯，表明甘草對雷公藤具有一定的增效作用[9-10]。

中藥的功用各有所長，有毒藥物大多療效顯著，但可能存在安全隱患。通過合理配伍，調(diào)其偏性，制其毒性，增強或改變其原有功效，消除或緩解其對人體的不利因素，發(fā)揮相輔相成的綜合作用，發(fā)揮中醫(yī)藥理論中辨證施治的優(yōu)勢和特色。中藥配伍減毒增效的研究多集中在有毒成分的含量變化上[11-12]，若毒性成分與藥效成分不同則該方法尚可，一旦二者為同一成分，則在減毒的同時亦即是在降效。

由實驗結(jié)果可知，甘草可以增強雷公藤的抗炎、鎮(zhèn)痛活性，對毒性降低作用不明顯。甘草具有抗炎、鎮(zhèn)痛等類激素樣作用，且常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等免疫性疾病[13-15]。中成藥中的風(fēng)濕骨痛顆粒、風(fēng)濕定膠囊等治療關(guān)節(jié)炎的藥物也含有甘草，推測甘草對雷公藤的增效作用與其具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用有關(guān)。因此，甘草對雷公藤的減毒增效作用實際表現(xiàn)為：一方面在降低雷公藤用量的同時配伍甘草達到甚至超過單用雷公藤的療效；另一方面因雷公藤的用量較單用減少，而達到減毒的作用。推測該作用機制可能為甘草本身發(fā)揮抗炎活性，同時其含有的甘草酸類物質(zhì)與雷公藤中二萜類物質(zhì)[16]結(jié)合使毒性降低，或延緩其發(fā)揮活性。

中藥方劑減毒增效理論實際上分為減毒、增效、減毒合并增效三種情況。目前多數(shù)研究只對“減毒”進行了考察[17-18]，似乎還不能全面回答中藥配伍減毒增效理論的問題。本試驗對雷公藤配伍甘草治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的減毒增效作用進行了初步研究，但理論的充分闡釋還需進一步試驗分析。有毒藥物通過配伍另一種藥物降低毒性、提高總體療效的思想是中醫(yī)藥理論的特色及優(yōu)勢之一，應(yīng)當盡快闡明作用機理，并加以合理利用。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Toxicity Reducing and Efficacy Enhancing Research on Rheumatoid Arthritis Effect of Tripterygium Compatible with Licorice

Ma Zhe1,Zhang Ying2,Liang Maoxing3*

(1.Xinglin College of Liaoning Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110167, China;2.Liaoning Food and Drug Administration Technical Evaluation Center, Shenyang 110003, China;3.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110847, China)

Objective:Compare the pharmacokinetics and toxic between Tripterygium and Licorice, to investigate the traditional Chinese medicine theory on toxicity reducing and efficacy enhancing. Methods:The pharmacodynamic effects were observed in 2 analgesic tests and 2 inflammatory models in experimental animals，including: hot plate test in mice, writhing reaction induced by acetic acid in mice, paw swelling caused by carrageenan in rats and auricular edema induced by DNCB in mice. Results:Tripterygium could delay the latency of licking of the hind paw in hot plate test. And it could reduce the times of writhe response actions, and the inhibition rates were more than 24%. Tripterygium could significantly inhibit the paw swelling caused by carrageenan in rats, and the inhibition rates were more than 21% from 1 to 4 hour. And then it could significantly inhibit the Delayed hypersensitivity induced by DNCB, and the inhibition rates were 47.9%. Furthermore the effect above could be additional increased, when tripterygium compatibitied with Licorice. Conclusion:Licorice can significantly enhance anti-inflammatory, analgesic effect of tripterygium, but can not reduce the toxic of tripterygium. The phenomenon shows that the theory on toxicity reducing and efficacy enhancing in Chinese compatibity may achieve via reducing the content of toxic medicine and compatibitying another medicine at the same time.

Tripterygium; Licorice; Compatibility; Attenuated Efficiency

2013-12-28

馬哲(1981-)，男，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)院講師，研究方向為中藥藥理學(xué)。

梁茂新(1949-)，男，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)研究員，研究方向為中藥配伍減毒增效。

R285.5

A

1673-2197(2014)08-0009-03