地喹氯銨含片含量測(cè)定分析

劉佳琪

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

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地喹氯銨含片含量測(cè)定分析

劉佳琪

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

目的：采用HPLC法測(cè)定地喹氯銨含片中的地喹氯銨含量。方法：選用Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(pH3.8)(3∶7)，進(jìn)樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。結(jié)果：地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；精度實(shí)驗(yàn)中，地喹氯銨峰面積RSD為0.36%；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，地喹氯銨峰面積RSD為0.70%；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，地喹氯銨峰面積RSD為0.99%，均符合要求。結(jié)論：采用HPLC法測(cè)定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩(wěn)定性、重復(fù)性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

地喹氯銨；HPLC；含量測(cè)定

地喹氯銨為非抗生素藥物，其對(duì)革蘭氏陽性菌及陰性菌等均具有顯著的抑制作用，還可有效清除真菌及抗酸桿菌，且不會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生刺激作用，臨床常用于治療咽喉細(xì)菌感染等[1]。地喹氯銨又名克菌定，是雙季銨鹽表面活性劑的一種，其作用機(jī)理為其能與真菌和細(xì)菌細(xì)胞胞漿膜內(nèi)的磷酸根產(chǎn)生很強(qiáng)的結(jié)合作用，改變細(xì)胞膜的通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細(xì)胞內(nèi)代謝物滲出，改變菌體蛋白質(zhì)性質(zhì)，進(jìn)而殺死細(xì)菌[2]。目前，測(cè)定地喹氯銨含量的常用方法包括毛細(xì)管電泳法、共振光散射光譜法、高效液相色譜法及熒光分析法等。本研究在EP5.0(歐洲藥典)的基礎(chǔ)上，對(duì)色譜條件進(jìn)行了改進(jìn)，有效地將地喹氯銨峰從雜質(zhì)峰中分離出來，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津生產(chǎn)的高效液相色譜儀，型號(hào)為SPD-10Avp/LC-10ATvp；上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的紫外-可見光分光光度計(jì)，型號(hào)為756C；德國(guó)Sartorius天平，型號(hào)為BT25S；上海大普儀器有限公司生產(chǎn)的精密酸度計(jì)，型號(hào)為PHS-3C。

1.2 試藥

已烷磺酸鈉、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；抽取3種規(guī)格為0.25mg的地喹氯銨含片作為測(cè)定對(duì)象；對(duì)照品為日本明治果生產(chǎn)的含量為99.8%的地喹氯銨(DCWS-65-1)；空白對(duì)照為珠海生物化學(xué)制藥廠提供的空白輔料。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選擇Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(濃度為0.67%，配制方法：于300g純水中加入己烷磺酸鈉2g，完全溶解后，采用冰醋酸將其pH調(diào)至3.8)(3∶7)，進(jìn)樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。

2.2 對(duì)照品溶液制備

稱取適量對(duì)照品(稱取前需將地喹氯銨置于105℃下進(jìn)行干燥，待總重量無變化后方可稱取)，加入磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)，充分溶解后將其稀釋為10μg/mL地喹氯銨溶液，即得。

2.3 樣品溶液制備

取10片待測(cè)樣品，將其研磨成粉末，精密稱定0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)適量，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾后即得。

2.4 測(cè)定方法

精密吸取樣品溶液及對(duì)照溶液各20μL，注入液相色譜儀中，采用外標(biāo)法，根據(jù)樣品峰面積計(jì)算地喹氯銨含量。

2.5 專屬性考察

分別取地喹氯銨對(duì)照品溶液和空白輔料溶液各20μL，按照上述色譜條件注入液相色譜儀，測(cè)定結(jié)果表明空白輔料不會(huì)干擾樣品的色譜測(cè)定結(jié)果，如圖1所示。

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱取干燥后的地喹氯銨對(duì)照品9.94mg，采用流動(dòng)相將其稀釋至100mL(濃度99.400μg/mL)，放入容量瓶中備用。采用移液管分別吸取上述溶液1.5mL、1.25mL、1.0mL、0.75mL、0.5mL，置于10mL容量瓶?jī)?nèi)，加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別得到14.910μg/mL、12.425μg/mL、9.940μg/mL、7.455μg/mL、4.970μg/mL的地喹氯銨溶液，依次進(jìn)樣測(cè)定。以地喹氯銨濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積積分(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 地喹氯銨空白輔料(上)及地喹氯銨對(duì)照品(下)液相色譜

2.7 精密度試驗(yàn)

取濃度為9.940μg/mL對(duì)照品溶液6份，按照上述色譜條件依次進(jìn)樣，結(jié)果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.36%，說明該測(cè)定方法具有較高的精密度。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取濃度為9.940μg/mL的對(duì)照品適量，分別放置0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.70%，說明該對(duì)照品溶液在24h內(nèi)具有較高的穩(wěn)定性。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

分別配制6份同批次的地喹氯銨樣品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明地喹氯銨平均含量為標(biāo)示量的97.9%，峰面積RSD為0.99%，說明該測(cè)定方法具有良好的重復(fù)性。

2.10 樣品測(cè)定

取10片待測(cè)樣品，將其研磨成粉末，精密稱取0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)溶解，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾。精密吸取20μL樣品溶液進(jìn)樣測(cè)定，采用峰面積歸一化法計(jì)算地喹氯銨含量，結(jié)果表明地喹氯銨平均含量為標(biāo)示量的97.9%，符合要求。見圖2。

圖2 地喹氯銨含片液相色譜

3 討論

地喹氯銨是常用的陽離子表面活性劑之一，其產(chǎn)生的陽離子可改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細(xì)胞內(nèi)的代謝物滲出，改變菌體蛋白質(zhì)性質(zhì)，進(jìn)而殺死細(xì)菌。地喹氯銨對(duì)堿金屬離子具有較強(qiáng)的絡(luò)合能力，可建立堿金屬離子滲透通道，將離子順利輸送至膜內(nèi)，從而增加膜內(nèi)滲透壓，造成細(xì)胞膜破損，起到殺菌作用。

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇[3]

對(duì)稀釋后的地喹氯銨溶液進(jìn)行紫外掃描，波長(zhǎng)范圍為200～400nm，結(jié)果表明地喹氯銨在240nm波長(zhǎng)處吸光度最大，因此選擇240nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相選擇

采用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的含量測(cè)定方法，即流動(dòng)相為0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液-甲醇-乙腈-三乙胺(20∶60∶20∶0.5)進(jìn)行含量測(cè)定，不論是改變流動(dòng)相比例、pH值，還是更換色譜柱，地喹氯銨主峰仍不能與溶劑峰分開，因此筆者參照EP5.0的流動(dòng)相條件，并對(duì)流動(dòng)相比例和pH值進(jìn)行優(yōu)選[4]，得出最佳色譜條件為：0.67%己烷磺酸鈉溶液-甲醇(30∶70)。結(jié)果表明，采用優(yōu)化后的色譜條件，主峰與雜質(zhì)分離效果良好，峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適宜，適用于地喹氯銨含片含量測(cè)定。

3.3 耐用性考察

采用多種品牌、不同國(guó)家生產(chǎn)的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱測(cè)定同一樣品，測(cè)定結(jié)果間相差較小，說明該法具有較好的耐用性。

綜上所述，采用HPLC法測(cè)定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩(wěn)定性、重復(fù)性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

[1] 李超,黃永旺.復(fù)方地喹氯銨含片臨床應(yīng)用[J].天津藥學(xué),2002,14(4):54-55.

[2] 白若琬,李永春,朱建東,等.HPLC法測(cè)定洛度沙胺氨丁三醇滴眼液的含量[J].食品與藥品,2005,7(7):42-44.

[3] 張琳,薛榮奇,董金鳳. 地喹氯銨噴霧劑治療急性咽炎30例[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志,2006,35(10):1344-1345.

[4] 王敬風(fēng).奧美拉唑鈉腸溶片中奧美拉唑鈉含量測(cè)定方法的改進(jìn)[J]. 河北化工,2011,34(1):46-47.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-04-29

劉佳琪(1990-)，男，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)。

R927.2

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1673-2197(2014)16-0028-02