宮頸癌患者外周血及組織中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg失衡的研究

何芳　楊慧娟

[摘要] 目的 探討宮頸癌患者外周血及組織中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg失衡的意義。 方法 分別選取同期53例宮頸癌、25例CIN和25例子宮全切患者作為研究對象，采用流式細胞儀檢測外周血和宮頸組織中Th17細胞、Treg細胞表達。 結果 宮頸癌組、CIN組外周血中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg均顯著高于對照組（P < 0.05）。外周血Th17細胞表達與FIGO分期呈正相關（P < 0.05），Treg細胞表達與分化程度呈負相關（P < 0.05）。組織中Th17/Treg與FIGO分期呈負相關（P < 0.05）。 結論 宮頸癌患者外周血和組織中Th17細胞和Treg細胞表達均顯著升高，Th17/Treg失衡在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要促進作用。

[關鍵詞] 宮頸癌；Th17細胞；Treg細胞；Th17/Treg平衡

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2014）10-0015-03

宮頸癌是導致女性死亡最主要的惡性腫瘤之一，免疫系統(tǒng)功能異常在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起重要的作用。Th17細胞、Treg細胞均屬CD4+ T細胞亞群，介導細胞因子發(fā)揮不同的免疫效應，兩者存在動態(tài)平衡關系，Th17/Treg失衡參與多種炎癥、自身免疫性疾病及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，均與腫瘤的免疫逃逸密切相關[1，2]。本研究旨在探討Th17細胞、Treg細胞在宮頸癌進展中的作用，及Th17/Treg失衡對宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年2月～2013年4月我院收治的53例宮頸癌患者作為宮頸癌組研究對象，均經病理學檢查證實為宮頸癌并結合影像學檢查明確分期，其中鱗癌35例，腺癌18例，年齡39～69歲，平均（53.23±6.99）歲，F(xiàn)IGO臨床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期11例；另選取同期與宮頸癌組年齡匹配的CIN患者25例為CIN組研究對象，標本來源于宮頸錐切手術標本、病理活檢組織及外周血，均經病理學檢查證實，CIN1級7例，CIN2級10例，CIN3級8例；再選取同期與宮頸癌組年齡匹配行子宮全切并排除惡性病變及癌前病變患者25例為對照組研究對象，標本來源于子宮全切手術標本及外周血。

1.2 主要試劑及儀器

熒光抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE單克隆抗體及相應同型對照抗體，固定及破膜試劑盒、人Foxp3試劑盒、人IL-17試劑盒、人ROR-γt試劑盒、人T細胞檢測試劑盒（美國eBiosciences公司）。美國BD公司FACS Caliber流式細胞檢測儀。

1.3 實驗方法及觀察指標

外周血標本于術前或病理活檢前采集空腹外周靜脈血5 mL，常規(guī)分離外周血單個核細胞，采用流式細胞技術定量檢測抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE單克隆抗體分別標記的Th17細胞和Treg細胞。宮頸組織標本沖洗后取新鮮組織剪碎，經組織消化液消化形成組織細胞懸液，分離單個核細胞，采用流式細胞儀技術定量檢測Th17細胞和Treg細胞。每份樣本至少收集10 000個單個核細胞。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 18.0進行統(tǒng)計學處理，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用q檢驗及t檢驗，相關性采用Pearson或Spearman秩相關分析，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌組、CIN組和對照組外周血中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg比較

宮頸癌組、CIN組外周血中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg均顯著高于對照組（P < 0.05），宮頸癌組又顯著高于CIN組（P < 0.05）。見表1。

表1 宮頸癌組、CIN組和對照組外周血中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg比較（x±s，%）

注：qa為宮頸癌組與CIN組比較，*P < 0.05

2.2 宮頸癌組、CIN組和對照組組織中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg比較

宮頸癌組、CIN組組織中Th17細胞、Treg細胞表達均顯著高于對照組，Th17/Treg均顯著低于對照組（P < 0.05），宮頸癌組Th17細胞、Treg細胞高于CIN組（P < 0.05），Th17/Treg低于CIN組。見表2。

表2 宮頸癌組、CIN組和對照組組織中Th17細胞、Treg細胞表達

及Th17/Treg比較（x±s，%）

注：qa為宮頸癌組與CIN組比較，*P < 0.05

2.3 宮頸癌病理學特征與外周血中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg的關系

外周血Th17細胞表達與FIGO分期、淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P < 0.05）。外周血Th17細胞表達與FIGO分期呈正相關（r=0.54，P < 0.05）。外周血Treg細胞表達與分化程度有關（P < 0.05），并呈負相關（r=-0.49，P < 0.05）。外周血Th17/Treg與淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P < 0.05）。見表3。

表3 宮頸癌病理學特征與外周血Th17細胞、Treg細胞表達

及Th17/Treg的關系（x±s，%）

注：*P < 0.05

2.4 宮頸癌病理學特征與組織中Th17細胞、Treg細胞表達及Th17/Treg的關系

組織中Th17細胞表達與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P<0.05）。組織中Th17細胞表達與FIGO分期呈正相關（r=0.50，P < 0.05），與分化程度呈負相關（r=-0.48，P < 0.05）。組織中細胞表達與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P < 0.05）。組織中Treg細胞表達與FIGO分期呈正相關（r=0.57，P < 0.05），與分化程度呈負相關（r=-0.55，P < 0.05）。組織中Th17/Treg與FIGO分期、淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P < 0.05）。組織中Th17/Treg與FIGO分期呈負相關（r=-0.54，P < 0.05）。見表4。

表4 宮頸癌病理學特征與組織中Th17細胞、Treg細胞表達

及Th17/Treg的關系（x±s，%）

注：*P < 0.05

2.5 三組患者外周血及組織中Th17細胞、Treg細胞表達的相關性

外周血與組織中Th17細胞表達呈正相關（r=0.61，P < 0.05），外周血與組織中Treg細胞表達呈正相關（r=0.53，P < 0.05），組織中Th17細胞與Treg細胞表達呈負相關（r=-0.39，P < 0.05）。

3 討論

初始CD4+ T細胞經由不同細胞因子誘導分別形成以細胞免疫為主的Th1細胞，以體液免疫為主的Th2細胞，表現(xiàn)為免疫抑制作用的Treg細胞及在不同免疫環(huán)境中通過促炎、抗腫瘤細胞因子呈現(xiàn)不同免疫功能的Th17細胞[1，2]。Th1/Th2平衡是免疫系統(tǒng)功能調控中主要的相關機制，可反映機體內免疫應答方式的特征，腫瘤組織中平衡向Th2呈漸進式漂移，而Th17的分化和功能受到前兩者調控[5，6]。Treg分化主要受TGF-β誘導，而在TGF-β和IL-6同時作用下CD4+ T細胞則分化為Th17細胞，兩者之間也存在競爭相關平衡關系，在Th17和Treg細胞間存在相互調控影響的微妙關系[7-9]。

在腫瘤發(fā)展過程中Th17則參與其中，并且IL-17具有促血管生成作用，有利于腫瘤生長、浸潤、轉移的發(fā)生[5-8]。另有動物研究發(fā)現(xiàn)，Th17注入黑色素瘤模型小鼠體內則發(fā)揮了清除腫瘤細胞、抑制黑色素瘤生長的作用，敲除IL-17基因后腫瘤生長、轉移活性更旺盛[10，11]。本研究中CIN組和宮頸癌組的外周血和組織中Th17表達均顯著高于對照組。外周血Th17細胞表達與宮頸癌FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、脈管浸潤有關，隨臨床分期加重、分化程度降低而表達升高，侵襲性和轉移活性更強患者的外周血中表達更強。并且外周血中表達與腫瘤組織中表達呈正相關，在兩種標本中兩者均呈表達升高趨勢，與臨床病理學特征的相關性也相似。腫瘤組織中Th17細胞表達同樣與宮頸癌FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、脈管浸潤有關。提示Th17細胞在宮頸癌發(fā)生初期即CIN期已呈現(xiàn)明顯增加，表達隨著腫瘤惡性化增加而升高，在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中表現(xiàn)為促進腫瘤生長、侵襲、轉移的作用；外周血和組織中的表現(xiàn)相似性較高，可以反映腫瘤組織中的Th17細胞分化、增殖特征。

Treg細胞對T細胞主導的腫瘤細胞殺傷作用具有強烈的抑制效果，減少對腫瘤細胞的攻擊，誘導腫瘤細胞呈現(xiàn)免疫耐受而逃脫免疫系統(tǒng)殺傷，其免疫抑制作用同樣表現(xiàn)在HIV、HPV感染的患者中，CIN、宮頸癌與高危型HPV感染具有密切聯(lián)系[12]。本研究結果顯示，CIN組和宮頸癌組外周血和組織中同樣呈現(xiàn)Treg細胞表達顯著升高并明顯高于對照組的狀態(tài)，宮頸癌組表達較CIN組高。但外周血和組織中的表達卻呈現(xiàn)明顯的差別，外周血中Treg細胞表達雖然呈現(xiàn)明顯的升高但與FIGO分期、腫瘤大小、淋巴結轉移、脈管浸潤等腫瘤生長發(fā)展相關的病理學特征無明顯相關性，僅與分化程度呈顯著的負相關。而在組織中與其相關的病理學特征包括FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、脈管浸潤。提示Treg細胞與腫瘤惡性程度關系更為密切，其與腫瘤的生長、侵襲、轉移也存在相關性，但外周血并未表現(xiàn)出這一特征。有研究認為Treg細胞或許為腫瘤細胞由外周血招募而來，外周血中Treg細胞表達與臨床分期有關，與本研究結果不同。推斷Treg的來源可能不止于外周血，隨著組織周圍CD4+ T細胞浸潤，被腫瘤細胞誘導分化而來的Treg細胞也許是主要的Treg來源，而外周血招募可能作為一種整體的調節(jié)補給。

Th17/Treg反映的Th17細胞和Treg細胞的關系，對判斷腫瘤患者免疫系統(tǒng)功能紊亂程度有指導作用。組織中Th17/Treg與FIGO分期、淋巴結轉移、脈管浸潤均有關。表現(xiàn)隨著腫瘤進展、侵襲、轉移活性增強，免疫逃逸現(xiàn)象越明顯，此時Th17細胞則增長已遠不及Treg細胞，兩者平衡出現(xiàn)明顯漂移，Treg細胞的作用可能對Th17細胞的抗腫瘤作用形成抑制，兩者關系與Th1/Th2漂移促進Th17細胞分化的作用結合而形成Th17細胞高表達促進腫瘤新生血管生成，而腫瘤殺傷作用受抑制的有利于腫瘤進展的免疫環(huán)境。

綜述所述，宮頸癌患者外周血和組織中Th17細胞和Treg細胞表達均顯著升高，在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要促進作用。組織中Th17/Treg失衡反應腫瘤細胞促進形成有利于自身增殖、生長環(huán)境的免疫調節(jié)作用增強，Treg細胞的分化和功能在宮頸癌組織中表現(xiàn)更為強勢。

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（收稿日期：2013-09-25）