京萬(wàn)紅凝膠劑對(duì)大鼠神經(jīng)變性型糖尿病足的影響*

劉玉璇，趙 宇，國(guó)大亮，陳 柳，劉文偉

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司，天津 300112）

京萬(wàn)紅凝膠劑對(duì)大鼠神經(jīng)變性型糖尿病足的影響*

劉玉璇1，趙 宇2，國(guó)大亮1，陳 柳1，劉文偉2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司，天津 300112）

[目的]觀察京萬(wàn)紅凝膠劑對(duì)大鼠神經(jīng)變性型糖尿病足的影響。[方法]采用神經(jīng)變性型糖尿病足潰瘍模型，觀察京萬(wàn)紅凝膠劑對(duì)模型大鼠的影響。[結(jié)果]1）采用京萬(wàn)紅凝膠劑、油膏劑，重組人表皮生長(zhǎng)因子分別給藥，各給藥組給藥14 d后，給藥各組與模型組相比，均有明顯的好轉(zhuǎn)。2）各給藥組均有改善大鼠神經(jīng)變性型糖尿足癥狀的趨勢(shì)，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常。[結(jié)論]在該實(shí)驗(yàn)條件下，京萬(wàn)紅凝膠劑與京萬(wàn)紅油膏劑、重組人表皮生長(zhǎng)因子具有相同的促進(jìn)大鼠神經(jīng)變性型糖尿足病灶愈合的作用。

京萬(wàn)紅；凝膠劑；神經(jīng)變性型；糖尿足

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)SCXK（軍）2007-004，體質(zhì)量220～240 g。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 1）鏈尿佐菌素（Sigma公司，貨號(hào)：S0310）。2）檸檬酸（Sigma公司，貨號(hào)：S1804-500G）。3）檸檬酸鈉（Sigma公司，貨號(hào)：C1909-500G）。4）京萬(wàn)紅軟膏（天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司，批號(hào)：211485）。5）京萬(wàn)紅凝膠劑（自制）。6）重組人表皮生長(zhǎng)因子凝膠（中國(guó)華諾威基因藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20110905）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 PHS-3C型酸度計(jì)，蕭山市分析儀器廠。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠糖尿病模型的復(fù)制 選用Wistar大鼠90只，雄性，體質(zhì)量220～240 g，編為1～90號(hào)。造模前大鼠禁食不禁水24 h，造模時(shí)稱(chēng)量大鼠空腹體質(zhì)量，據(jù)大鼠總體質(zhì)量稱(chēng)量所需的鏈脲菌素（STZ），用配置好的無(wú)菌檸檬酸緩沖液（pH 4.35，酸度計(jì)測(cè)得）以1%濃度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）配制獲得所需的STZ溶液，根據(jù)大鼠空腹體質(zhì)量，以60 mg/kg體質(zhì)量腹腔快速注射相應(yīng)劑量的STZ（STZ稱(chēng)質(zhì)量，配制，注射時(shí)注意避光，30 min內(nèi)注射完畢）。1周后尾尖取血，用中生北控試劑公司提供的葡萄糖試劑盒測(cè)定空腹血糖，排除血糖值小于16.65 mmol/L的大鼠，血糖值達(dá)標(biāo)的大鼠喂養(yǎng)1個(gè)月，期間保持足夠的飲水量及飼料，每天清潔1次衛(wèi)生，環(huán)境溫度為（25±2）℃。

2.2 大鼠糖尿病足模型的復(fù)制 高糖Wistar大鼠在飼養(yǎng)1個(gè)月后，建立神經(jīng)變性型糖尿病足潰瘍模型。大鼠俯臥位，50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，沿坐骨神經(jīng)走向切開(kāi)長(zhǎng)約1.5～2.0 cm的切口，分離皮下肌肉層，暴露坐骨神經(jīng)。用中號(hào)止血鉗在坐骨神經(jīng)分叉處上方0.5 cm處夾持，滿扣，1 min（鉗壓強(qiáng)度：鉗子的第2段）。然后逐層縫合。

2.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 造模21 d后，待大鼠足部出現(xiàn)潰瘍后，按照大鼠體質(zhì)量、血糖及造模后瓦格納分級(jí)結(jié)果，將大鼠按分層隨機(jī)方法分為4組：糖尿病模型組（10只），京萬(wàn)紅油膏劑（10只），京萬(wàn)紅凝膠劑組（10只），重組人表皮生長(zhǎng)因子組（rhEGF，10只）另外10只糖尿病正常組作為對(duì)照。給藥劑量見(jiàn)表1。

各組大鼠足部于分組1 d后按表1劑量每天上午9∶00給藥1次，給藥14 d。換藥前用溫水清潔創(chuàng)面，擦干后給藥，并用無(wú)菌紗布包扎。

表1 各組別給藥劑量表Tab.1 Table of administration dosage in each group

2.4 大鼠體質(zhì)量和血糖的測(cè)量 分別于分組前和給藥14 d后對(duì)各組大鼠的體質(zhì)量和血糖進(jìn)行測(cè)量并記錄結(jié)果。

2.5 瓦格鈉分級(jí) 記錄各組大鼠分組后，給藥5 d后，10 d后，14 d后瓦格納分級(jí)結(jié)果。分?jǐn)?shù)代表了足部潰瘍的程度，分?jǐn)?shù)越小，足部損傷程度越小，越接近正常組織。

其三，從人均收入來(lái)看，我市人均生產(chǎn)總值、城市居民人均可支配收入、農(nóng)村住戶人均純收入近年來(lái)都呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但三者增長(zhǎng)并不同步。人均生產(chǎn)總值增長(zhǎng)快于城市居民人均可支配收入，城市居民人均可支配收入增長(zhǎng)又快于農(nóng)村住戶人均純收入，使居民難以充分享受經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)帶來(lái)的好處，也使城鄉(xiāng)居民收入差距有進(jìn)一步拉大的可能。

分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：皮膚完整無(wú)開(kāi)放性病灶，僅有肢端供血不足，皮膚冷涼呈暗紅色伴有麻木、刺痛、灼痛，感覺(jué)遲鈍或喪失，并有足趾或足畸形。1級(jí)：皮膚有開(kāi)放性淺病灶，但未累及深部，如水泡、血泡、腫脹雞眼或胼胝，及其他損傷所致的皮膚淺表潰瘍。2級(jí)：感染皮損病灶已侵犯深部肌肉，膿性滲出物較多，但無(wú)肌腱、韌帶破壞常表現(xiàn)為蜂窩組織炎,多發(fā)性膿灶或竇道形成,感染順肌間隙擴(kuò)展,形成足部貫通性潰瘍。3級(jí)：肌腱韌帶受損，蜂窩組織炎相互融合形成大膿腔，膿性物及壞死組織增多，但無(wú)明顯骨質(zhì)破壞。4級(jí)：嚴(yán)重感染導(dǎo)致骨質(zhì)破壞、缺損、骨髓炎、骨關(guān)節(jié)破壞或假關(guān)節(jié)形成，部分肢端出現(xiàn)濕性或干性壞疽。5級(jí)：足大部或全部感染或缺血,致嚴(yán)重的濕性或干性壞死，肢端變黑、尸干，常波及踝關(guān)節(jié)和小腿，一般需截肢。

2.6 大體形態(tài)觀察 分別于分組后和給藥14 d后對(duì)各組大鼠足部進(jìn)行觀察。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析（one－way ANOVA），偏態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 大鼠體質(zhì)量和血糖的測(cè)定結(jié)果 各組大鼠的空腹血糖均在16.7mmol/L以上，并且分組后和給藥14d后，各組大鼠的體質(zhì)量和血糖均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明各給藥組無(wú)明顯的降低血糖的作用。各組大鼠血糖和體質(zhì)量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大鼠體質(zhì)量和血糖測(cè)定結(jié)果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

表2 大鼠體質(zhì)量和血糖測(cè)定結(jié)果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

14 d后 分組后 給藥14 d后糖尿病正常組 10 198.5±18.8 182.6±17.3 31.6±3.9 30.0±3.7糖尿病模型組 10 209.4±16.1 192.7±14.9 32.6±3.3 31.0±3.1京萬(wàn)紅油膏劑 10 210.7±19.5 193.9±18.0 33.5±3.1 31.8±2.9京萬(wàn)紅凝膠劑組 10 190.6±18.0 175.3±16.6 30.1±4.0 28.6±3.8重組人表皮生長(zhǎng)組10 211.1±15.3 194.2±14.1 32.3±3.7 30.7±3.6組別 n體質(zhì)量（g） 血糖（mmol/L）分組后 給藥

3.2 瓦格納分級(jí)的結(jié)果 由表3可以看出，分組后，各給藥組間足部損傷程度一致，給藥14d后，給藥組病灶基本愈合，糖尿病模型組多數(shù)出現(xiàn)嚴(yán)重感染如大膿腔或部分肢端出現(xiàn)斷肢或壞死。

表3 瓦格納分級(jí)結(jié)果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

表3 瓦格納分級(jí)結(jié)果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

注：與糖尿病正常組比較，*P＜0.05；與糖尿病模型組相比較，＃P＜0.05。

組別糖尿病正常組糖尿病模型組京萬(wàn)紅油膏劑京萬(wàn)紅凝膠劑組重組人表皮生長(zhǎng)組n 10 10 10 10 10分組1 d后 給藥14 d后0 0 1.32±0.18* 2.89±0.39* 1.35±0.13* 0.62±0.39*＃1.21±0.16* 0.58±0.38*＃1.29±0.15* 0.57±0.42*＃

3.3 大體觀察的結(jié)果 見(jiàn)圖1～5。

由圖可見(jiàn)，隨著給藥天數(shù)的增多，糖尿病模型組的感染病灶已侵犯深部肌肉組織，壞死組織增多，見(jiàn)圖2，而各藥組均有改善癥狀的趨勢(shì)，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常，見(jiàn)圖3～5。

圖1 正常組Fig.1 Control group

4 小結(jié)

各組大鼠的空腹血糖均在16.7 mmol/L以上，并且分組后和給藥14 d后，各組大鼠的體質(zhì)量和血糖均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明各給藥組無(wú)明顯降低血糖的作用。

瓦格納分級(jí)的結(jié)果顯示，分組后，各給藥組間足部損傷程度一致，給藥14 d后，給藥各組與模型組相比，均有明顯的好轉(zhuǎn)。

從足部大體觀察可以看出，隨著給藥天數(shù)的增多，模型組的感染病灶已侵犯深部肌肉組織，壞死組織增多，而各藥組均有改善癥狀的趨勢(shì)，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常。

圖2 糖尿病模型組Fig.2 Diabetic model group

圖3 京萬(wàn)紅組Fig.3 Jingwanhong group

圖4 京萬(wàn)紅凝膠組Fig.4 Jingwanhong gel group

圖5 重組人表皮生長(zhǎng)因子組Fig.5 Human epidermal grouth factor group

5 討論

糖尿病足的發(fā)病率占糖尿病患者的49.5%[7-8]，是糖尿病大血管并發(fā)癥之一，發(fā)生糖尿病足的患者約有5%～10%需要截肢。目前主要認(rèn)為是由于神經(jīng)病變、血管病變及感染等3種因素共同作用所致。其中，周?chē)窠?jīng)病變的發(fā)生率約為30%～45%，下肢最為常見(jiàn)。血管病變是糖尿病并發(fā)足壞疽的重要病理基礎(chǔ)，在免疫力低下及易受外傷等因素的作用下極易感染，糖尿病足患者感染嚴(yán)重程度在臨床上與截肢（趾）率呈正相關(guān)[9-10]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病足屬于“脫疽”范疇，常因臟腑功能失調(diào)，肝脾腎虧虛，加之外邪侵襲而致。脾氣不健，化生不足，氣血虧虛，不能充養(yǎng)四肢，腎陽(yáng)不足，不能溫煦四肢，導(dǎo)致熱盛肉腐終成潰瘍，壞疽[11-13]。京萬(wàn)紅原劑型為復(fù)方純中藥油膏劑，主要成分為地榆、當(dāng)歸、黃連、黃柏、紅花、黃芩、梔子、川芎等30余種中藥，以清熱解毒代表方黃連解毒湯為基礎(chǔ)[14]，又加入具有活血止痛，清熱解毒，化瘀通絡(luò)功效的多味中藥。治法體現(xiàn)了中藥外治法治療糖尿病足的4個(gè)原則，即清熱解毒法[15-16]，活血通絡(luò)法[17-18]，溫通經(jīng)脈法[19]和祛腐生肌法[20]，臨床使用取得了很好的祛腐生肌，減輕疼痛的效果[2-3，21]。

本次兩種劑型影響大鼠神經(jīng)變性型糖尿病足潰瘍模型的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，京萬(wàn)紅凝膠劑與京萬(wàn)紅油膏劑、重組人表皮生長(zhǎng)因子[22]具有相似的促進(jìn)大鼠神經(jīng)變性型糖尿足病灶愈合的作用，為該藥新劑型的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot

LIU Yu-xuan1，ZHAO Yu2，GUO Da-liang1，CHEN Liu1,LIU Wen-wei2
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193,China；2.Tianjin Darentang Jingwanhong Pharmaceutical CO., Ltd.，Tianjin 300112,China）

[Objective]To observe the effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot.[Methods]We used a model with neural degeneration of diabetic foot ulcer to observe the effect of Jingwanhong gel in the diseased rats.[Results]1）Jingwanhong gel,ointment and recombinant human epidermal growth factor were administered separately.Fourteen days later,the disease was better in the treatment groups compared with model group significantly.2）The treatment group had improved neural degeneration in rats with type 2 diabetes foot symptoms.Lesions were gradually decreased.Inflammation was reduced gradually.The pathologic change was tended to normal.[Conclusion]Under the condition of this experiment,Jingwanhong gel and Jingwanhong ointment,recombinant human epidermal growth factor have the same effect in promoting the healing of rat neural degeneration and diabetic foot lesions.

Jingwanhong;gel;nerve degeneration;diabetic foot

R587.2

A

1672-1519（2014）10-0617-04

2013-04-22）

（本文編輯：馬 英，高 杉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.10.11

科技部科技人員服務(wù)企業(yè)行動(dòng)資助項(xiàng)目（2009 GJA10033）。

劉玉璇（1969-），男，博士，教授，從事中藥制藥、制藥工程研究。