多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地前胡藥材質(zhì)量*

任 榮，李正翔

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052）

多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地前胡藥材質(zhì)量*

任 榮，李正翔

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052）

[目的]采用多指標(biāo)法研究并建立前胡質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng),進(jìn)而對(duì)不同產(chǎn)地前胡質(zhì)量進(jìn)行差異性分析。[方法]對(duì)前胡水分、總灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物分別進(jìn)行測(cè)定,并且采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定前胡中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量,將各個(gè)指標(biāo)與含量相結(jié)合，建立前胡質(zhì)量評(píng)價(jià)體系,并對(duì)不同產(chǎn)地前胡進(jìn)行差異性分析和評(píng)價(jià)。[結(jié)果]不同產(chǎn)地前胡質(zhì)量雖有差異,但均能符合《中國(guó)藥典》2010版規(guī)定。[結(jié)論]多指標(biāo)結(jié)合含量測(cè)定的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系可用于不同產(chǎn)地前胡的等級(jí)評(píng)價(jià),可以為擴(kuò)大前胡的種植、栽培提供了理論依據(jù)。

前胡；多指標(biāo)；含量測(cè)定；產(chǎn)地差異；質(zhì)量評(píng)價(jià)

前胡為傘形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorum Dunn）的干燥根，在浙江、江西、安徽、福建、江蘇、四川等省份均有分布[1]，具有疏散風(fēng)熱、降氣化痰作用，臨床上用于治療風(fēng)熱咳嗽痰多，痰熱喘滿(mǎn)，咯痰黃稠等[2-3]。臨床上常與其他藥物組成復(fù)方使用[4]，如方劑前胡湯、前胡飲和前胡犀角湯等。前胡主要生理活性成分為各種類(lèi)型的香豆素化合物，其中白花前胡甲素、白花前胡乙素為主要有效成分[5]。由于前胡的種植范圍廣，各產(chǎn)地的氣候、自然環(huán)境有很大差異[6]，受各種因素影響，不同產(chǎn)地前胡藥材質(zhì)量可能存在差異，因此有必要對(duì)不同產(chǎn)地前胡藥材進(jìn)行綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)，為規(guī)范臨床用藥提供依據(jù)，進(jìn)一步規(guī)范前胡藥材的合理化種植。前胡中含有多種生物活性成分,如何評(píng)價(jià)多種生物活性成分中藥材的質(zhì)量,分析影響中藥材質(zhì)量的生態(tài)環(huán)境因子差異,是現(xiàn)代中藥產(chǎn)業(yè)研發(fā)中的關(guān)鍵問(wèn)題[7-8]。筆者對(duì)不同產(chǎn)地前胡質(zhì)量進(jìn)行全面的綜合評(píng)價(jià)，建立其質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。本研究將水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、白花前胡甲素、白花前胡乙素含量測(cè)定等多項(xiàng)指標(biāo)結(jié)合起來(lái)，對(duì)不同產(chǎn)地前胡進(jìn)行綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)。白花前胡甲素、白花前胡乙素的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

1 儀器與試藥

LC-10ATvp型高效液相色譜儀（島津，日本），SPD-10Avp紫外檢測(cè)器（島津，日本）。白花前胡甲素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111711－200602），白花前胡乙素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111904-201203），前胡樣品的采集見(jiàn)表1。中藥材由亳州中藥總公司提供，并經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院藥劑科胡建平副主任藥師鑒定為傘形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorum Dunn）的干燥根。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

圖1 白花前胡甲素（A）和白花前胡乙素（B）的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of praeruptorin A（A）and praeruptorin B（B）

2 方法與結(jié)果

2.1 水分、灰分及浸出物測(cè)定 藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物的測(cè)定在一定程度上可以反映藥材的質(zhì)量，本研究依據(jù)《中國(guó)藥典》2010版對(duì)不同產(chǎn)地前胡藥材進(jìn)行相應(yīng)測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 不同產(chǎn)地前胡白花前胡甲素、白花前胡乙素含量的比較測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：島津ULTRON VX-ODS（250 mm×4．6 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相：甲醇－水（7∶3），檢測(cè)波長(zhǎng)：321 nm，流速：1.0 mL/min。柱溫：室溫，20 μL定量環(huán)進(jìn)樣。對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

表1 不同產(chǎn)地前胡水分、總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab.1 Determination of water,total ash and acid-insoluble ash in Radix Peucedani from different districts(n=3)%

圖2 HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatograms

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取白花前胡甲素對(duì)照品、白花前胡乙素對(duì)照品適量，分別加甲醇制成0.102 mg/mL和0.039 6 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)定各品種前胡藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入氯仿25mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率250W，頻率33 kHz）20 min，放冷，用氯仿補(bǔ)足減失質(zhì)量，精密吸取上清液5 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?5 mL，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.4 線性范圍考察 取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇制成含白花前胡甲素10.2、20.4、50.1、71.4、102 μg/mL及白花前胡乙素3.96、7.92、19.8、27.7、39.6 μg/mL的系列混合對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程：白花前胡甲素：＝52985X+9848.1（r＝0．9999），白花前胡乙素：＝51 777X＋24 258（r＝0．999 9），結(jié)果表明：白花前胡甲素、白花前胡乙素分別在10.2～102 μg/mL，3.96～39.6 μg/mL范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2 白花前胡甲素標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab.2 Standard curve of praeruptorin A

表3 白花前胡乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab.3 Standard curve of praeruptorin B

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定兩種對(duì)照品峰面積，得出白花前胡甲素、白花前胡乙素RSD分別為0.96%和0.92%。結(jié)果見(jiàn)表4、表5。

表4 白花前胡甲素精密度實(shí)驗(yàn)Tab.4 Precision test of praeruptorin A

表5 白花前胡乙素精密度實(shí)驗(yàn)Tab.5 Precision test of praeruptorin B

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液（產(chǎn)地安徽），分別測(cè)定色譜峰面積，白花前胡甲素RSD為1.53%（n＝6）。白花前胡乙素RSD為1．73%（n＝6），結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)Tab.6 Reproducibility testmg/g

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（產(chǎn)地安徽），分別于0、2、4、6、10、24 h進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰面積，白花前胡甲素RSD為1.24%（n＝6），白花前胡乙素RSD為1．12%（n＝6），結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Tab.7 Stability test mg/g

2.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取6份已知含量的樣品（產(chǎn)地安徽）各約0.25 g，精密稱(chēng)定，每份分別精密加入適量的白花前胡甲素、白花前胡乙素對(duì)照品，按供試品溶液制備及測(cè)定方法操作，進(jìn)行色譜分析，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab.8 Results of recovery tests(n=6)

2.2.9 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的前胡樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，每個(gè)產(chǎn)地樣品平行制備3份，按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量。結(jié)果見(jiàn)表9。

3 討論

本研究對(duì)前胡的水分、總灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)合前胡中兩種主要成分白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量測(cè)定結(jié)果，建立全面的前胡藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，并通過(guò)此體系綜合分析不同產(chǎn)地前胡藥材的質(zhì)量差異。

表9 不同產(chǎn)地前胡中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量Tab.9 Determination of praeruptorin A and B in Radix Peucedani from different habitats

白花前胡甲素和白花前胡乙素均為香豆素類(lèi)物質(zhì)，極性較小，因而采用氯仿作為提取溶劑，所制得的樣品溶液中雜質(zhì)干擾峰較少。在筆者采用的色譜條件下，能很好的滿(mǎn)足含量測(cè)定要求。超聲提取5、10、20、30 min，結(jié)果表明20 min可基本提取完全。王維等[9]用紫外分光光度法測(cè)定不同產(chǎn)地前胡中總香豆素的含量，結(jié)果顯示，該方法精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率均良好。系統(tǒng)考察了浙江不同產(chǎn)地栽培品和野生品前胡的總香豆素含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)個(gè)產(chǎn)地之間總香豆素含量無(wú)顯著差異。

俞年軍等[10]比較了不同產(chǎn)地前胡揮發(fā)油化學(xué)成分，結(jié)果顯示，主產(chǎn)區(qū)白花前胡飲品的揮發(fā)油成分沒(méi)有明顯差異。代麗萍等[11]對(duì)不同產(chǎn)地前胡單一成分白花前胡甲素的測(cè)定，結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地前胡中白花前胡甲素含量差異顯著。通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，韓超[12]、黃瑞紅等[13]僅對(duì)提取物或制劑中的白花前胡甲素進(jìn)行了含量測(cè)定。聶小忠等[14]對(duì)江西、浙江、安徽、重慶等地前胡質(zhì)量進(jìn)行比較，與本研究樣品采集地有差別，并且未對(duì)樣品水分、灰分等項(xiàng)目進(jìn)行測(cè)定比較。本研究為首次使用HPLC法同時(shí)測(cè)定兩種香豆素含量的方法應(yīng)用于評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地前胡質(zhì)量。并對(duì)各樣品的水分、灰分等項(xiàng)目進(jìn)行全面評(píng)價(jià)，與上述文獻(xiàn)比較，方法簡(jiǎn)便、快捷，全面，更具有代表性。

前胡中白花前胡甲素的含量約是白花前胡乙素含量的3倍，不同產(chǎn)地前胡中兩種香豆素成分的含量相差較大，其中白花前胡甲素的含量相差尤為明顯。以江蘇產(chǎn)前胡中香豆素含量最高，河南、浙江、安徽、江西等省產(chǎn)前胡差異不明顯，從測(cè)定結(jié)果可以看出，不同產(chǎn)地前胡由于生長(zhǎng)環(huán)境、氣候條件的不同，這些因素均能影響中藥材次生代謝物的生成。通過(guò)對(duì)氣候類(lèi)型的分析可知，溫暖濕潤(rùn)的亞熱帶過(guò)渡型氣候比較適于前胡的生長(zhǎng)。

水分、灰分及浸出物測(cè)定結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地前胡水分含量在7.491%～10.89%，均符合《中國(guó)藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其中湖北產(chǎn)前胡水分含量最高，湖南產(chǎn)最低。不同產(chǎn)地樣品總灰分、酸不溶性灰分存在一定差異。所測(cè)樣品總灰分含量在7.776%～3.689%，酸不溶性灰分為1.365%～0.265%?？偦曳帧⑺岵蝗苄曰揖鶠楹袭a(chǎn)前胡含量最高，其原因可作進(jìn)一步研究?？偦曳趾孔畹偷臑榘不债a(chǎn)前胡，酸不溶性灰分最低為浙江產(chǎn)前胡?！吨袊?guó)藥典》2010版規(guī)定前胡藥材醇溶性浸出物的量不得少于20%，所測(cè)樣品均符合規(guī)定，最高的為安徽產(chǎn)前胡，最低為湖北產(chǎn)前胡。

通過(guò)對(duì)此體系進(jìn)行分析，不同產(chǎn)地前胡醇溶性浸出物都在20%以上，水分不超過(guò)12%，總灰分不超過(guò)8%，酸不溶性灰分不超過(guò)2%，所有樣品都能符合《中國(guó)藥典》2010版標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量較好。

藥材具有道地性，不同產(chǎn)地藥材具有不同的質(zhì)量差異[15]。本方法的建立可以用于評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地前胡的質(zhì)量差異，考察對(duì)不同產(chǎn)地前胡樣品的生長(zhǎng)年限、加工方法、品種、貯藏年限、炮制方法等因素對(duì)藥品質(zhì)量的影響。為前胡的大規(guī)模引種栽培和中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）基地建設(shè)提供了依據(jù)，為擴(kuò)大前胡產(chǎn)區(qū)范圍，從《本草綱目》記載的浙江擴(kuò)大到整個(gè)暖溫帶到亞熱帶氣候地區(qū)地區(qū)提供理論支持。本前胡藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)體系可以對(duì)不同產(chǎn)地前胡進(jìn)行綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)，用以衡量前胡藥材質(zhì)量，以為臨床用藥及藥品生產(chǎn)企業(yè)提供合格藥材。

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Comprehensive evaluation with multi-index for quality test of radix peucedani from different habitats

REN Rong,LI Zheng-xiang
（General Hospital of Tianjin Medical University,Tianjin 300052,China）

[Objective]To establish a multi-index system for comprehensive evaluating the quality of Radix Peucedani and analyzing the quality differences in Radix Peucedani from different habitats.[Methods]The moisture content,total ash,acid-insoluble ash,ethanolsoluble extracts and the contents of praeruptorin A and B of Radix Peucedani from different habitats were detected by HPLC.Then combining the indexes mentioned above a quality evaluation system for Radix Peucedani was established,which could be used to assess the quality for Radix Peucedani from different habitats.[Results]The detection results of moisture content,ash,acid-insoluble ash and contents of praeruptorin A and B indicated that these contents in all samples were met the standard of Chinese Pharmacopeia 2010 edition.[Conclusion]The quality of Radix Peucedani from different habitats can be assessed and controlled by the quality evaluation system established by multipoint test in this research.

Radix Peucedani;multiple index;content determination;different habitats;quality evaluation

R282.5

A

1672-1519（2014）10-0627-04

2014-04-16）

（本文編輯：高 杉，于春泉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.10.14

天津市衛(wèi)生局科技基金資助項(xiàng)目（2012ky30）。作者簡(jiǎn)介：任 榮（1979-）男，碩士，主管藥師，主要研究方向?yàn)樗幬镏苿?/p>

李正翔，E-mail:lee41@sina.com。