HPLC法同時測定五加芪菊顆粒中刺五加、菊花的含量

敖立實 孫宇光 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城 137000）

HPLC法同時測定五加芪菊顆粒中刺五加、菊花的含量

敖立實 孫宇光 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城 137000）

目的建立高效液相色譜法同時測定五加芪菊顆粒中刺五加（以紫丁香苷計）和菊花（以3，5-O-二咖啡?；鼘幩嵊嫞┖康姆椒?，為相關(guān)研究提供方法學(xué)參考。方法采用DiamonsilC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，進(jìn)行梯度洗脫。檢測波長為348 nm。結(jié)果紫丁香苷和3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸的線性范圍分別為0.10～40.0μg/mL（r=0.9984）、0.05～10.0 μg/mL（r=0.9991），方法回收率分別為98.76%（n=6）、94.26%（n=6）。結(jié)論所建立的方法準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，在同一試驗過程中，同時測定五加芪菊顆粒中刺五加、菊花含量。

五加芪菊顆粒；高效液相色譜法；刺五加；菊花；紫丁香苷；3，5-O-二咖啡?；鼘幩?/p>

1 材料與方法

1.1 儀器

美國安捷倫液相色譜儀1260；BS-223電子天平；ZBS水浴鍋。

1.2 試藥試劑和對照品

紫丁香苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110279-201214；3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號：100094-201139；甲醇為色譜純；水為純化水。

1.3 色譜條件

色譜柱：DiamonsilC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長：348 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：35 ℃。色譜柱的理論塔板數(shù)按紫丁香苷峰計算＞3000。

表1

1.4 對照品溶液的制備

取紫丁香苷對照品，精密稱定10.13 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得；取3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌罚芊Q定10.05 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

1.5 供試品溶液的制備

取本品，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過[1]。精密量取續(xù)濾液10 mL，置圓底燒瓶中，置水浴上蒸去甲醇，加2.5 mol/L硫酸溶液20 mL，超聲處理10 min使溶解，置水浴上加熱1 h，取出，放冷，用乙醚提取4次，每次25 mL，合并乙醚液，用水洗滌，低溫回收至干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2 方法學(xué)考察

2.1 專屬性實驗

在上述色譜條件下測得的色譜圖，分別為混合對照、樣品陰性對照，紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩岱蛛x良好，其他成分不干擾紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩岬臏y定。

2.2 線性范圍

分別精密量取紫丁香苷對照品溶液加甲醇制成0.10、0.20、1.0、5.0、20.0、40.0 μg/mL，3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌啡芤?.05、0.1、0.5、2.0、5.0、10.0 μg/mL注入安捷倫1260高效液相色譜儀，以紫丁香苷對照品峰和3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌贩迕娣e積分值為縱坐標(biāo)，其進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，分別得回歸方程為y=0.0085+0.0578x，r＝0.9984（n=6），y=1.2021+4.8955x，r=0.9991（n=6）說明紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸在0.10～40.0 μg/mL和0.05～10.0 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[2]。

2.3 精密度試驗

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品溶液，注入安捷倫1260液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣量為20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的平均值分別為7502356、5036511，其RSD為0.37%（n=6）。表明精密度良好。

圖1 紫丁香苷與3，5-O-二咖啡?；鼘幩峄旌蠈φ?、樣品陰性對照

圖2 紫丁香苷陰性對照

圖3 3，5-O-二咖啡?；鼘幩彡幮詫φ?/p>

2.4 穩(wěn)定性試驗

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品溶液，注入安捷倫1260液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣量為20 μL，在2、4、6、10、12、24、48 h分別測定。結(jié)果峰面積平均值分別為7482365、5012398，其RSD為0.56%（n=6）。表明溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 回收率試驗

分別精密稱取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌?0.24、5.08 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

另精密稱取5批已知含量的五加芪菊顆粒內(nèi)容物適量，置100 mL量瓶中，加甲醇約50 mL，溶解，精密加上述對照品溶液10 mL，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得，分別精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，按1.3項下色譜條件測定，以外標(biāo)法計算，結(jié)果紫丁香苷平均回收率98.76%，RSD為0.88%；3，5-O-二咖啡?；鼘幩崞骄厥章蕿?4.26%，RSD為1.11%。

3 小 結(jié)

本實驗對五加芪菊顆粒中刺五加、菊花中的有效成分紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩徇M(jìn)行分析，探索用一種實驗方法對2種成分的同時測定，填補(bǔ)了標(biāo)準(zhǔn)的空白，有效的控制了五加芪菊顆粒的質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2010年版.一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1963:168.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局.《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分)內(nèi)科 氣血津液分冊[M].

R284

B

1671-8194（2014）13-0085-02