★ 肖小梅 胡志方 郭慧玲 胡律江 郭三保 趙曉娟
(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004;2.江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校 江西 撫州 344000)
氣為一身之主,升降出入,外而肌腠,內(nèi)而臟腑, 是肌體的動(dòng)力,與血共存,氣可運(yùn)血,血可載氣。循環(huán)反復(fù)將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)源源不斷輸送到肌體的四肢百骸,推動(dòng)肌體生長(zhǎng)發(fā)育、肌體的新陳代謝、臟腑運(yùn)動(dòng)、物質(zhì)的運(yùn)輸。但勞倦過(guò)度,情志失調(diào),飲食失節(jié),寒溫不適等,均可使氣的升降失常,引起氣滯證或氣逆證。故《素問(wèn)·舉痛論》說(shuō):“百病生于氣也?!盵1]因此,如何靈活應(yīng)用好理氣藥,是臨床上一個(gè)重要的問(wèn)題。理氣藥主要用于治療“氣滯”引起的胸腹疼痛等證候。 以疏通氣機(jī)、消除氣滯、平降氣逆為主要作用的一類(lèi)中藥。又稱(chēng)行氣藥。多辛、苦,性溫,氣味芳香,具有行氣消脹,解郁止痛、降逆等功效[2,3]。理氣藥是中國(guó)的傳統(tǒng)藥物,有著上千年的應(yīng)用歷史,尤其是復(fù)方理氣藥,依據(jù)“君臣佐使”的原則配伍組方,在疾病的臨床治療上發(fā)揮重要作用。但由于中藥成分復(fù)雜,其藥效不穩(wěn)定,毒性不清楚,藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確,藥物作用機(jī)理不清等原因直接制約了我國(guó)中藥的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。
藥物口服后其有效成分可經(jīng)由胃、小腸等部位直接吸收入血,或在肝臟經(jīng)肝微粒體酶 (P450)代謝為有活性的代謝產(chǎn)物,或誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生激素等某些生理活性物質(zhì)。無(wú)論經(jīng)過(guò)何種途徑,藥物的有效成分必須以血液為介質(zhì)輔送到各組織、器官、系統(tǒng)等病變的靶點(diǎn),從而發(fā)揮相應(yīng)的作用[4]。因此,給藥后的血清才是真正發(fā)揮藥效的成分,血清中含有的成分才可能是中藥的體內(nèi)直接作用物質(zhì)。
血清藥物化學(xué)是從含有真正有效成分的血液中分取血清進(jìn)行藥物學(xué)研究,最早是由日本學(xué)者田代真一于1988年提出來(lái)的[5,6]。中藥血清藥物化學(xué)是以傳統(tǒng)藥物化學(xué)方法為基礎(chǔ),綜合應(yīng)用多種現(xiàn)代技術(shù),建立給藥樣品的全成分指紋圖譜,通過(guò)中藥指紋圖譜建立療效與化學(xué)成分的聯(lián)系,分析鑒定進(jìn)入體內(nèi)后血清中移行成分,從而可以為中藥及復(fù)方的配伍、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制及藥動(dòng)學(xué)等方面的研究奠定一定的基礎(chǔ)。
中藥具有行氣或降氣作用,能疏暢氣機(jī),以治療氣滯證或氣逆證為主,臨床上常用的理氣藥主要有陳皮、青皮、厚樸、枳實(shí)、枳殼、木香、烏藥、香附、沉香等。基于它們良好的臨床療效, 采用血清藥物化學(xué)的方法追蹤其體內(nèi)直接作用物質(zhì), 并以其中主要成分作為指標(biāo), 建立含量測(cè)定方法, 對(duì)這類(lèi)理氣藥進(jìn)行內(nèi)在質(zhì)量控制。
李曉玲等[7]對(duì)茶枝柑皮提取物進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究。采用HPLC方法測(cè)定分析茶枝柑皮提取物給藥后的含藥血清,鑒定茶枝柑皮提取物灌胃后大鼠血中移行成分。結(jié)果表明在茶枝柑皮提取物含藥血清中發(fā)現(xiàn)了17個(gè)入血成分,其中5個(gè)為原型成分,其他的可能為代謝產(chǎn)物。其入血原型成分主要為多甲氧基黃酮、陳皮素和桔皮素等成分,深入研究其血清藥物化學(xué)的表征,將有助于探索茶枝柑皮提取物的功效物質(zhì)基礎(chǔ),探明其中的功能因子。
聶子文等[8]對(duì)烏藥揮發(fā)油的血清藥物化學(xué)進(jìn)行研究,通過(guò)建立 HPLC 色譜分析方法,分析烏藥揮發(fā)油給藥前后血漿樣品與其體外烏藥揮發(fā)油的成分變化,鑒定血中移行成分。結(jié)果表明體外烏藥揮發(fā)油在 11.6min 處有吸收峰,給烏藥揮發(fā)油后 0.5,1,1.5,2,4,6h 的血漿與空白血漿相比,在 11.6min 和 46.5min 有新成分被測(cè)出。
郭楠等[9]通過(guò)建立 HPLC 色譜分析方法,對(duì)香附有效成分 α-香附酮進(jìn)行血清藥物化學(xué)和藥物動(dòng)力學(xué)研究。針對(duì)進(jìn)入血液中的香附成分進(jìn)行分析,從而初步篩選出其產(chǎn)生作用的物質(zhì)基礎(chǔ),探討其體內(nèi)直接作用物質(zhì),為進(jìn)行有效治療控制和提取純化工藝研究奠定基礎(chǔ)。
復(fù)方的血清藥物化學(xué)研究,多是在分析全方、單味藥及其相應(yīng)的動(dòng)物含藥血清指紋圖譜的基礎(chǔ)上,比較各移行成分來(lái)自于那種單味藥或?yàn)槟膸追N藥物綜合代謝的產(chǎn)物,從而探究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
肖秋元等[10]通過(guò)建立大承氣湯水煎劑及大鼠口服給藥后血清的HPLC-DAD指紋圖譜色譜分析方法,對(duì)大承氣湯的血清藥物化學(xué)方法進(jìn)行研究。結(jié)果顯示大承氣湯復(fù)方體外可以明確標(biāo)出的成分有58個(gè),而其血中移行成分有37個(gè),其中29個(gè)成分來(lái)源于復(fù)方中的原型成分,另外的8個(gè)為代謝物和新產(chǎn)生的物質(zhì)。此血清藥物化學(xué)研究方法適用于大承氣湯的物質(zhì)基礎(chǔ)研究,其結(jié)果初步確定了復(fù)方血中移行成分的來(lái)源,也在一定程度上說(shuō)明了大承氣湯中的配伍關(guān)系,為進(jìn)一步研究大承氣湯物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了基礎(chǔ)。
枳術(shù)丸系張?jiān)馗鶕?jù)仲景《金匱要略》治水飲的枳術(shù)湯演化而成, 方中白術(shù)用量倍于枳實(shí), 二藥為細(xì)末, 荷葉煎水泛為丸, 主治腹脹、心下痞、胃脘痛等癥,應(yīng)用歷史悠久。王喜軍等[11]應(yīng)用血清藥物化學(xué)的方法, 對(duì)口服枳術(shù)丸后血清中移行成分進(jìn)行分析,結(jié)果表明口服給藥后,從大鼠血清中檢測(cè)到了13個(gè)化合物,其中6個(gè)為枳丸中原型成分,7個(gè)為代謝產(chǎn)物,柏皮普、橙皮營(yíng)及新橙皮普等為枳術(shù)丸主要體內(nèi)直接作用物質(zhì),實(shí)驗(yàn)同時(shí)建立了枳術(shù)丸中入血成分柏皮營(yíng)、橙皮昔的含量測(cè)定方法并以此對(duì)枳術(shù)丸進(jìn)行內(nèi)在質(zhì)量控制。
柴芩清肝湯是由柴胡、黃芩、白芍和甘草等制成的中藥湯劑。付克等[12]采用HPLC-UV法建立柴芩清肝湯體外樣品和灌胃前后大鼠血清樣品的指紋圖譜,分析柴芩清肝湯口服給藥后大鼠體內(nèi)血中移行成分,通過(guò)三者之間的比較確定柴芩清肝湯血中移行成分。結(jié)果檢測(cè)到大鼠血中移行成分14個(gè),8個(gè)為柴芩清肝湯中原型成分,6個(gè)為代謝產(chǎn)物。該研究為進(jìn)一步闡明柴芩清肝湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了基礎(chǔ)。
中藥是中國(guó)的國(guó)粹,其可貴之處在于中藥之間的綜合作用,但其有很多成分未明確, 如何有效的開(kāi)展中藥血清化學(xué)研究, 這是一個(gè)學(xué)術(shù)界值得探討的問(wèn)題。目前, 有效化學(xué)指標(biāo)成分的分析及檢測(cè)是影響中藥藥物血清深入研究的難點(diǎn), 今后的重點(diǎn)也應(yīng)該結(jié)合藥物血清的藥理效應(yīng),分析和檢測(cè)有效的化學(xué)成分并探討其代謝規(guī)律與藥理效應(yīng)的關(guān)系,以闡明藥物血清藥理效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ), 使中藥藥物的血清研究上一個(gè)新臺(tái)階[13,14]。同時(shí)血清藥物化學(xué)研究方法亦有不足之處:(1)從胃腸吸收的藥物在體內(nèi)是進(jìn)入血漿, 而非血清;(2)有些藥物進(jìn)入體內(nèi)會(huì)有首過(guò)效應(yīng),肝臟的肝微粒體酶可能降解某些中藥成分;(3)使用有機(jī)溶劑制備血清過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致中藥成分與中藥介導(dǎo)體內(nèi)釋放物質(zhì)損失,影響中藥成分的測(cè)定。因此,血清藥物化學(xué)的研究應(yīng)考慮以下問(wèn)題。
3.1 分析與評(píng)價(jià)方法 給藥樣品成分分析及質(zhì)量評(píng)價(jià)應(yīng)該建立給藥樣品的全成分指紋圖譜, 明確給藥樣品中所含原型成分和代謝產(chǎn)物, 測(cè)定主要成分的含量, 明確發(fā)揮藥理效應(yīng)的物質(zhì)。
3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 根據(jù)研究中藥所含的主要成分來(lái)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物, 從動(dòng)物對(duì)藥物作用的選擇性出發(fā),選擇與人體代謝行為相同或相似的動(dòng)物, 真正模擬藥物的體內(nèi)過(guò)程[15,16]。
3.3 血清樣品的處理方法 含藥血清樣品的制備運(yùn)用有機(jī)溶劑萃取法、重金屬鹽沉淀蛋白法、有機(jī)酸沉淀蛋白法及超濾法等方法, 渦旋,再高速離心,使血中移行成分富集并純化,減少干擾物質(zhì)的影響。
3.4 血清樣品的檢測(cè)分析方法 血清樣品的分析綜合運(yùn)用高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法、氣-質(zhì)聯(lián)用法、薄層掃描法、原子吸收光譜法等現(xiàn)代分析方法, 確定血中移行成分,進(jìn)行藥效相關(guān)性研究, 揭示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
3.5 多組分物質(zhì)的綜合評(píng)價(jià)分析 中藥及復(fù)方的藥代動(dòng)力學(xué)研究以體內(nèi)直接作用物質(zhì)為指標(biāo), 多成分同時(shí)分析,從單方藥和復(fù)方中藥的藥動(dòng)學(xué)相關(guān)性出發(fā),給藥方案?jìng)€(gè)體化[17,18]。
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,血清藥物化學(xué)在近十幾年的實(shí)踐研究中取得眾多卓越的成績(jī), 有力推動(dòng)了中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。其研究方法的建立, 開(kāi)創(chuàng)了中藥復(fù)方研究的新局面, 為研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和闡明中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供技術(shù)支持[19]。中藥指紋圖譜現(xiàn)已成為中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究的一種新模式。隨著研究的不斷深入,從體內(nèi)出發(fā)描述的指紋圖譜應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的領(lǐng)域在不斷的延伸,已滲透到中藥評(píng)價(jià)體系的各個(gè)方面, 包括中藥化學(xué)指紋圖譜(真實(shí)性鑒定)、生物指紋圖譜和代謝指紋圖譜(有效性評(píng)價(jià)和安全性評(píng)價(jià))。建立血清藥物化學(xué)動(dòng)態(tài)圖譜來(lái)反映中藥化學(xué)成分群在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其與藥物原型成分之間的相關(guān)性,可以更加清楚地闡述中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
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