葛根飲片包裝貯藏方法及其質(zhì)量評(píng)價(jià)研究*

★ 鐘凌云 馬冰潔

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 江西 南昌 330004)

中藥具有藥源廣泛,價(jià)格低廉,副作用小且療效可靠的優(yōu)點(diǎn)，故廣受患者的青睞，但由于歷史原因的影響，中藥在包裝、調(diào)劑、貯藏保存過(guò)程中依然存在不少問(wèn)題,這直接影響中藥的質(zhì)量和療效,甚至還可能因?yàn)榘b運(yùn)輸不當(dāng)而造成藥品污染或產(chǎn)生不同程度的變質(zhì)現(xiàn)象[1]。葛根是藥食兩用品種之一，作為一種流通及消耗量較大的大宗藥材，其包裝材料及儲(chǔ)存條件的選擇顯得尤為重要。目前小包裝飲片是飲片包裝發(fā)展的重要趨勢(shì)，本文模擬市售小包裝飲片劑量，對(duì)葛根飲片從包裝材料、包裝條件以及貯藏條件等方面進(jìn)行研究，并通過(guò)水分含量、浸出物含量、葛根素含量及微生物含量等構(gòu)建葛根飲片小包裝質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，為確立葛根飲片的包裝貯藏條件奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

封口機(jī)(周口佳特包裝制品有限公司)，Sartorius萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，JZX-9070MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，Sartorius萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，Raytek Raynger ST20紅外測(cè)溫儀(美國(guó)雷泰公司(raytek))，中藥粉碎機(jī)(長(zhǎng)沙旭朗粉碎機(jī)械有限公司)，50目標(biāo)準(zhǔn)篩(浙江省上虞市鑑湖儀器篩具廠)，高效液相色譜儀(Dionex ΜLtiMate3000)；PDA-3000二極管陣列紫外檢測(cè)器；Chromeleon工作站。

1.2 材料

葛根飲片購(gòu)自樟樹天齊堂藥業(yè)，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院范崔生教授鑒定為豆科葛屬多年生落葉藤本植物野葛Puerarialobata(wilId.)Ohwi的根；聚乙烯塑料袋，紙袋，鋁箔袋。水為超純水，氯化鈉-蛋白胨緩沖液，乙醇為分析純，葛根素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，甲醇為色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 葛根根飲片包裝貯藏條件

2.1.1 葛根飲片小包裝 根據(jù)2010版《藥典》中葛根項(xiàng)下關(guān)于葛根飲片用量的規(guī)定，模擬市售小包裝，每袋包裝重量選為10g。分別采用聚乙烯塑料真空Ⅰ、聚乙烯塑料非真空Ⅱ、鋁箔真空Ⅲ、鋁箔非真空Ⅳ、紙袋非真空Ⅴ進(jìn)行包裝[2]，以高溫封口機(jī)封口使密封，60Co輻照，2k Gy滅菌。

2.1.2 儲(chǔ)藏條件 中藥飲片在生產(chǎn)、流通、貯藏過(guò)程中，保存條件一般可分為常溫和低溫兩種，本課題結(jié)合實(shí)際需要，選定低溫穩(wěn)定性和常溫穩(wěn)定性兩個(gè)方面對(duì)葛根飲片進(jìn)行貯藏條件研究。

2.1.3 低溫長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)貯藏條件 不同包裝材料和包裝方法的葛根小包裝飲片放置在冰箱內(nèi)，溫度設(shè)定為2～10℃，分別于于0，1，2，4，6，9，12個(gè)月檢測(cè)水分、浸出物、葛根素含量及微生物限量。

1.2.4 常溫長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)貯藏條件 同包裝材料和包裝方法的葛根小包裝飲片放置在常溫留樣室內(nèi)，溫度設(shè)定為10～30℃，室內(nèi)具有一定的通風(fēng)、光線及防蚊、防蠅、防鼠等設(shè)施，分別于0，1，2，4，6，9，12個(gè)月檢測(cè)水分、浸出物、葛根素含量及微生物限量。

2.2 葛根飲片包裝貯藏的檢測(cè)研究[3]

2.2.1 水分測(cè)定研究 取供試品(先破碎成直徑不超過(guò)3mm的顆粒)5g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中(厚度不超過(guò)5mm)精密稱定，打開瓶蓋在105℃干燥5h，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30min，精密稱定，再在上述溫度干燥1h，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量。

2.2.2 浸出物含量測(cè)定研究 取供試品3克，精密稱定，置于200mL的錐形瓶中，精密加入30%乙醇100mL，密塞，稱定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，并用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量，得出浸出物含量。

2.2.3 葛根素含量測(cè)定研究[4]

2.2.3.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇∶水(75∶25)，檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm，柱溫：30℃，流速：1.0mL/min。

2.2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品2.5mg，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶液至刻度，搖勻，配成0.1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3.3 供試品溶液的制備 取各樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，得供試品溶液。

2.2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取上述對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2.5，7.5，12.5，17.5，22.5μL以葛根素濃度X(μL/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為Y=0.045X-0.8086(r=0.9997)。

2.2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，按照上述色譜條件連續(xù)測(cè)定5次，記錄峰面積，RSD為1.05%。

2.2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，在相同的色譜條件下，在0，6，12，18，24h分別進(jìn)樣10μL,記錄峰面積，RSD為0.91%。

2.2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品5份，按“2.2.3.3”項(xiàng)下供試品的制備方法制備，分別測(cè)定，每次進(jìn)樣品10μL，RSD為1.42%。

2.2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的樣品0.1g，精密添加一定量的葛根素對(duì)照品，按供試品的制備方法制備，依法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為99.91%，RSD為0.31%。

表1 葛根素加樣回收率試驗(yàn)

2.2.4 微生物含量測(cè)定研究 以無(wú)菌操作稱取檢樣5g，放入含45mL滅菌水的具玻塞錐形瓶中，振搖30min，即為1∶10稀釋液。用滅菌吸管吸取1∶10稀釋液10mL，注入滅菌試管中，另用1mL滅菌吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。取1∶10稀釋液1mL注入含有9mL滅菌水的試管中，另?yè)Q一支1mL滅菌吸管吹吸五次，此液為1∶100稀釋液。

按上述操作做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸管，根據(jù)對(duì)樣品的污染情況估計(jì)，選擇三個(gè)合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋液的同時(shí)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋液做2個(gè)平皿，然后將涼至45℃左右的培養(yǎng)基注入平皿中，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使之與樣液混勻，待瓊脂凝固后，倒置于25℃～28℃溫箱中，3d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5d。

計(jì)算方法：通常選擇菌落數(shù)在10～150之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，同稀釋度的兩個(gè)平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克檢樣中所含霉菌和酵母菌數(shù)。

2.3 結(jié)果

不同包裝材料、包裝方式和貯藏條件下水分、浸出物、葛根素和微生物含量結(jié)果見圖1-6。

圖1 低溫條件下葛根飲片水分含量趨勢(shì)圖

圖2 常溫條件下葛根飲片水分含量趨勢(shì)圖

從低溫及常溫條件下水分含量可以看出，紙袋包裝的葛根飲片水分含量較高，其他包裝材料及條件的葛根飲片水分含量差別不大；不同包裝貯藏條件下葛根飲片水分含量隨時(shí)間變化不明顯。

圖3 低溫條件下葛根飲片浸出物含量趨

圖4 常溫條件下葛根飲片浸出物含量趨勢(shì)圖

從低溫及常溫條件下葛根飲片浸出物含量可以看出，浸出物含量整體趨勢(shì)隨著時(shí)間變化而減少，但減少幅度不大，基本能符合2010版藥典中關(guān)于葛根飲片浸出物含量的要求。

圖5 低溫條件下葛根飲片葛根素含量趨勢(shì)圖

圖6 常溫條件下葛根飲片葛根素含量趨勢(shì)圖

從低溫及常溫條件下葛根飲片葛根素含量變化可以看出，不同包裝貯藏條件下葛根飲片中葛根素含量差別不大，其中常溫下鋁箔真空包裝含量較高，低溫下紙袋包裝含量較高；不同包裝貯藏條件下葛根飲片中葛根素含量隨時(shí)間變化不明顯。

表2 不同包裝貯藏樣品中霉菌和酵母菌量(cfu/g)

從低溫及常溫條件下葛根飲片微生物變化可以看出，葛根飲片中霉菌和酵母菌含量經(jīng)過(guò)一段時(shí)間貯藏后顯著減少。

3 小結(jié)與討論

從低溫及常溫條件下水分含量、浸出物、葛根素含量和微生物限量結(jié)果可以看出，除了紙袋包裝的葛根飲片水分含量變化較大外，其他包裝材料及條件的葛根飲片水分含量差別不大，隨時(shí)間變化不明顯；浸出物含量整體趨勢(shì)隨著時(shí)間變化而減少，但減少幅度不大，基本能符合2010版藥典中關(guān)于葛根飲片浸出物含量的要求；葛根素含量差別不大，其中常溫下鋁箔真空包裝含量較高，低溫下紙袋包裝含量較高；霉菌、酵母菌量貯藏一段時(shí)間后，飲片中微生物的量急劇減少。綜合經(jīng)濟(jì)因素考慮，選擇塑料非真空包裝、常溫貯藏可作為葛根小包裝飲片的包裝貯藏條件。

中藥小包裝飲片有利于飲片的保管、貯藏、運(yùn)輸，還能保證飲片的質(zhì)量和衛(wèi)生[5]。目前的小包裝飲片包裝材料有很多，以聚乙烯塑料使用為多.塑料透明度高，便于飲片質(zhì)量檢查及性狀鑒別，但是長(zhǎng)期存儲(chǔ)可能會(huì)與飲片成分產(chǎn)生化學(xué)性反應(yīng)，同時(shí)塑料還存在著一定的致癌、環(huán)境污染等安全隱患[6]。本課題僅針對(duì)12個(gè)月內(nèi)葛根飲片的包裝貯藏方法及進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，但對(duì)于長(zhǎng)期貯藏對(duì)其質(zhì)量的影響尚未開展研究，還有待于進(jìn)一步考察。此外，飲片生產(chǎn)企業(yè)則應(yīng)從保證飲片產(chǎn)品質(zhì)量和方便消費(fèi)者使用這兩點(diǎn)出發(fā)，根據(jù)飲片的成分、性狀、使用等多方面綜合考慮飲片包裝材料的選擇及適宜的貯藏條件，為中藥飲片小包裝的推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

[1]朱衛(wèi)星,李愛光,陳方,等.中藥包裝貯藏的研究概況[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(11):2 304-2 305.

[2]王添生,何新榮.對(duì)中藥飲片小包裝規(guī)格的探討[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2004,20(2):107-108.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典．一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[4]黃建鋒,周清,戚海英,等.廣東不同產(chǎn)地葛根中葛根素和大豆苷元的含量測(cè)定[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2013,4:013.

[5]何玉華.中藥飲片小包裝與中藥調(diào)配[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,27(4):549-550.

[6]樓步青,林華.中藥飲片小包裝的質(zhì)量控制[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(12):3 071-3 071.