不同免疫方式對仔豬免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬口蹄疫三種疫苗抗體水平的影響

胡 杰，張步嫻，屈素潔，莫勝蘭，粟艷瓊，陸文俊，施開創(chuàng)，李 軍

（廣西動物疫病預(yù)防控制中心，南寧 530001）

·簡報·

不同免疫方式對仔豬免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬口蹄疫三種疫苗抗體水平的影響

胡 杰，張步嫻，屈素潔，莫勝蘭，粟艷瓊，陸文俊，施開創(chuàng)，李 軍

（廣西動物疫病預(yù)防控制中心，南寧 530001）

采用不同的免疫方式，對38頭36～38日齡健康仔豬進行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬口蹄疫3種疫苗進行免疫，分別于免疫前（0 d）和免疫后15、30、45、60、90 d采血進行這3種疫病抗體檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)效果最好的方法是先免疫豬瘟和口蹄疫疫苗14 d后再免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗；其次是豬瘟疫苗和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗分別釋稀后混合為1針，口蹄疫疫苗另作1針同時分點注射；免疫效果最差的是高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬口蹄疫3種疫苗同時分3點注射。

免疫程序；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征；豬瘟；豬口蹄疫；抗體

豬瘟、口蹄疫、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征是近年來危害我國養(yǎng)豬業(yè)的三大主要動物疫病，被國際動物衛(wèi)生組織列為A類動物疫病，我國將其都列為一類動物疫病。長期以來，由于引種、飼養(yǎng)管理、防疫等方面不規(guī)范，許多豬場不同程度出現(xiàn)死胎、仔豬增重慢、繁殖障礙等問題，嚴重制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，免疫方式不合理是其中一個主要原因。在免疫過程中出現(xiàn)免疫副作用大，隨意制定免疫方法，或是根據(jù)國家的春秋兩防固定時間免疫等給豬場造成不應(yīng)有的損失。任宇斕等[1]用3種疫苗不同組合同時分點免疫，發(fā)現(xiàn)3種疫苗任意組合對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽性率基本沒有變化，但對豬瘟和口蹄疫效價有一定影響。張長龍等[2]采用先免疫接種豬瘟疫苗，1周后免疫接種口蹄疫和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，認為二者有明顯的協(xié)同促進作用，而3種疫苗同時分點注射免疫相互之間干擾較大，豬瘟病毒抗體產(chǎn)生時問推遲，不宜推廣使用。陶得和等[3]對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、口蹄疫疫苗同時免疫進行試驗，認為不同免疫時間對豬瘟抗體和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征抗體沒有影響，但對口蹄疫抗體有影響，即3種疫苗同時免疫效果優(yōu)于其他兩種疫苗分別組合；文萍萍等[4]進行了豬瘟脾淋苗、豬O型口蹄疫和豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗兩兩聯(lián)合應(yīng)用的免疫效果進行了觀察，發(fā)現(xiàn)豬瘟和豬口蹄疫疫苗同時免疫效果較好，豬口蹄疫和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗同時免疫效果較差，豬瘟疫苗和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗同時免疫效果不明顯。以上說法差異較大，到底哪種方式最合理，沒有可比性。根據(jù)國家對這三大類疫病的強制免疫的要求，從節(jié)約人力、物力、時間，最佳防控效果等多方面考慮，本研究結(jié)合廣西當前豬場3種疫苗的種類以及常見的幾種免疫方式，制定了不同的免疫方案進行跟蹤調(diào)查，力求找到最佳免疫方式，為當?shù)仞B(yǎng)殖企業(yè)和村級防治員的免疫防控工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 口蹄疫O型滅活疫苗（OMYA98/BY/2010株）購于中農(nóng)威特生物科技股份有限公司，批號H120539J；政府采購細胞源豬瘟疫苗購于南京天邦生物科技有限公司，批號：129107；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株）購于山西隆克爾生物股份有限公司，批號：3212012。

1.1.2 實驗豬 選擇36～38日齡臨床健康，未免疫仔豬，經(jīng)采血檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）、豬口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）、豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）抗體全部呈陰性的38頭仔豬做試驗。

1.1.3 檢測試劑 豬瘟正向間接血凝診斷抗原購自于蘭州獸醫(yī)研究所，批號：20121014；豬O型口蹄疫正向間接血凝診斷抗原購自于蘭州獸醫(yī)研究所，批號：20121014；豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒由北京天之泰生物有限公司提供，由法國LSI公司生產(chǎn)，批號：5-VETPRA-030。

1.1.4 主要儀器 酶標儀為奧地利Sunrise公司生產(chǎn)；單道微量加樣器10～100 μL、多道微量加樣器5～50 μL由德國Tranferspette公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 免疫分組及免疫方法 將38頭實驗豬隨機分成4組。對照組（8頭豬）：簡稱“兩針兩苗組”，使用口蹄疫O型滅活疫苗和細胞源豬瘟疫苗同時分點免疫注射，每頭豬注射1 mL（頭份），不免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗。試驗1組（10頭豬）：簡稱“兩針三苗組”，將豬瘟疫苗和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗分別釋稀后混合為1針，口蹄疫O型滅活疫苗作為1針，免疫劑量為1 mL（頭份）/頭。試驗2組（10頭豬）：簡稱“三針三苗同組”，使用口蹄疫O型滅活疫苗、細胞源豬瘟疫苗和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗同時分點免疫注射，每頭豬注射1 mL（頭份）。試驗3組（10頭豬）：簡稱“三針三苗間組”，先用口蹄疫O型滅活疫苗和政府采購專用細胞源豬瘟疫苗同時分點免疫注射，間隔14 d后，再用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗免疫1次，免疫劑量為1 mL（頭份）/頭。所有豬在免疫前（0 d）及免疫后的15、30、45、60、90 d分別經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，并于-20℃保存?zhèn)錂z。

1.2.2 檢測方法 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征抗體采用ELISA方法檢測，具體操作按試劑盒說明書操作；判斷標準：IRPC≤20，被檢血清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征抗體陰性，IRPC＞20，被檢血清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽性。豬瘟和口蹄疫抗體檢測均采用正向間接血凝試驗檢測，判斷標準：抗體效價≥1:32，判定被檢血清抗體陽性，抗體效價＜1:32，判定被檢血清抗體陰性。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理及分析方法 利用SPSS軟件進行統(tǒng)計學(xué)方差分析和變異系數(shù)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 免疫后不同時間CSFV、FMDV及HP-PRRSV抗體陽性率從圖1A中可以看出，4個組在免疫后，豬瘟病毒抗體迅速上升，對照組和試驗3組在免疫后15 d即達到70%以上陽性率，試驗1組和2組在免疫后30 d才達到70%以上陽性率；免疫后90 d，試驗1和2組已下降到70%以下，分別是50%和60%，對照組CSFV陽性率仍有87.5%，而試驗3組抗體陽性率仍保持90%抗體陽性率；3個試驗組中試驗3組抗體陽性率雖然比試驗1和2組產(chǎn)生慢，持續(xù)時間卻最長，說明試驗3組免疫效果優(yōu)于對照組和試驗1、2組。對照組抗體持續(xù)時間比試驗1組和2組長，說明在3種不同免疫方式中，HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的豬瘟疫苗的效果。

圖1 免疫后不同時間CSFV、FMDV和PRRSV抗體陽性率變化規(guī)律Fig.1 The postive rates of CSFV,FMDV and PRRSV antibody at different time post vaccination

從圖1B看，4個組在免疫FMD疫苗后15 d均達到70 %以上其抗體陽性率，一直持續(xù)到免疫45 d，4組差異都不明顯，到免疫后60 d逐漸分化，而到免疫后90 d，只有對照組仍保持在70%以上抗體合格率，其余3個試驗組均已下降到70%以下抗體陽性率，并且3個試驗組抗體陽性率和持續(xù)時間均低于對照組，提示HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的FMD效果。而在3個試驗組中試驗3組抗體持續(xù)期和陽性率稍高于試驗1組、2組。

從圖1C看，在免疫HP-PRRS疫苗前其抗體均為陰性，3個試驗組在免疫后15 d抗體合格率逐步提高，30 d全部達到70%以上陽性率，并且到免疫后90 d，所有組抗體合格率仍保持在70%以上。試驗3組的陽性率均稍高于試驗1組、2組，抗體陽性率從高到低依次是試驗3組、試驗1組和試驗2組。表明試驗3組的免疫方法優(yōu)于試驗1組、試驗2組。

2.2 免疫后不同時間CSFV抗體和FMDV抗體上升速度變化從圖2A看，免疫后15 d 4個組豬瘟病毒抗體均開始上升，但對照組和試驗3組上升速度較快，免疫后30 d開始對照組、試驗1組抗體上升速度加快，45 d時對照組、試驗1組抗體又迅速下降，而試驗3組卻還在上升，一直延續(xù)到60 d，60 d以后所有組CSFV抗體上升速度均減慢。各組平均上升速度從高到低依次為對照組＞試驗3組＞試驗1組＞試驗2組，平均上升值分別為2.37 log2，2.14 log2，1.49 log2和1.38 log2。從抗體提升速度看，對照組高于試驗3組，提示HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的豬瘟疫苗免疫效果。這一結(jié)果陶得和等[3]研究結(jié)果有一定差異，后者認為不同免疫方法對豬瘟抗體產(chǎn)生時間和水平無明顯影響。

圖2 免疫后不同時間CSFV和FMDV抗體上升速度變化規(guī)律Fig.2 The increasing rates of antibodies of CSFV,FMDV at different time post vaccination

從圖2B看，免疫后15 d 4個組口蹄疫病毒抗體均上升速度較快，一直持續(xù)到45 d左右，又開始迅速下降。免疫后90 d時試驗1組和試驗2組又回到免疫前狀況。4個組抗體上升速度從高到低依次為對照組＞試驗1組＞試驗3組＞試驗2組，平均提升值分別為2.25 log2，1.92 log2，1.88 log2和1.36 log2。從抗體提升速度看，提示HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的FMD疫苗免疫效果。

CSFV、FMDV、PRRSV通過不同方式免疫仔豬后，不同時間所測抗體陽性率見表1。

2.3 方差分析、變異系數(shù)分析結(jié)果方差分析顯示在免疫后30、45 d時各組CSFV抗體之間差異具有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），60 d各組之間差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其余時間節(jié)點（0、15、90 d）各組之間差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。免疫后45 d試驗3組與試驗1組之間差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（見表2、3），但試驗2組和試驗3組之間差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。免疫后0～15d時各組差異還不顯著，30～45 d時差異具有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），60 d差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），到90 d時差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間差異符合正態(tài)分布的規(guī)律，其中試驗3組與試驗1組之間差異顯著（P＜0.05），但試驗2和試驗3組之間差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），表明試驗3組的免疫方法優(yōu)于試驗1組、試驗2組?？谔阋呖贵w各組之間在所有免疫期間差異均不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

從變異系數(shù)看（見表2、3），CSFV體的4個組從低到高依次是對照組＜試驗3組＜試驗1組＜試驗2組。對照組高于3個試驗組，提示HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的CSF疫苗免疫效果。FMDV抗體離散度最低，從低到高依次是試驗1組＜試驗3組＜對照組＜試驗2組。

2.4 在實際生產(chǎn)中，豬群群體免疫要達到70%以上陽性率才達到免疫合格。變異系數(shù)越小，群體抗體均衡度越高；離散度越小，疫苗免疫的效果也越好；免疫持續(xù)期越長，疫苗免疫應(yīng)答也越好。綜合多方面因素，試驗3組在免疫抗體陽性率、免疫持續(xù)期、離散度、免疫應(yīng)答多方面均優(yōu)于試驗1組、試驗2組，試驗1組又優(yōu)于試驗2組，即最好的免疫方式是先免疫CSF和FMD疫苗14 d后再免疫HP-PRRS疫苗；其次是CSF疫苗和HP-PRRS疫苗分別釋稀后混合為1針，口蹄疫疫苗另作1針同時分點注射；免疫效果最差的是HP-PRRS、CSF、FMD 3種疫苗3種疫苗同時分3點注射，但3種疫苗不同方式免疫時，HP-PRRS疫苗可能會影響與其同時免疫的CSF疫苗和FMD疫苗的免疫效果，這一結(jié)果與張長龍等[1]一致，與任宇斕等[2]結(jié)論存在差異，但由于所用疫苗不同，無法同時比較，而CSF、FMD疫苗單獨免疫效果也較好，與文萍萍等[4]結(jié)果一致。

表1 不同免疫方式豬瘟病毒、口蹄疫病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性率匯總Table 1 Summary of the positive rates of CSFV,FMDV and PRRSV antibody in different vaccination protocol

表2 豬瘟病毒抗體檢測結(jié)果Table 2 The detection results of CSFV antibody levels

表3 豬口蹄疫病毒抗體檢測結(jié)果Table 3 The detection results of FMDV antibody levels

[1] 張長龍,嚴寶英,賈文孝,等. 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗有效免疫試驗初探[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展,2009,30(7): 101-103.

[2] 任宇斕,于厚軍,蔣文生,等. 豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征三種疫苗不同組合同時分點免疫效果觀察與分析[J]. 中國動物檢疫,2011,28(5): 67-71.

[3] 陶得和,漆晶晶,白文麗,等. 高致病性藍耳病疫苗、豬瘟、口蹄疫疫苗同時免疫試驗報告[J]. 河南畜牧獸醫(yī),2010,31(6): 6-8.

[4] 文萍萍,陳代平,李金海,等. 豬瘟脾淋苗、豬O型口蹄疫和豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗兩兩聯(lián)合應(yīng)用的免疫效果觀察[J]. 四川畜牧獸醫(yī),2010,231(1): 21-22,24.

EFFECT OF DIFFERENT VACCINATION PROTOCOLS ON ANTIBODY LEVELS OF HIGHLY PATHOGENIC PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME,CLASSICAL SWINE FEVER AND FOOT AND MOUTH DISEASE VACCINES IN PIGLETS

HU Jie,ZHANG Bu-xian,QU Su-jie,MO Sheng-lan,SU Yan-qiong,LU Wen-jun,SHI Kai-chuang,LI Jun
(Guangxi Animal Disease Prevention and Control Center,Nanning 530001,China)

Different vaccination protocols were taken to vaccinate thirty-eight 36-38-day-old healthy piglets with highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS),classical swine fever (CSF) and foot and mouth disease (FMD) vaccines,respectively. The antibody levels of CSFV,FMDV and PRRSV were tested on day 0,15,30,45,60 and 90 post vaccination. The highest antibody levels were detected when CSF and FMD vaccines were used fi rst followed by HP-PRRS vaccine 14 days later. The second choice was that CSF and HP-PRRS vaccines were mixed in one shot on one side of piglets and at the same time FMD vaccine was used on other side. The lowest antibody levels were detected when HP-PRRS,FMD and CSF vaccines were injected at the same time at three separate shots.

Vaccination protocol; highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS); classical swine fever (CSF); foot and mouth disease (FMD); antibody

S852.659.6

B

1674-6422（2014）05-0061-07

2014-03-07

廣西自然科學(xué)基金項目（桂科青0832057）；廣西水產(chǎn)畜牧科技資助項目（桂漁牧科1304559）

胡杰，女，博士，主要從事動物傳染病工作

施開創(chuàng)，E-mail：shiraichuang@126.com