HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定心腦舒口服液中 7 種皂苷類成分

林 林， 劉廣楨， 劉洪超， 徐麗華

（山東省食品藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101）

［質(zhì) 量］

HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定心腦舒口服液中 7 種皂苷類成分

林 林， 劉廣楨， 劉洪超， 徐麗華

（山東省食品藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101）

目的 建立同時(shí)測(cè)定心腦舒口服液 （人參、 黃芪、 五味子、 黨參、 麥冬） 中人參皂苷 Rg； 人參皂苷 Re； 人參皂苷 Rf； 人參皂苷 Rb1； 人參皂苷 Rb2； 人參皂苷 Rb3； 黃芪甲苷的方法。 方法 采用 HPLC-ELSD法； Kromasil C18色譜柱； 乙腈-水為流動(dòng)相； 體積流量為 1mL/min。 結(jié)果 根據(jù)回歸方程， 7 種成分人參皂苷 Rg1、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf、 人參皂苷 Rb1、 人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3、 黃芪甲苷分別在 0.202 8 ～2.028 μg（ r=1.00）， 0.378 8 ～3.788 μg（r=1.00）， 1.686 2 ～16.862 μg（r=1.00）， 0.843 4 ～8.434 μg（r=1.00）， 0.204 8 ～2.048 μg（r= 1.00）， 0.181 6 ～1.816 μg（r=1.00） 和 0.116 6 ～1.166 μg（r=1.00） 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系， 平均回收率分別為 98.1% （RSD為 1.1%）， 98.1% （RSD為 0.87%）， 98.5% （RSD為 0.58%），98.2% （RSD為 0.58%），98.6%（RSD為 0.49%），98.7% （RSD為 1.1%）， 98.5% （RSD為 0.42%）。 結(jié)論 該方法多種成分同時(shí)測(cè)定， 操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于心腦舒口服液的質(zhì)量控制。

心腦舒口服液； 人參皂苷 Rg1； 人參皂苷 Re； 人參皂苷 Rf； 人參皂苷 Rb1； 人參皂苷 Rb2； 人參皂苷 Rb3；黃芪甲苷

心腦舒口服液由人參、黃芪、五味子、黨參、麥冬五味藥組成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰的作用，主要用于氣陰兩虛而致的頭暈?zāi)垦?，失眠健忘，心悸怔仲，短氣肢倦，自汗盜汗，不耐煩勞等癥?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》 中藥成方制劑第 17冊(cè)，僅有人參中人參二醇、人參三醇的薄層鑒別項(xiàng)。為進(jìn)一步提高該制劑的質(zhì)量控制，本實(shí)驗(yàn)基于中藥配伍君臣佐使的基本原則，參考相關(guān)文獻(xiàn)［1-15］， 建立了心腦舒口服液中主要藥味人參、 黃芪中 7 種皂苷類成分人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf和黃芪甲苷的同時(shí)測(cè)定方法。 通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為全面控制心腦舒口服液的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高效液 相色譜 儀 （ 四元梯 度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、 Agilent色譜工作站）， Mettler AE240 電子天平 （ 瑞 士 梅 特勒公司）； 黃芪甲苷對(duì)照品 （批號(hào) 110781-200613）、人參皂苷 Rg1對(duì)照品 （ 批號(hào) 110703-200424 ）、 人參皂苷 Rb1對(duì)照品 （批號(hào) 110704-200420）、 人參皂苷 Rb2對(duì)照品 （ 批號(hào) 111715-200501）、人參皂苷Rb3對(duì)照品 （批號(hào) 111686-200501）、 人參皂苷 Re對(duì)照品 （批號(hào) 110754-200421）、 人參皂苷 Rf對(duì)照品 （批號(hào) 111719-200502） 均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純；其他試劑為分析純。心腦舒 口 服 液 （ 批 號(hào) 分 別 為： 120301、 120302、120303） 由榮昌制藥 （淄博） 有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條 件 Kromasil C18色譜 柱 （ 250 mm× 4.6 mm， 5 μm）； 以乙腈為流動(dòng)相 A， 水為流動(dòng)相B， 梯度洗脫 （ 表 1）； 體積流量 1 mL/min， 柱溫35℃。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution mode ofmobile Phase

2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取人參皂苷Rg1、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf、 人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3和黃芪甲苷對(duì)照品適量， 加甲醇制成質(zhì)量濃度 為 0.101 4、 0.189 4、 0.843 1、 0.421 7、 0.102 4、 0.090 8、 0.058 3 mg/mL的混合溶液， 作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品適量， 混勻，精密量取 10 mL， 置分液漏斗中， 加水 10 mL，用正丁醇振搖提取 4 次， 每次 20 mL， 合并正丁醇提取液， 用濃氨試液洗滌 2 次， 每次 30 m L， 棄去氨洗液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中， 加甲醇至刻度， 搖勻， 濾過(guò)，即得。

2.4 陰性溶液的制備 分別取不加黃芪、 人參的空白樣品，按供試品溶液的制備項(xiàng)下的方法，制得陰性對(duì)照溶液，即得。

2.5 方法的專屬性考察 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液、 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各 5 μL， 按“2.1” 項(xiàng)色譜條件分析， 結(jié)果見圖 1。 人參皂苷Rg1、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf、 人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3和黃芪甲苷與其相鄰色譜峰的分離度均大于 1.5， 拖尾因子在 0.90 ～1.10， 理論板數(shù)以各峰計(jì)均在 5 000 以上。陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上未見色譜峰，心腦舒口服液中其他組分不干擾7種成分的測(cè)定，方法專屬性良好。

2.6 線性關(guān)系考察 精密量取混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 2、 5、 10、 15、 20 μL， 按 “2.1” 項(xiàng)色譜條件分析， 以進(jìn)樣量 （C） 的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)， 峰面積 （A） 的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)， 進(jìn)行線性回歸， 得到回歸方程。 人參皂苷 Rg1回歸方程為 ln A=1.23 ln C+5.64 （r=1.00）， 人參皂苷 Re回歸方程為ln A=1.61 ln C+4.56 （ r=1.00）， 人參皂苷 Rf回歸方程為 ln A=1.27 ln C+5.51 （ r=1.00）， 人參皂苷 Rb1回歸方程為 ln A=1.52 ln C+4.71 （ r= 1.00）， 人參皂苷 Rb2回歸方程為 ln A=1.21 ln C+ 6.34 （r=1.00）， 人參皂苷 Rb3回歸方程為 ln A= 1.20 ln C+6.44 （r=1.00）， 黃芪甲苷回歸方程為ln A=1.24 ln C+6.92 （r=1.00）。 結(jié)果表明人參皂苷 Rg1、 人 參 皂 苷 Re、 人 參 皂 苷 Rf、 人 參 皂 苷Rb1、 人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3和黃芪甲苷分別在 0.202 8 ～2.028 μg， 0.378 8 ～3.788 μg，1.686 2 ～16.862 μg， 0.843 4 ～ 8.434 μg，0.204 8 ～2.048 μg， 0.181 6 ～ 1.816 μg 和0.116 6 ～1.166 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液， 按 “2.1”項(xiàng)色譜條件分析， 連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定， 每次 5 μL，測(cè)定峰面積值， 結(jié)果人參皂苷 Rg1、 人參皂苷 Re、人參皂苷 Rf、 人參皂苷 Rb1、 人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3和 黃 芪 甲 苷的 RSD值分別為 0.86%、1.2%、 0.76%、 0.84%、 0.59%、 0.87%、1.2%， 表明精密度良好。

1.人參皂苷 Rg12.人參皂苷 Re 3.人參皂苷 Rf 4.人參皂苷 Rb15.人參皂苷 Rb26.人參皂苷 Rb37.黃芪甲苷1.ginsenoside Rg12.ginsenoside Re 3.ginsenoside Rf 4.ginsenoside Rb15.ginsenoside Rb26.ginsenoside Rb37.astragaloside

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 按 “2.1”項(xiàng)色譜條件，分別于 0、 3、6、9、12、 15 h 測(cè)定，結(jié)果人參皂苷 Rg1、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf、人參皂苷 Rb1、 人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3和黃芪甲苷的 RSD值分別為 0.78%、 1.4%、 0.86%、0.59%、 0.79%、0.74%、 0.78%，說(shuō)明供試品中的7種指標(biāo)成分在室溫條件下15 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批心腦舒口服液 （批號(hào)20120301）， 平行制備 6 份供試品溶液， 按 “2.1”項(xiàng)色譜條件分析， 結(jié)果人參皂苷 Rg1平均質(zhì)量濃度為 0.090 4 mg/mL， RSD為 0.76%； 人參皂苷 Re平均質(zhì)量濃度為 0.204 3 mg/mL， RSD為 1.1%；人參皂苷 Rf平均質(zhì)量濃度為 0.801 7 mg/mL， RSD為 0.71%； 人參皂苷 Rb1平均質(zhì)量濃度為 0.428 6 mg/mL， RSD為 1.0%； 人參皂苷 Rb2平均質(zhì)量濃度為 0.098 8 mg/mL， RSD為0.69%； 人參皂苷 Rb3平均質(zhì)量濃度為 0.098 1 mg/mL， RSD為 0.84%；黃芪甲苷平均質(zhì)量濃度為 0.062 9 mg/mL， RSD為0.89%。 結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收試驗(yàn) 取心腦舒口服液 （批號(hào)20120301） 適量， 精密量取 6 份， 每份 5 mL， 置具塞錐形瓶中，分別精密加入 “2.2” 項(xiàng)下的對(duì)照品溶液 5 m L（含人參皂苷 Rg10.507 0 mg、 人參皂苷 Re 0.947 0 mg、人參皂苷 Rf 4.215 5 mg、 人參皂苷 Rb12.108 5 mg、 人參皂苷 Rb20.512 0 mg、人參皂苷 Rb30.454 0 mg和黃芪甲苷 0.291 5mg），制備供試品溶液， 進(jìn)樣 5 μL， 按 “2.1” 項(xiàng)色譜條件分析。 回收率分別為 98.1%、 98.1%、 98.5%、98.2%、 98.6%、 98.7%、 98.5%， RSD 分 別 為1.1%、 0.87%、 0.58%、 0.58%、 0.49%、1.1%、 0.42%， 結(jié)果表明該方法的回收率良好。結(jié)果見表2。

2.11 樣品的測(cè)定 分別取 3 批心腦舒口服液樣品制成的供試品溶液各5 μL， 以及 “2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液 5 μL、10 μL、 15 μL注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)三點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 樣品測(cè)定結(jié)果顯示不同批次樣品中各待測(cè)成分的量存在較大差異，這可能與藥材質(zhì)量存在較大聯(lián)系，進(jìn)一步提示測(cè)定該制劑中7種成分的必要性，對(duì)保證制劑的質(zhì)量和臨床療效的穩(wěn)定可靠有著重要影響。

表 2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.2 Results of recovery tests（n=6）

表3 心腦舒口服液中有效成分的測(cè)定結(jié)果 （n=3）Tab.3 Determ ination of active com Ponents in Xinnaoshu O ral Liquid（ n=3）

3.2 目前的文獻(xiàn)報(bào)道中僅有心腦舒口服液中人參皂苷 Rg1與人參皂苷 Re的定量測(cè)定， 本實(shí)驗(yàn)將心腦舒口服液中人參中人參皂苷 Rg1、 人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rb2、 人參皂苷 Rb3、 人參皂苷 Re、 人參皂苷 Rf等 6 種成分和黃芪中黃芪甲苷共7 種成分的量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。

3.3 在色譜條件的選擇中， 由于使用蒸發(fā)光檢測(cè)器，不能使用非揮發(fā)性的試劑，參考相關(guān)文獻(xiàn)，可選擇的流動(dòng)相只有甲醇-水、 乙腈-水兩種， 綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 以乙腈-水為流動(dòng)相， 色譜行為更理想。

3.4 在供試品溶液的制備過(guò)程中， 曾考察過(guò)直接加水飽和的正丁醇提取與加水稀釋后用水飽和正丁醇提取，由于本品含糖量較高，加水稀釋后有利于萃取分層。

3.5 在供試品溶液的制備過(guò)程中， 正丁醇液的洗滌曾考察過(guò)濃氨試液、 氨試液以及1%氫氧化鈉溶液，由于黃芪甲苷在堿性環(huán)境中存在轉(zhuǎn)化的過(guò)程，綜合試驗(yàn)結(jié)果以及操作過(guò)程，最后選擇以濃氨試液作為洗滌溶劑。

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Determ ination of seven saPonins in Xinnaoshu Oral Liquid by HPLC-ELSD

LIN Lin， LIU Guang-zhen， LIU Hong-chao， XU Li-hua
（Shandong Provincial Institute for Food and Drug Control， Jinan 250101， China）

AIM To develop amethod for determining seven kinds of saponins in Xinnaoshu Oral Liquid （ Astragali Radix， Ginseng Radix et Rhizoma， Schisandrae Chinensis Fructus， Codonopsis Radix，Ophiopogonis Radix）.METHODS The quantative analysiswas carried outon a column of Kromasil C18by HPLC-ELSD， using a mobile phase of acetonitrile-water under a flow rate of 1 m L/min.RESULTS The linear ranges of ginsenoside Rg1， ginsenoside Re， ginsenoside Rf， ginsenoside Rb1， ginsenoside Rb2， ginsenoside Rb3and astragaloside fell within the ranges of 0.202 8-2.028 μg， 0.378 8-3.788 μg， 1.686 2-16.862 μg， 0.843 4-8.434 μg， 0.204 8-2.048 μg， 0.181 6-1.816 μg， 0.116 6-1.166 μg，respectively， The seven components showed good linear correlations（r=1.00， r=1.00， r=1.00， r=1.00， r=1.00， r=1.00， r=1.00） .The recoveries were 98.1%for ginsenoside Rg1， 98.1%for ginsenoside Re， 98.5%for ginsenoside Rf， 98.2%for ginsenoside Rb1， 98.6%for ginsenoside Rb2， 98.7%for ginsenoside Rb3， and 98.5%for astragaloside， respectively.The relative standard deviationswere 1.1%，0.87%， 0.58%， 0.58%， 0.49%， 1.1%， 0.42%，respectively（n=6 ）.CONCLUSION Thismethod is simple， accurate， reproducible and convenient for the quality control over Xinnaoshu Oral Liquid.

Xinnaoshu Oral Liquid； ginsenoside Rg1； ginsenoside Re；ginsenoside Rf；ginsenoside Rb1；ginsenoside Rb2； ginsenoside Rb3； astragaloside

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0090-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.022

2013-03-18

基鑫項(xiàng)目： 2013 年山東省自然科學(xué)基金 （ZR2013HM074）

林 林 （1980—） ， 女， 主管藥師， 碩士， 研究方向： 中藥分析。 Tel（0531） 81216523， E-mail： linlinsfda@163.com