丹參減壓與常壓提取的水提液的物理性質(zhì)比較

楊秀梅， 黃 娟， 韓 麗*， 伍振峰，2， 張 超， 楊 明，2

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地， 四川 成都 611137； 2.江西中醫(yī)學(xué)院 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江西 南昌 330004）

丹參減壓與常壓提取的水提液的物理性質(zhì)比較

楊秀梅1， 黃 娟1， 韓 麗1*， 伍振峰1，2， 張 超1， 楊 明1，2

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地， 四川 成都 611137； 2.江西中醫(yī)學(xué)院 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江西 南昌 330004）

目的 比較丹參減壓水提液與常壓水提液的物理性質(zhì)及丹酚酸B量。方法 分別測定兩種水提液的表面張力、電導(dǎo)率、 Zeta電位、 pH值、 溶液中物質(zhì)的粒徑、 丹酚酸 B量， 以及干膏收率的大小， 并進(jìn)行比較。 結(jié)果 除導(dǎo)電率外，其余參數(shù)均具有顯著性差異。減壓提取液表面張力更高，表明減壓提取出的總成分較常壓提取少，且干膏收率減壓小于常壓， 說明減壓提取出的雜質(zhì)較常壓少；pH值減壓小于常壓， 丹酚酸 B量減壓高于常壓， 說明減壓提取出了更多的丹酚酸 B； 減壓提取液的 Zeta電位較低， 其溶液中物質(zhì)粒徑較大， 具體原因有待進(jìn)一步研究。 結(jié)論 減壓提取更適宜于丹參水溶性成分丹酚酸B的提取。

丹參； 減壓提??； 丹酚酸B； 物理性質(zhì)

丹 參 為 唇 形 科 植 物 丹 參 Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根莖， 味辛、 苦， 性微寒， 歸心、肝經(jīng)。為臨床常用中藥，具有活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神等功效。其有效成分主要分為水溶性酚酸類和脂溶性二萜醌類［1］。 而水溶性酚酸類中含量最高的是丹酚酸 B，其對心血管疾病有較強(qiáng)的藥理作用［2］。 但是丹酚酸 B為熱敏性成分［3］， 傳統(tǒng)的常壓回流提取對其破壞較大，因此低溫動(dòng)態(tài)的減壓回流提取對于丹參水溶性成分丹酚酸 B的提取具有明 顯優(yōu)勢［4-5］。經(jīng)過前期實(shí)驗(yàn)，利用正交設(shè)計(jì)篩選出減壓提取的最佳工藝為70 ℃下， 加12 倍量水，回流提取3 次， 每次2 h， 以此作為本實(shí)驗(yàn)樣品溶液的制備工藝。 本實(shí)驗(yàn)從水提液的 表 面 張 力、 電導(dǎo) 率、 Zeta電 位、pH值、 提取液中物質(zhì)粒徑等方面比較丹參減壓提取與常壓提取水提液物理性質(zhì)的差異，結(jié)合兩種水提液中丹酚酸B含有量和干膏收率，為丹參水溶性成分丹酚酸B的減壓提取工藝作進(jìn)一步分析。

1 儀器與材料

OCAT21 表面 /界 面張力 儀 （ 德國 Dataphysics公司）； PHS-3C精密 PH計(jì)； Zeta電位儀； Malvern納米粒度儀 （型號 Nano-ZS）； 島津 LC-10A高效液相色譜儀； 丹參藥材 （購于四川科倫天然藥業(yè)有限公司， 批號 111108）， 丹酚酸 B對照品 （中國藥品生物制品檢定所， 批號 111562-200605）； 甲醇（色譜純）、 乙腈 （色譜純） 等。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 減壓提取液的制備 稱取丹參飲片 30 g，加12 倍量水， 于 70 ℃下減壓回流提取3 次， 每次2 h，過濾得丹參減壓提取水溶液。

2.1.2 常壓提取液的制備 稱取丹參飲片 30 g，加12 倍量水， 常壓回流提取 3 次， 每次2 h， 過濾得丹參常壓提取水溶液。

2.1.3 對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸 B對照品14.08 mg置 10 mL量瓶中，75%甲醇溶液定容， 搖勻， 作為貯備液； 精密量取 1 m L于 10 mL量瓶中， 75%甲醇溶液定容， 搖勻， 即得 0.140 8 mg/mL丹酚酸 B對照品溶液。

2.1.4 丹酚酸 B測定供試品溶液的制備 精密吸取提取液 1 mL于 25 mL量瓶中，75%甲醇溶液定容， 搖勻， 0.45 μm微孔濾膜濾過， 取續(xù)濾液即得。

2.2 丹參提取液表面張力的測定 采用 OCAT21表面/界面張力儀測定丹參常壓與減壓提取液的表面張力， 各提取液平行測定 3 次， 運(yùn)用 SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)對比分析，測定結(jié)果見表1。

表1 丹參常壓提取液與減壓提取液的表面張力測定Tab.1 Sur face tension of Danshen vacuum extract and atmosPheric extract

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，兩組數(shù)據(jù)方差不齊，雙側(cè)檢驗(yàn) P=0.027， P＜0.05， 常壓提取液與減壓提取液的表面張力有顯著性差異，減壓提取液表面張力顯著大于常壓提取液表面張力。

2.3 丹參提取液電導(dǎo)率的測定 采用 OCAT21 表面/界面張力儀測定丹參常壓與減壓提取液的電導(dǎo)率， 各提取液平行測定 3 次， 運(yùn)用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對比分析，測定結(jié)果見表2。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，兩組數(shù)據(jù)方差齊，雙側(cè)檢驗(yàn)P= 0.190， P＞0.05， 表明常壓提取液與減壓提取液電導(dǎo)率沒有顯著差異。

2.4 丹參提取液 pH值測定 采用 pHS-3C精密pH計(jì)測定丹參常壓與減壓提取液的 pH， 各提取液平行測定 3 次， 運(yùn)用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)對比分析，測定結(jié)果見表3。

表2 丹參常壓提取液與減壓提取液的電導(dǎo)率測定Tab.2 Conductivity of Danshen vacuum extract and atmosPheric extract

表 3 丹參常壓提取液與減壓提取液的 PH測定Tab.3 PH value of Danshen vacuum extract and atmos-Pheric extract

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，兩組數(shù)據(jù)方差齊，雙側(cè)檢驗(yàn)P=0.000， P＜0.05， 兩者有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 減壓提取液pH值顯著低于常壓提取液。

2.5 丹參提取液 Zeta電位的測定 采用 Zeta電位儀測定丹參常壓與減壓提取液 Zeta電位， 各提取液平行測定 3 次， 運(yùn)用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)對比分析， 測定結(jié)果如表4。

表 4 丹參常壓提取液與減壓提取液的 Zeta 電位測定Tab.4 Zeta Poten tial of Danshen vacuum extract and atmosPheric extract

統(tǒng)計(jì)分析顯示，兩組數(shù)據(jù)方差齊，雙側(cè)檢驗(yàn)P=0.008， P＜0.05， 兩者具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 減壓提取液 Zeta電位絕對值低于常壓提取液Zeta電位絕對值。

2.6 丹參提取液中物質(zhì)的粒徑的測定 采用 Malvern 納米粒度儀測定丹參常壓與減壓提取液中物質(zhì)的粒徑， 各提取液平行測定 3 次， 運(yùn)用 SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)對比分析， 測定結(jié)果見表5。

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，兩組數(shù)據(jù)方差齊，雙側(cè)檢驗(yàn)P=0.000， P＜0.05， 兩者有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 減壓提取液納米粒徑平均值顯著大于常壓提取液納米粒徑平均值。由光強(qiáng)分布圖可知，常壓提取液粒徑分布在 400 ～800 nm， 減壓提取液 粒 徑 分 布 在2 000 ～6 000 nm， 減壓提取液納米粒徑遠(yuǎn)大于常壓提取液。

表5 丹參常壓提取液與減壓提取液的粒徑測定Tab.5 Particle size of Danshen vacuum extract and atmos-Pheric extract

2.7 丹參提取液中丹酚酸 B和干膏率的測定

2.7.1 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，安捷倫 ODS （250 mm ×4.6 mm），5 μm； 乙 腈-0.5%磷酸水 （28 ∶72） 為流動(dòng)相， 檢測波長286 nm， 體積流量 1.0 mL/min； 進(jìn)樣量 1 μL； 柱溫30 ℃。

2.7.2 干膏收率測定 各取丹參減壓和常壓水提液 50 mL于恒重的蒸發(fā)皿中， 水浴加熱揮干， 置105 ℃烘箱中干燥并恒重， 冷卻至室溫， 稱重并計(jì)算干膏收率。

平行制備常壓和減壓提取液各3份，測定其結(jié)果如表6。

表6 丹參常壓提取液與減壓提取液的丹酚酸 B及干膏收率測定 （n=3）Tab.6 Salvianolic acid B and rate of dry extractof Danshen vacuum extract and atmosPheric extract（ n= 3）

結(jié)果表明，減壓提取水溶液中丹酚酸B的量明顯高于常壓提取水溶液，且減壓提取干膏收率相對較低。說明減壓提取對丹酚酸B的破壞降低，此外還減少了一些雜質(zhì)的溶出。

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明減壓提取液與常壓提取液的表面張力、 Zeta電位、 pH值、 粒徑方面均有顯著性差異，且減壓提取液中丹酚酸B的量更高，干膏收率較低。表面張力是液體重要的物理性質(zhì)，純水的表面張力為 72.8 mN/m （20 ℃）［6］， 含有機(jī)物的水溶液其表面張力隨著有機(jī)物的濃度的增大而降低。丹參減壓提取液的表面張力高于常壓提取液的表面張力，說明減壓提取出的總成分少于常壓提取出的總成分。而減壓提取的干膏收率小于常壓提取，表明減壓提取的雜質(zhì)少于常壓提取。原因在于減壓提取溫度相對較低，能降低一些大分子雜質(zhì)如淀粉、 鞣質(zhì)、 黏液 質(zhì)等的 溶出［7］。 然而， 減壓提取液 pH值小于常壓提取液 pH值， 說明減壓提取液的酸性更強(qiáng)，即酚酸性成分含有量更高。經(jīng)定量測定發(fā)現(xiàn)，提取液中丹酚酸B的含有量減壓提取高于常壓提取，說明減壓提取對熱敏性的丹酚酸B的破壞較常壓小。綜上，減壓提取更適宜于水溶性丹酚酸B的提取。

Zeta電位是表征膠體分散系穩(wěn)定性的重要指標(biāo)，溶液中物質(zhì)的粒徑大小是分散系分類的依據(jù)［8］， 導(dǎo)電 率反應(yīng)了提 取 液 中離子濃度 的 大 小。中藥提取液是真溶液、膠體溶液、混懸液等多種分散體系的混合體系，成分十分復(fù)雜。因此本實(shí)驗(yàn)僅對 Zeta電位、 溶液中物質(zhì)的粒徑和導(dǎo)電率作為物理指標(biāo)進(jìn)行測定， 結(jié)果顯示兩種提取液的 Zeta電位和溶液中物質(zhì)粒徑均具有顯著性差異 （P＜0.05）， 導(dǎo)電率無顯著性差異 （P＞0.05）。 但是這些物理參數(shù)對中藥提取液的具體指導(dǎo)意義尚未研究清楚，有待進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明減壓提取液中物質(zhì)的粒徑大于常壓提取液，這些大粒徑的物質(zhì)的出現(xiàn)可能與溫度有關(guān)，較低的溫度雖然降低大分子的溶出，但是同時(shí)也降低了已經(jīng)溶出的大分子物質(zhì)的分解，因此減壓提取液中物質(zhì)的粒徑較常壓提取液的大。

減壓提取是通過控制真空度來調(diào)節(jié)溶液沸點(diǎn)的動(dòng)態(tài)提取，與常壓提取不同的是提取時(shí)的沸點(diǎn)不同，它能在較低的溫度下達(dá)到沸騰狀態(tài)。減壓提取可根據(jù)目標(biāo)成分對溫度的敏感性選擇適宜的提取溫度，降低目標(biāo)成分的分解，從而提高提取效率。本實(shí)驗(yàn)比較了丹參 70 ℃的減壓提取液和 100 ℃的常壓提取液，由于提取溫度不同，導(dǎo)致提取液的成分種類和數(shù)量有差異，提取液中成分間相互作用和存在形式也會(huì)有差異，因此減壓提取液與常壓提取液的物理參數(shù)存在差異。

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Com Parison of Physical ProPerties of Danshen vacuum extract and atmosPheric extract

YANG Xiu-mei1， HUANG Juan1， HAN Li1*， WU Zhen-feng1，2， ZHANG Chao1， YANGMing1，2
（1.Research on Chinese Medicine Resources System and Developmentand Utilization Sichuan ProvinceWork Together for a Baseof Cultivation of State Key Labortory， Chengdu University of Traditional ChineseMedicine， Chengdu 611137， China； 2.Key Laboratory ofModern Preparation of TCM， Ministry of Education， Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China）

Danshen （ Salviae miltiorrhizae radix et Rhizoma ）； vacuum extract； danshensuan B，physical property

R284.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0082-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.020

2013-03-14

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目 （81173565）； 四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目 （10ZA093）

楊秀梅 （1988—） ， 女， 碩士， 研究方向： 中藥制劑新技術(shù)。 Tel： 13568997942 ， E-mail： 564004232@qq.com

*通信作者： 韓 麗， 教授， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 中藥新制劑、 新技術(shù)、 新劑型。 Tel：（028）68100127， E-mail： hanliyx@163.com