不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材品質(zhì)評價(jià)

宋 嬿， 趙志剛， 郜舒蕊

（1.上海華宇藥業(yè)有限公司，上海 200002； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院， 北京 100102）

［飲片炮制］

不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材品質(zhì)評價(jià)

宋 嬿1， 趙志剛2， 郜舒蕊2

（1.上海華宇藥業(yè)有限公司，上海 200002； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院， 北京 100102）

目的 對丹參主產(chǎn)區(qū)不同產(chǎn)地栽培與野生丹參從活性成分含有量角度進(jìn)行品質(zhì)評價(jià)。方法 采用高效液相色譜法對丹參中迷迭 香 酸、 丹 酚酸 B、 隱 丹 參 酮 及 丹 參 酮 ⅡA的 含 有 量 進(jìn) 行 測 定 分 析。 Wondasil C18色 譜 柱 （ 4.6 mm× 250mm， 5 μm）， 甲醇-0.01%磷酸水為流動(dòng)相， 梯度洗脫， 體積流量 1.0mL/min； 檢測波長分別為 268 nm、 286 nm。結(jié)果 栽培丹參中迷迭香酸、 丹酚酸 B、 隱丹參酮及丹參酮ⅡA的含有量范圍分別為 0.23% ～0.80%、 7.63% ～13.93%、 0.02% ～0.23%、 0.08% ～0.30%， 野生丹參上述 4 種成分的含有量范圍分別為0.54% ～0.94%、 7.95% ～12.25%、 0.03% ～0.20%、 0.12% ～0.29%。 結(jié)論 栽培丹參中水溶性成分迷迭香酸、 丹酚酸 B的量多低于野生丹參， 而脂溶性成分隱丹參酮、 丹參酮ⅡA的量卻較野生丹參高； 聚類分析結(jié)果表明， 多數(shù)產(chǎn)地丹參藥材栽培種與野生種能夠明顯區(qū)別。

丹參；不同產(chǎn)地；栽培；野生；品質(zhì)評價(jià)；聚類分析

丹參 Salvia miltiorrhiza Bunge為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，是歷版 《中國藥典》 規(guī)定的藥用丹參的唯一來源，入藥部位為其干燥的根及根莖。丹參為臨床常用中藥，也是國家藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的 320 多個(gè)中成藥的重要原料［1］。 上世紀(jì) 60 年代之前，丹參以應(yīng)用野生品為主，隨著市場需求的增加，野生資源銳減，因此，各地開始對丹參進(jìn)行引種栽培，獲得成功后，種植面積迅速擴(kuò)大。目前，市場上已難尋覓野生丹參，而人工栽培品成為商品丹參的主要來源，由于廣泛分散的種植沒有形成統(tǒng)一規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致各地丹參藥材質(zhì)量不均，不同土壤、不同氣候環(huán)境、不同栽培管理措施、不同加工方法等都是導(dǎo)致丹參藥材質(zhì)量差異的重要因素。探討栽培與野生丹參質(zhì)量差異，有助于丹參藥材的質(zhì)量控制，為丹參規(guī)范化生產(chǎn)基地的建設(shè)以及丹參種質(zhì)資源的合理利用提供依據(jù)。關(guān)于栽培丹參與野生丹參的質(zhì)量研究 已有一些報(bào)道［2-8］， 本實(shí) 驗(yàn)收集了丹參主產(chǎn)區(qū)不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材，測定其中水溶性成分迷迭香酸、丹酚酸B及脂溶性成分隱丹參酮、丹參酮ⅡA的量， 并進(jìn)行了系統(tǒng)聚類分析，旨在對不同產(chǎn)地丹參藥材進(jìn)行品質(zhì)評價(jià)，嘗試探討栽培與野生丹參藥材質(zhì)量的差異，為丹參的規(guī)范化生產(chǎn)，保證藥材質(zhì)量均一、穩(wěn)定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀 （LC-2010AHT， 島津公司）； KQ500DE型數(shù)控超聲波清洗器 （功率：500W， 昆山市超聲儀器有限公司）； FW100 型高速萬能粉碎機(jī) （北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；BP211D型電子分析天平 （德國 Sartorius公司）。

1.2 試劑 迷迭香酸對照品 （ 批號(hào)： 120925）、丹酚酸 B對照品 （批號(hào)：121020）、 隱丹參酮對照品 （批號(hào)： 120925）、丹參酮ⅡA對照品 （ 批號(hào)：121029）， 均購自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司， 純度均大于 98%； 甲醇、 磷酸均為色譜純 （美國Fisher公司）； 水為哇哈哈純凈水； 乙醇及其他試劑均為分析純 （北京化工廠）。

1.3 藥材 不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材為北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源課題組提供，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所王文全教授鑒定為唇形科植物丹參 S.miltiorrhiza Bunge的根及根莖。 樣品具體信息見表1。

2 樣品測定方法

2.1 供試品溶液的制備 參考北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源課題組采用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選出的丹參超聲提取工藝條件制備供試品溶液。精密稱取丹參藥材粉末 （過40 目篩） 約 0.5 g， 置具塞錐形瓶中， 精密加入 75%乙醇 100 mL， 超聲提取 10 min （250 W，25 ℃）， 放冷， 75%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 取上清液用0.45 μm微孔濾膜濾過， 即得。

表1 不同產(chǎn)地丹參藥材基本信息Tab.1 Basic information of Salviamiltiorrhizae Radix et Rhizoma from different habitats

2.2 色譜條件 參考北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源課題組建立的 HPLC同時(shí)測定丹參中迷迭香酸、 丹酚酸 B、 隱丹參酮、 丹參酮ⅡA等 4 種活性成分含有量的方法。 具體色譜條件如下： Wondasil C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相為甲醇（A） -0.01%磷酸水 （ B）， 梯度洗脫 （0 ～3 min，30%A； 3 ～5 min， 30% ～40%A； 5 ～3 min，40%A；13 ～20 min，40% ～58%A；20 ～22 min，58% ～75%A； 22 ～24 min， 75%A； 24 ～50 min，75% ～85%A）；體積流量 1.0 mL/min； 檢測波長286 nm （迷迭香酸和丹酚酸 B） 和 268 nm （隱丹參酮和丹參酮ⅡA）； 柱溫 30 ℃； 進(jìn)樣體積 10 μL。

進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)等方法學(xué)考察，結(jié)果均良好。

2.3 樣品測定 精密稱取不同產(chǎn)地丹參藥材 0.5 g，按 “2.1” 項(xiàng)制備供試品溶液， 按 “2.2” 項(xiàng)色譜條件測定，每一樣品重復(fù)3次。以外標(biāo)法中的標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算丹參樣品中各成分含有量。所得結(jié)果見表2。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同產(chǎn)地栽培丹參藥材中 4 種活性成分的比較 見表2顯示，不同產(chǎn)地栽培丹參藥材中4種活性成分的含有量差異較大。藥材中迷迭香酸、丹酚酸 B、 隱丹參酮、 丹參酮ⅡA的含有量范圍分別為0.23% ～0.80%、 7.63% ～13.93%、 0.02% ～0.23%、 0.08% ～0.30%， 其中隱丹參酮和丹參酮ⅡA變異較大， 最高值與最低值分別相差 10 倍、4倍。 《中國藥典》 2010 年版 （以下簡稱藥典） 規(guī)定丹參中丹酚酸 B的量不得低于 3.0%， 丹參酮ⅡA的量不得低于 0.2%， 就此標(biāo)準(zhǔn)而言， 所有產(chǎn)地丹參藥材的丹酚酸B均達(dá)到并遠(yuǎn)超過藥典標(biāo)準(zhǔn)，即使丹酚酸 B的最小含有量也較藥典高 1.45 倍；對于丹參酮ⅡA， 除四川中江縣未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)外， 其他產(chǎn)地丹參均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，但并未顯著高于該標(biāo)準(zhǔn)?？傮w上看，山東臨朐縣、河南方城縣和盧氏縣丹參中4種活性成分的含有量均較高；四川中江縣未經(jīng) “發(fā)汗” 丹參中丹酚酸 B的量最高， 而丹參酮ⅡA的量卻非常低， “發(fā)汗” 后的丹參與未 “發(fā)汗”丹參相比，4種活性成分的量均有不同程度的降低， 該結(jié)果與潘英妮等［9］的研究一致。

3.2 不同產(chǎn)地野生丹參藥材中 4 種活性成分的比較 表2表明，不同產(chǎn)地野生丹參藥材中4種活性成分的含有量差異較大。藥材中迷迭香酸、丹酚酸B、 隱丹參酮、 丹參酮ⅡA的含有量范圍分別為0.54% ～0.94%、 7.95% ～12.25%、 0.03% ～0.20%、 0.12% ～0.29%， 其中隱丹參酮變異較大，最高值與最低值相差6倍。與栽培丹參相似，所有野生丹參藥材中丹酚酸B的量均達(dá)到并遠(yuǎn)超過藥典標(biāo)準(zhǔn)， 合格率為 100%； 然而丹參酮ⅡA的量普遍偏低， 合格率僅為 42.86%。 除河南方城縣、陜西洛南縣寺坡鄉(xiāng)和陳耳鎮(zhèn)外，其余產(chǎn)地丹參酮ⅡA均未達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)。河南西峽縣和四川中江縣丹參藥材的隱丹參酮量很低，與其他產(chǎn)地相比存在較大差異，較含有量最高的陜西洛南縣寺坡鄉(xiāng)分別低 85.00%和 70.00%。

3.3 不同產(chǎn)地栽培與野生丹參藥材聚類分析 本實(shí)驗(yàn)以不同產(chǎn)地丹參藥材中的迷迭香酸、丹酚酸B、 隱丹參酮、 丹參酮ⅡA的含有量及丹酚酸 B與丹參酮ⅡA的比值為考察指標(biāo)， 對所得分析數(shù)據(jù)采用極差法 （Range-1to1） 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理， 原始數(shù)據(jù)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化變換后，采用歐氏距離平方法（ squared Euclidean distance） 計(jì)算樣 品 間相似性程度， 選用中間距離法 （ median clustering） 進(jìn)行聚類。 系統(tǒng)聚類分析結(jié)果見圖1。

圖1 不同產(chǎn)地丹參藥材系統(tǒng)聚類結(jié)果圖Fig.1 Clustering dendrogram of Salviam iltiorrhizae Radix et Rhizoma from different habitats

聚類結(jié)果顯示，多數(shù)產(chǎn)地的丹參藥材栽培種與野生種能夠明顯區(qū)別開來，如河南盧氏縣、方城縣及山東平邑縣，且山東3個(gè)產(chǎn)地的栽培丹參及河南方城縣栽培丹參被聚為一類，說明這幾個(gè)產(chǎn)地丹參活性成分整體差異不明顯；四川中江縣栽培丹參（未 “發(fā)汗”） 與野生丹參被聚為一類， 而經(jīng)過“發(fā)汗” 加工的栽培丹參卻被單獨(dú)聚為一類， 可見加工方法對丹參藥材的活性成分影響較大。

4 討論

不同產(chǎn)地丹參藥材，無論栽培品還是野生品，4種活性成分的含有量均存在較大差異，這一結(jié)果與許多報(bào)道［7，9-10］一 致。 付 桂 芳 等［11］從 藥 材 性 狀、顯微組織方面對不同產(chǎn)地丹參野生品與栽培品進(jìn)行了比較，也發(fā)現(xiàn)存在較大差異。藥用植物的生長受遺傳因素 和 環(huán) 境 因 素 的 雙 重 影 響［12-14］， 其活 性 成分多為植物的次生代謝產(chǎn)物，在植物體內(nèi)的積累很大程度上受生長環(huán)境各因素的直接或間接影響。丹參的生態(tài)適應(yīng)性強(qiáng)，在我國許多地區(qū)均有分布，而不同產(chǎn)地環(huán)境因子如：氣候、土壤、地形、伴生生物因素等有較大差異，這勢必會(huì)對丹參的生長及藥材品質(zhì)造成影響。筆者在丹參種質(zhì)資源調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，野生丹參與栽培丹參所處的生長環(huán)境迥異，野生者多生于林下，陽光遮蔽，植株生長矮小，地上莖分枝少，根條細(xì)長；而栽培丹參則生長在陽光充足、土壤肥沃的丘陵或平原地區(qū)，植株高大，地上莖分枝多，根條粗。因此，對于丹參等藥用植物（不論野生品種還是栽培品種） 而言，生境與藥材質(zhì)量的關(guān)系值得研究，這對于改善栽培藥材的品質(zhì)具有重要的實(shí)際意義。

從整體上看，野生丹參中水溶性成分迷迭香酸、丹酚酸B的量普遍高，而栽培丹參中脂溶性成分隱丹參酮、 丹參酮ⅡA的量普遍高。 不同產(chǎn)地丹參藥材中丹酚酸B的量均符合藥典規(guī)定，并遠(yuǎn)超過其標(biāo)準(zhǔn)； 對于丹參酮ⅡA， 栽培品尚能達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，而野生品卻多數(shù)不達(dá)標(biāo)。中藥是一個(gè)復(fù)雜體系，多成分、多靶點(diǎn)是其發(fā)揮藥效、治療疾病的作用機(jī)制，丹參藥材質(zhì)量的優(yōu)劣不能僅憑幾種活性成分的量即下定論， 并且文獻(xiàn)報(bào)道， 丹參酮ⅡA具有一定的細(xì)胞毒性，可使細(xì)胞壁剝離，并對人的細(xì)胞色素 P4501A2 活性有強(qiáng)的阻制作用， 影響藥物在體內(nèi)的代謝［9］。傳統(tǒng)認(rèn)為野生丹參藥材的療效優(yōu)于栽培品，而野生品丹參酮類成分的量較低，酚酸類成分的量較高的特點(diǎn)是否是其質(zhì)量和療效的關(guān)鍵所在，這一點(diǎn)還需進(jìn)一步研究，并輔以其他手段，如藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥效學(xué)等進(jìn)行綜合評價(jià)。

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Quality evaluation of the cultivated and thew ild Salviam iltiorrhizae Radix et Rhizoma from different habitats

SONG Yan1， ZHAO Zhi-gang2， GAO Shu-rui2
（1.Shanghai Hua Yu Chinese Herbs Co.， Ltd， Shanghai200002， China； 2.School of Chinese Pharmacy， Beijing University of ChineseMedicine， Beijing 100102， China）

AIM To evaluate the quality of the cultivated and the wild Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizoma from different habitats in perspective of active contents.METHODS HPLC of the contents of rosmarinic acid，salvianolic acid B， crytotanshinone and tanshinoneⅡAwas performed on WondasilC18column （4.6mm×250mm，5 μm） at the wavelength of 268 nm and 286 nm， a mixed liquid ofmethanol-0.01%phosphoric acid asmobile phase in a gradient elution mode， the flow-rate was 1.0 m L/min.RESULTS In cultivated Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizoma， the content ranges of rosmarinic acid， salvianolic acid B， crytotanshinone and tanshinoneⅡAfellwithin 0.23%-0.80%， 7.63%-13.93%， 0.02%-0.23%， and 0.08%-0.30%， respectively， however， in wild Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizome， in the ranges of 0.54%-0.94%， 7.95%-12.25%， 0.03% -0.20%， and 0.12%-0.29%， respectively.CONCLUSION The contents ofwater-soluble constituents such as rosmarinic acid and salvianolic acid B in cultivated Salviamiltiorrhizae Radix et Rhizoma are lower than these in the wild samples， but lipophilic constituents such as crytotanshinone and tanshinoneⅡAare higher than these in the wild samples.Cluster analysis results indicate that thewild Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizoma and the cultivated Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizoma could be distinguished easily in most habitats.

Salvia miltiorrhizae Radix et Rhizoma； different habitats； cultivated； wild；quality evaluation；cluster analysis

R284.1

： A

： 1001-1528（2014）05-1026-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.030

2013-11-13

國家工業(yè)與信息化部中藥材生產(chǎn)扶持項(xiàng)目 （2011 年）

宋 嬿 （1970—） ， 女， 高級(jí)工程師， 從事中藥材資源和質(zhì)量研究。 Tel： 13801653370， E-mail： hysongyan@126.com