五節(jié)芒與荻人工雜交種F1群體開花物候與生殖特性研究

艾辛，朱玉葉，蔣建雄，龍衛(wèi)，李莎莎，易自力＊

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長沙410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖南 長沙410128；3.湖南省常德市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，湖南 常德415000）

芒屬（Miscanthus）植物作為極具開發(fā)潛力的能源植物之一備受關(guān)注［1－4］。中國是芒屬植物重要的起源與分布中心，中國有7個種［5］，其中芒（M.sinensis）、五節(jié)芒（M.floridulus）、荻（M.sacchariflorus）、南荻（M.lutarioriparus）4個種作為能源植物開發(fā)利用的價值最大，資源分布范圍廣、蘊藏量大，稱為芒屬能源植物（Miscanthusenergy plant，MEP），其多樣性豐富［6－9］。芒屬植物的4個種各自具有優(yōu)良的特性，但作為能源植物直接利用都存在不足，通過種間雜交將分散在各個種中的優(yōu)良性狀聚合在一起，選育出生物產(chǎn)量高，適應(yīng)不良環(huán)境能力強的新品種是芒屬能源植物育種的主要方向。荻是我國芒屬植物中分布緯度最北、經(jīng)度最西的種類，適應(yīng)惡劣生態(tài)環(huán)境的能力強，地下根狀莖低于－30℃也能安全越冬，而地上部分在低溫來臨前已自然衰老。研究表明，荻還具有耐中度干旱和瘠薄的能力［10－15］，耐受鹽堿的能力較強［16］，對重金屬污染的土壤也有一定的修復(fù)能力［17］，其根系的擴張能力有利于水土固定［18］，綜合評價，荻是一種適應(yīng)惡劣環(huán)境能力強但生物產(chǎn)量較低的芒屬能源植物。五節(jié)芒主要生長在我國長江中下游流域的廣大地區(qū)，對其生態(tài)生物學(xué)特性［19］、遺傳特性［20－21］、生態(tài)修復(fù)［22－23］及利用價值［24－25］等方面所做的研究工作表明，五節(jié)芒生物產(chǎn)量高，具有較好的能源利用開發(fā)前景。但五節(jié)芒具有不易衰老的特性，雖然利用催熟劑能促進其衰老［26］，但這種方法對五節(jié)芒今后的生長是否有不良影響還有待觀察。芒屬能源植物的自然衰老性狀是一個重要性狀，隨著植物的衰老，植物體內(nèi)的水分和礦物質(zhì)的含量明顯減少，有利于收獲、儲藏和燃燒［27］。為了充分利用荻和五節(jié)芒優(yōu)良特性，克服各自的缺點，開展了荻和五節(jié)芒的種間雜交工作，首次在全球獲得了荻和五節(jié)芒的種間雜交種群體［28］，雜交種在生長速度，生物產(chǎn)量、耐旱、耐瘠薄等方面充分地顯示了遠緣雜種的優(yōu)勢。植物遠緣雜交往往存在不親和、雜種不育和雜種后代不稔三大障礙，雜交試驗和天然種間雜交種的研究表明芒屬植物種間雜交的障礙不明顯［29］，目前歐美國家普遍利用的能源植物“奇崗”就是荻和芒的天然三倍體雜交種［30］。芒屬植物種間雜交種雖然具有較大的雜種優(yōu)勢，但通過對雜交種后代基因的分離重組和選擇，能實現(xiàn)優(yōu)良性狀的聚合，篩選出性狀優(yōu)良的新品種，對雜交種的開花物候和生殖特性的了解對開展雜交種的進一步遺傳改良研究非常重要，但到目前為止，有關(guān)芒屬植物種間雜交種在開花物候和生長特性方面的研究還未見報道，本研究利用五節(jié)芒和荻的人工雜交種群體進行開花物候、結(jié)實能力和花粉母細胞減數(shù)分裂行為等方面的觀察，旨在為今后進一步開展芒屬植物種間、種內(nèi)及親子代間有性雜交育種積累基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 供試材料與試驗地環(huán)境條件

試驗材料為本研究者創(chuàng)建的五節(jié)芒和荻的種間雜交種F1群體，經(jīng)過SSR分子標記和田間形態(tài)學(xué)鑒定的五節(jié)芒與荻雜種植株和2個親本。親本荻采集于甘肅涇川縣窯店鎮(zhèn)，親本五節(jié)芒采集于湖南邵陽市洞口縣。雜種植株群體為112株，只有103株在大田種植。2個親本均為二倍體（2n＝38）。試驗材料于2011年種植于瀏陽芒草試驗基地，植株生長旺盛，冬季衰老后割除地上部分，安全越冬。第1年由于受栽培時間的影響，當年8月開花，不作為物候期信息進行分析，2012年進行正式的開花物候期和生殖特性觀測，2013年重復(fù)觀測1次物候期和其他農(nóng)藝學(xué)性狀。

瀏陽芒草試驗基地坐落在湖南省瀏陽市永和鎮(zhèn)石佳村，栽培地為山地，經(jīng)過機械施工平整，土質(zhì)屬于貧瘠的黃壤土，氣候條件為中亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候［31］。

1.2 實驗方法

1.2.1 雜交種F1群體開花物候觀察與開花數(shù)統(tǒng)計 從2012年5月初開始觀察雜交種和2個親本的開花情況，觀測指標主要有：始花日期、開花持續(xù)時間和終花日期。個體（株叢）始花日期為單株第1朵花開放的日期，終花日期為單株最后1朵花開放的日期。個體總花期長度為第1朵花開到最后1朵花開的時間。群體水平的開花物候參數(shù)以所觀測的全部個體的平均值計算，其中，始花日指第1個植株開花日期。參照Dafni［32］的方法，群體水平上5%的個體開花時視為始花，50%的個體達到開花高峰時視為群體開花高峰期，95%的植株開花結(jié)束時視為群體花期結(jié)束。芒屬植物是一種多分蘗植物，形成叢生狀，大部分的分蘗都能孕穗開花，此處所說的個體水平是指雜交種和它的親本株叢。2013年繼續(xù)觀測，但只觀測每個株叢的孕穗及始花日期，與2012年數(shù)據(jù)進行比較驗證，由于花期基本一致，而分蘗數(shù)又太多，未進行開花花序數(shù)的記數(shù)，故相關(guān)計算以2012年的數(shù)據(jù)為準。

用同步指數(shù)（synchrony index，Si）檢測孕抽穗和開花同步性高低，具體方法見參考文獻［33］，同步指數(shù)計算公式如下：

式中，ej表示個體i和j花期重疊時間（d），fi表示個體i開花的總時間（d），n表示群體中個體總數(shù)。Si的變異范圍為0～1，“0”表示種群內(nèi)個體花期無重疊，“1”則表示完全重疊，所有個體的平均值為該群體的開花同步性指數(shù)。

從5－10月對F1各株叢植株每月開花分蘗數(shù)進行統(tǒng)計，根據(jù)植株每月開花分蘗數(shù)的數(shù)量計算植株的平均開花振幅（mean flowering amplitude），每月開花比例＝（每月開花分蘗數(shù)/開花分蘗總數(shù)）×100%。

1.2.2 花粉育性觀測 采用I2－KI溶液進行花粉育性的測定。在親本和雜交種的開花期，每天早上7點至10點之間選取每株當天開花的花序。每次隨機從花序上選取花藥未開裂散粉的小穗，從中取出3個花藥放在載玻片上。在載玻片上滴1～2滴I2－KI溶液，用鑷子將花藥輕輕搗碎，去掉肉眼可見的雜質(zhì)，加上蓋玻片，在Olympus顯微鏡下（100×）觀察。全部染成棕黑色的花粉被認為是可育花粉，不染色或染色很淺的花粉為不育花粉。每份材料制作3個效果優(yōu)良的制片，每片觀察3個視野，每個視野能觀察花粉數(shù)30粒以上。可育花粉百分率＝（染色花粉數(shù)/觀測花粉數(shù)）×100。

1.2.3 自花授粉和異花授粉結(jié)實率的測定 每株叢選取3個花序，用定制的羊皮紙袋分別對其套袋，其后不再做任何處理。同時每株叢隨機選取3個花序作為對照讓其自然授粉。待種子完全成熟時，將套袋處理的花序和自然授粉的花序分開收集，將3個自交花序上小穗混合均勻，隨機取300個小穗進行計數(shù)，重復(fù)3次，自然授粉的花序照此法同樣處理，分別統(tǒng)計結(jié)實率，結(jié)實率＝（結(jié)實數(shù)/300）×100%。

1.2.4 雜交種F1植株花粉母細胞減數(shù)分裂的顯微觀察 取材與后處理：在親本和雜交種的開花期，于早上7點左右在田間取材，以旗葉與下一葉葉耳間距為標準，選取不同長度的幼穗用卡諾氏固定液（無水乙醇∶冰醋酸＝3∶1）固定24h左右，用95%酒精清洗3次，轉(zhuǎn)入70%酒精中低溫4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

制片：用鑷子將1朵小花中雄蕊取出，放在潔凈的載玻片上，滴1滴45%的醋酸將其軟化幾秒，擦去多余液體，再滴1～2滴的改良卡寶品紅染液［34］進行染色，加蓋玻片進行壓片，吸水紙吸去多余液體。

鏡檢：在Olympus普通光學(xué)顯微鏡（400×或1000×）下鏡檢，尋找減數(shù)分裂中的各個分裂相并拍照。減數(shù)分裂各時期分別選取30個視野，至少觀察200個細胞，統(tǒng)計各時期的染色體行為異常率，異常率（%）＝（染色體行為異常細胞數(shù)/各時期觀察的細胞總數(shù)）×100%。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用Microsoft Excel進行花粉育性和結(jié)實率的描述性統(tǒng)計分析，用DPS 6.5進行開花物候、花粉育性與結(jié)實率的相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 五節(jié)芒與荻雜交種F1群體的開花物候

個體和群體的開花物候特征如表1所示，F(xiàn)1群體一般為5月下旬開始孕穗，6月中旬開始開花，花期持續(xù)到10月底，花期持續(xù)時間長。F1個體在始花日期和終花日期上略有不同，始花日期為6月7日至6月21日之間，終花期為10月11日至10月27日之間，開花情況具很高同步性。由圖1可見，親本五節(jié)芒的花期分為2個時期，第1個開花高峰出現(xiàn)在7月（開花分蘗數(shù)占全年開花分蘗數(shù)比例為43.75%），第2個開花高峰出現(xiàn)在9月（開花分蘗數(shù)比例為50.00%），2個花期間分隔明顯，不表現(xiàn)為連續(xù)性；親本荻只在6月（開花比例為100%）出現(xiàn)1個開花高峰；F1雜種從6月上旬開始連續(xù)開花直至10月下旬結(jié)束，但仍然可以分為2個階段即2個開花高峰，呈雙峰曲線，第1次開花高峰出現(xiàn)在6月（開花分蘗數(shù)平均值為36.34%）與親本荻重合，1個在9月（開花分蘗數(shù)平均值為39.38%）與親本五節(jié)芒重合（圖1）。從孕穗期和始花期的時間看，雜交種的始花期偏向于早花的荻親本，66.07%的個體（株叢）花期與親本荻相近，31.25%的個體花期與親本五節(jié)芒相近，只有2.68%的花期晚于晚花的親本，說明早花性狀的遺傳力高。

表1 F1群體個體水平（n＝103）和群體水平的開花物候Table 1 Flowering phenology characteristics of F1population and individual plants（n＝103）

2.2 雜交種F1植株花粉育性研究

利用I2－KI染色法測定2個親本和103株F1植株的花粉育性（表2），發(fā)現(xiàn)芒屬植物花粉經(jīng)I2－KI染色后呈較深的顏色，說明親本和F1植株花粉中淀粉的含量比較高。親本荻的花粉染色率為（96.11±2.05）%，親本五節(jié)芒第1次開花高峰花粉染色率為（75.38±12.44）%，第2次開花高峰花粉染色率為（92.32±4.70）%，明顯高于第1次開花高峰花粉染色率。F1群體植株平均花粉染色率低于2個親本，2次開花高峰的花粉染色率分別為（50.79±18.61）%，（65.42±14.71）%，第2次開花高峰時的花粉染色率大于第1次開花高峰時的花粉染色率。F1群體個體間有較大的差異，2次開花高峰可育花粉率的變異系數(shù)分別為36.64%，22.48%，雜交種育性降低說明了荻和五節(jié)芒的親緣關(guān)系相對較遠，可能存在較大的生理差異。

圖1 親本荻、五節(jié)芒和雜種F1個體開花振幅曲線Fig.1 Flowering amplitudes curves of F1population and its parents M.floridulus and M.sacchariflorus

表2 雜交種F1群體花粉育性與結(jié)實性Table 2 Pollen fertility and natural seed setting rate of F1population %

2.3 雜交種自交結(jié)實率與天然結(jié)實率測定

荻、五節(jié)芒和它們的雜交種植株的花序套袋自交結(jié)實率均為0，說明荻和五節(jié)芒雜交種F1也是高度自交不親和。開放授粉的情況下，荻的天然結(jié)實率為0，五節(jié)芒第1次開花高峰期的花序結(jié)實率極低，為0.33%，第2次開花高峰期的花序結(jié)實率為22.00%。種植在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)芒屬植物資源圃的2個親本卻有很高的天然結(jié)實率［親本荻為（57.22±11.69）%，親本五節(jié)芒為（62.94±4.47）%］。F1群體內(nèi)株間的天然結(jié)實率有較大的差異（表2），第1次開花高峰期的花序平均天然結(jié)實率為（7.57±6.82）%，最低為0.00%，最高為36.33%，變異系數(shù)為90.07%，第2次開花高峰期的花序平均天然結(jié)實率為（28.74±12.02）%，最低為1.00%，最高為58.67%，變異系數(shù)為41.81%，說明雜交種株間有較大的遺傳差異，群體多樣性高。

表3 F1植株個體水平的物候指標及結(jié)實率的相關(guān)分析Table 3 Correlation analysis between flowering phenology parameters and seed setting rate of F1individual plants

2.4 雜交種開花物候指數(shù)與結(jié)實率的相關(guān)性

圖2 五節(jié)芒與荻人工雜交種F1花粉母細胞減數(shù)分裂（在400×下拍攝）Fig.2 Meiosis of pollen mother cell of F1plants（400×）

五節(jié)芒與荻人工雜交種F1植株個體水平的始花時間、花期持續(xù)時間、開花數(shù)目與結(jié)實率的相關(guān)分析顯示（表3），開花數(shù)與花期持續(xù)時間呈極顯著正相關(guān)，與始花時間和結(jié)實率呈正相關(guān)關(guān)系；花期持續(xù)時間與始花時間呈極顯著負相關(guān)，與結(jié)實率呈正相關(guān)關(guān)系；始花時間與第1次開花高峰結(jié)實率呈負相關(guān)，與第2次開花高峰結(jié)實率呈顯著負相關(guān)關(guān)系。這表明開花數(shù)目多的個體比開花數(shù)目少的個體花期持續(xù)時間更長，結(jié)實率更高；花期持續(xù)時間越長的個體，始花時間越早，結(jié)實率更高；始花時間早的個體比始花時間晚的個體花期持續(xù)時間更長，第2次開花高峰后的結(jié)實率更高。

2.5 雜交種花粉育性與結(jié)實率的關(guān)系

雜交種花粉的染色率與結(jié)實率的關(guān)系并不密切，第1次開花高峰的花粉染色率與結(jié)實率之間為負相關(guān)（r＝－0.1473），第2次開花高峰花粉育性與結(jié)實率之間雖然為正相關(guān)（r＝0.1754），但也未達到顯著性水平，花粉I2－KI染色率與植株結(jié)實率之間沒有相關(guān)性，其可能原因是I2－KI染色法不能有效地反映雜交種的花粉育性和活力水平，且由于芒屬植物自交不親和，自花花粉是否可育與雌蕊能否受精結(jié)實也沒有關(guān)系，雌蕊的發(fā)育是否正常值得關(guān)注。

2.6 雜交種F1植株花粉母細胞減數(shù)分裂觀察

利用根尖壓片法和流式細胞儀觀測親本荻和五節(jié)芒的染色體數(shù)目，2個親本的倍性均為二倍體，花粉母細胞減數(shù)分裂未見異常。選取葉枕距范圍在3～6cm的健壯幼穗可以獲得較好的減數(shù)分裂時期的各個分裂相。如圖2所示，觀測結(jié)果表明F1植株的花粉母細胞減數(shù)分裂過程基本正常，胞質(zhì)分裂為連續(xù)型，即減數(shù)第1次分裂后產(chǎn)生細胞板，將母細胞分為2個子細胞，即二分體。接著進行第2次分裂，形成四分體，四分體為兩側(cè)對稱型。少數(shù)花粉母細胞在第2次減數(shù)分裂后期出現(xiàn)染色體分裂不同步（圖2－12），但這一現(xiàn)象出現(xiàn)的比例很小，不同步差異也不大，到第2次分裂末期又趨于同步，即不會導(dǎo)致出現(xiàn)三分體的現(xiàn)象。

個別花粉母細胞減數(shù)分裂過程中染色體的異常行為（圖3）包括：在中期I出現(xiàn)部分染色體沒有排列在赤道板上，而是隨機分布于赤道板附近（圖3－15），行為異常率為1.5%；后期I正常染色體已趨向兩級，而落后染色體則分布于兩級之間形成染色體橋（圖3－16），行為異常率為1；末期I仍可見染色體片段位于兩級之間（圖3－17），行為異常率為0.5%。

3 討論

根據(jù)中國植物志［35］記載，荻在原產(chǎn)地的花果期為每年8－10月，五節(jié)芒的花果期為每年的5月到10月。本試驗的親本荻在瀏陽基地觀察到的始花期在6月上中旬，花期呈單峰曲線，而在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)芒草基地其花期延續(xù)至9月上旬，開花花序數(shù)呈雙峰曲線，高峰分別出現(xiàn)在6月上旬和9月上旬。五節(jié)芒花果期從7月一直持續(xù)到10月，呈雙峰曲線，高峰分別出現(xiàn)在7和9月。出現(xiàn)這些情況的原因在于荻是北種南移，并且有研究表明荻是短日照響應(yīng)植物［36］，因此出現(xiàn)了提前開花的現(xiàn)象，但在瀏陽基地沒有出現(xiàn)二次開花高峰，可能是由于土壤貧瘠缺水所致，沒有持續(xù)新長出的分蘗，吳文新和王洪銘［37］研究表明，肥料與水分因素對菊花（Dendranthemamorifolium）的開花期有很大影響。五節(jié)芒從7月開始開花，出現(xiàn)2次開花高峰，這與朱明東等［29］發(fā)現(xiàn)五節(jié)芒的生殖分蘗中下部的節(jié)位會發(fā)生第2次抽穗開花的現(xiàn)象相吻合。五節(jié)芒與荻的雜交種F1群體呈雙峰曲線，花期持續(xù)時間長，同步性指數(shù)高，季孔庶等［38］在進行鵝掌楸屬（Liriodendron）樹種物候觀測時也發(fā)現(xiàn)雜種花期持續(xù)時間比雙親的長，并且雜種和親本的花期之間有較長交叉時間。

開花物候?qū)χ参锏纳吵晒哂幸欢ㄓ绊懀?9－41］。Augspurger［42］認為，植物的開花數(shù)是決定其結(jié)實率的重要因子，在觀察的6種新熱帶灌木的開花物候中，有5種植物的個體開花數(shù)與結(jié)實率呈正相關(guān)。肖宜安等［43］研究發(fā)現(xiàn)瀕危植物長柄雙花木中，始花日期與結(jié)實率均呈顯著負相關(guān)關(guān)系，始花日期早的比始花日期遲的結(jié)實率高，而開花數(shù)與結(jié)實率表現(xiàn)出線性正相關(guān)關(guān)系。通過對瀏陽基地五節(jié)芒與荻人工雜種個體水平的花期持續(xù)時間、開花數(shù)與結(jié)實率的關(guān)系及相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)：開花數(shù)和花期持續(xù)時間分別與結(jié)實率存在正相關(guān)關(guān)系，此結(jié)果與李新蓉等［41］和Augspurger［42］的研究結(jié)果一致。由于芒屬植物存在自交不親和現(xiàn)象，花粉壽命較短，柱頭可授時間較長的特性［44］，五節(jié)芒與荻人工雜種在群體開花數(shù)多，花期持續(xù)時間較長的情況下，增加了接受其他基因型花粉的機會，從而提高結(jié)實的機會。

2個親本均是二倍體，而且減數(shù)分裂正常，F(xiàn)1植株減數(shù)分裂基本正常，但因為是種間雜交種，也有個別花粉母細胞出現(xiàn)了染色體異常行為，染色體行為異常率均低于2.0%，這說明五節(jié)芒與荻種間基因組具有很高的同源性，可以相互配對，說明五節(jié)芒與荻有很近的親緣關(guān)系。張春等［45］通過對擬鵝觀草屬（Pseudoroegneria）與鵝觀草屬（Roegneria）和披堿草屬（Elymus）屬間及種間雜種的花粉母細胞減數(shù)分裂觀察，確定了披堿草屬種的St染色體組與Y染色體組具有一定程度的同源性，親緣關(guān)系較近，而與H染色體組的關(guān)系較遠。對于五節(jié)芒與荻種間雜種的花粉母細胞減數(shù)分裂行為研究還未見報道，有文獻指出［46］芒屬的19個連鎖群與高粱（Sorghumbicolor）的10個連鎖群以2∶1呈相同的線性關(guān)系，表明芒屬植物基因組中存在著完整的全基因組的染色體復(fù)制。而高粱染色體基數(shù)為10［47］，本實驗也不能鑒別雜種F1中配對的染色體為同源配對還是異源配對，可借助基因組原位雜交（GISH）技術(shù)加以鑒別［48］，可能也存在一些片段的重排和變異，導(dǎo)致種間雜種染色體在減數(shù)分裂過程中的異常行為，其減數(shù)分裂過程還有待進一步深入的研究。從雜交種的花粉育性來看，雜交種的花粉育性普遍降低，說明兩者由于親緣關(guān)系的差異有可能影響到花粉發(fā)育，這與雜交種染色體在減數(shù)分裂過程的異常行為是否有某種關(guān)系，也有待今后進一步的研究。

［1］ Sang T，Zhu W X.China’s bioenergy potential［J］.Global Change Biology Bioenergy，2011，3（2）：79－90.

［2］ Hastings A.Future energy potential ofMiscanthusin Europe［J］.Global Change Biology Bioenergy，2009，1（2）：180－196.

［3］ Lewandowski I，Clifton－Brown J，Scurlock J M O，etal.Miscanthus：European experience with a novel energy crop［J］.Biomass and Bioenergy，2000，19（4）：209－227.

［4］ Lewandowski I，Scurlockb J M O，Lindvallc E，etal.The development and current status of perennial rhizomatous grasses as energy crops in the US and Europe［J］.Biomass and Bioenergy，2003，25（4）：335－361.

［5］ Chen S L，Renvoize S A.MiscanthusAndersson［A］.Flora of China，Vol.22［M］.St.Louis.：Missouri Botanical Garden Press，2006：581－583.

［6］ 薛德，肖亮，艾辛，等.五節(jié)芒表型性狀和SSR標記遺傳多樣性分析［J］.草業(yè)學(xué)報，2012，21（5）：96－106.

［7］ 肖亮，蔣建雄，易自力，等.五節(jié)芒種質(zhì)資源的表型多樣性分析［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2013，39（2）：150－154.

［8］ 刁英，胡小虎，鄭興飛，等.利用SRAP和ISSR標記分析五節(jié)芒（Miscanthusfloridulus）的遺傳多樣性［J］.武漢大學(xué)學(xué)報（理學(xué)版），2010，（5）：578－583.

［9］ 肖亮，蔣建雄，易自力，等.廣西省芒野生居群表型多樣性研究［J］.草業(yè)學(xué)報，2013，22（4）：43－50.

［10］ 聶剛，張新全，黃琳凱，等.中國西南區(qū)野生芒居群表型變異研究［J］.草業(yè)學(xué)報，2013，22（5）：52－61.

［11］ 黃平，左海濤，韓烈保，等.拔節(jié)期水分脅迫對荻生長和生物質(zhì)特性的影響［J］.草地學(xué)報，2007，15（2）：153－157.

［12］ 黃杰，黃平，左海濤.栽培管理對荻生長特性及生物質(zhì)成分的影響［J］.草地學(xué)報，2008，16（6）：646－651.

［13］ 侯新村，范希峰，左海濤，等.氮肥對挖沙廢棄地能源草生長特性與生物質(zhì)產(chǎn)量的影響［J］.草地學(xué)報，2010，18（2）：268－273，279.

［14］ 李強，李加鵬，何淼.荻實生苗生物構(gòu)件對土壤水分脅迫的響應(yīng)［J］.草業(yè)科學(xué)，2013，30（6）：893－897.

［15］ 何淼，趙保成，李強，等.PEG脅迫對芒和荻種子萌發(fā)的影響［J］.草業(yè)科學(xué)，2013，30（4）：577－582.

［16］ 宗俊勤，陳靜波，聶東陽，等.我國不同地區(qū)芒和荻種質(zhì)資源抗鹽性的初步評價［J］.草地學(xué)報，2011，19（5）：803－807.

［17］ 張杰，周守標，黃永杰，等.能源植物荻對銅脅迫的耐性和積累特性［J］.水土保持學(xué)報，2013，27（2）：168－172，188.

［18］ 楊朝東，張霞，萬勇，等.荻草根系統(tǒng)擴展能力和固土作用的研究［J］.長江大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2009，6（3）：19－23.

［19］ 陳慧娟，寧祖林，張卓文.五節(jié)芒生物學(xué)特性及能量生產(chǎn)動態(tài)變化［J］.草業(yè)學(xué)報，2012，21（6）：252－257.

［20］ 鄧果特，劉清波，蔣建雄，等.五節(jié)芒基因組大小測定［J］.植物遺傳資源學(xué)報，2013，14（2）：339－341，346.

［21］ 陳少風(fēng)，何俊，周樸華，等.芒和五節(jié)芒的核型研究［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，30（1）：123－126.

［22］ 秦建橋，夏北成，趙鵬，等.五節(jié)芒（Miscunthusfloridulus）不同種群對鎘積累與轉(zhuǎn)運的差異研究［J］.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2011，30（1）：21－28.

［23］ 秦建橋，趙華榮，胡萌，等.鉛脅迫下不同生態(tài)型五節(jié)芒（Miscanthusfloridulus）的抗氧化系統(tǒng)的差異研究［J］.生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2011，20（3）：525－531.

［24］ 陳慧娟.五節(jié)芒生物量及其熱值的動態(tài)研究［D］.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［25］ 龔道生.五節(jié)芒栽培花菇技術(shù)與效益的分析［J］.防護林科技，2011，（3）：40－42.

［26］ 易鎮(zhèn)邪，王禹，王學(xué)華，等.3種催熟劑對芒屬植物的催熟效果比較［J］.草業(yè)科學(xué)，2013，30（7）：1052－1056.

［27］ Robson P，Mos M，Clifton－Brown J，etal.Phenotypic variation in senescence inMiscanthus：towards：optimising biomass quality and quantity［J］.Bioenergy Research，2012，5（1）：95－105.

［28］ 朱玉葉，艾辛，蔣建雄，等.五節(jié)芒與荻人工雜交種的創(chuàng)建與鑒定研究［J］.中國草地學(xué)報，2013，35（2）：31－36.

［29］ 朱明東，蔣建雄，肖亮，等.基于形態(tài)性狀及Adhl基因序列的芒與五節(jié)芒自然雜交現(xiàn)象研究［J］.草業(yè)學(xué)報，2012，21（3）：132－137.

［30］ 席慶國，洪浩.外來植物奇崗的生物學(xué)特征［J］.草業(yè)科學(xué)，2008，25（2）：26－28.

［31］ 李良勇，謝鵬飛，劉峰，等.湖南瀏陽煙區(qū)氣候土壤因素和煙葉質(zhì)量特點［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，32（5）：497－501.

［32］ Dafni A.Pollination Ecology［M］.New York：Oxford University Press，1992：1－57.

［33］ Mcintosh M E.Flowering phenology and reproductive output in two sister species of Ferocactus（Cactaceae）［J］.Plant Ecology，2002，159：1－13.

［34］ 馮靜儀，張振宇，李興詩，等.一種優(yōu)良的減數(shù)分裂實驗材料及其制片［J］.生物學(xué)通報，1986，（09）：18.

［35］ 劉亮.芒屬，雙藥芒屬，荻屬［A］.陳守良，莊體德，方文哲，等.中國植物志［M］.北京：科學(xué)出版社，1997：4－26.

［36］ Jensen E，Robson P，Norris J，etal.Flowering induction in the bioenergy grassMiscanthussacchariflorusis a quantitative short－day response，whilst delayed flowering under long days increases biomass accumulation［J］.Journal of Experimental Botany，2013，64（2）：541－552.

［37］ 吳文新，王洪銘.菊花花期調(diào)控技術(shù)的研究概況及展望［J］.福建農(nóng)業(yè)科技，2001，3：21－23.

［38］ 季孔庶，楊秀艷，楊德超，等.鵝掌楸屬樹種物候觀測和雜種家系苗光合日變化［J］.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2002，26（6）：28－32.

［39］ Ollerton J，Lack A.Relationships between flowering phenology，plant size and reproductive success inLotuscorniculatus（Fabaceae）［J］.Plant Ecology，1998，139（1）：35－47.

［40］ Ollerton J，Diaz A.Evidence for stabilizing selection acting on flowering time inArummaculatum（Araceae）：the influence of phylogeny on adaptation［J］.Oecologia，1999，119（3）：340－348.

［41］ 李新蓉，譚敦炎，郭江.遷地保護條件下兩種沙冬青的開花物候比較研究［J］.生物多樣性，2006，14（3）：241－249.

［42］ Augspurger C K.Phenology，flowering synchrony，and fruit set of six neotropical shrubs［J］.Biotropical，1983，15（4）：257－267.

［43］ 肖宜安，何平，李曉紅.瀕危植物長柄雙花木開花物候與生殖特性［J］.生態(tài)學(xué)報，2004，24（1）：14－21.

［44］ 趙元杰.芒繁育系統(tǒng)研究［D］.長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［45］ 張春，王曉麗，于海清，等.擬鵝觀草屬與鵝觀草屬和披堿草屬屬間及種間雜種的細胞學(xué)研究［J］.草業(yè)學(xué)報，2009，18（3）：86－93.

［46］ Ma X F，Jensen E，Alexandrov N，etal.High resolution genetic mapping by genome sequencing reveals genome duplication and tetraploid genetic structure of the diploidMiscanthussinensis［J］.PLoS One，2012，7（3）：1－11.

［47］ 詹秋文，高麗，張?zhí)煺?蘇丹草與高粱染色體核型比較研究［J］.草業(yè)學(xué)報，2006，15（2）：100－106.

［48］ 于卓，云錦風(fēng)，馬有志，等.加拿大披堿草×野大麥三倍體雜種染色體的分子原位雜交鑒定［J］.遺傳學(xué)報，2004，31（7）：735－739.