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    依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞NF—κB和IL—6,IL—8表達(dá)及凋亡的影響

    2014-04-10 16:26:10王媛媛曹建陳勤
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2014年7期
    關(guān)鍵詞:過氧化氫達(dá)拉脂質(zhì)

    王媛媛+曹建+陳勤+等

    1.南昌市第三醫(yī)院心內(nèi)科,江西南昌 330009;2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院麻醉科,江西南昌 330006

    [摘要] 目的 探討依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的影響及NF-κB和白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)表達(dá)。 方法 體外培養(yǎng)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,用過氧化氫氧化應(yīng)激建立肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡細(xì)胞模型,將細(xì)胞分為對照組、過氧化氫組、依達(dá)拉奉-過氧化氫組。用MTT法檢測依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖能力的影響,流式細(xì)胞儀檢測依達(dá)拉奉對氧化應(yīng)激肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響,采用ELISA試劑盒及谷胱甘肽(GSH)、脂質(zhì)過氧化物(MDA)試劑盒檢測IL-6、IL-8及GSH、MDA含量,用Western-blot方法檢測氧化應(yīng)激肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中的NF-κB蛋白表達(dá)。 結(jié)果 依達(dá)拉奉-過氧化氫組細(xì)胞生長抑制率為(22.3±3.1)%,明顯低于過氧化氫組[(37.5±2.4)%],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。依達(dá)拉奉-過氧化氫組MDA含量低于過氧化氫組,GSH含量高于過氧化氫組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。依達(dá)拉奉-過氧化氫組IL-6、IL-8含量低于過氧化氫組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。依達(dá)拉奉-過氧化氫組細(xì)胞凋亡率[(14.67±0.50)%]明顯低于過氧化氫組[(38.88±0.80)%],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。過氧化氫+依達(dá)拉奉組NF-κB蛋白水平(2.106±0.012)低于過氧化氫組(4.216±0.127),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。 結(jié)論 依達(dá)拉奉具有抑制氧化應(yīng)激后所誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡、下調(diào)NF-kB和IL-6、IL-8表達(dá)的作用。

    [關(guān)鍵詞] 依達(dá)拉奉;氧化應(yīng)激;核因子-κB;白介素-6;白介素-8;肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞;凋亡

    [中圖分類號] R563 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210(2014)03(a)-0008-05

    Effects of Edaravone on apoptosis and the expressions of NF-κB, IL-6, IL-8 in lung epithelial type Ⅱ cells

    WANG Yuanyuan1 CAO Jian2 CHEN Qin1 OUYANG Xianguo1 SONG Guoliang1

    1.Department of Cardiology, the Third Hospital of Nanchang City, Jiangxi Province, Nanchang 330009, China; 2.Department of Anesthesiology, the Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Jiangxi Province, Nanchang 330006, China

    [Abstract] Objective To explore the effects of Edaravone on apoptosis and the expressions of NF-κB, IL-6, IL-8 in lung epithelial type Ⅱ cells. Methods Lung epithelial type Ⅱ cells were cultured in vitro, the apoptosis of lung epithelial type Ⅱ cells model was established by hydrogen peroxid. Lung epithelial type Ⅱ cells were divided into three groups: control group, hydrogen peroxide group and edaravone-hydrogen peroxide group, lung epithelial type Ⅱ cells was treated by edaravone. The proliferation rate of lung epithelial type Ⅱ cells were detected by MTT; the apoptosis rate of lung epithelial type Ⅱ cells was determined though flow cytometry; the expression of IL-6, IL-8, GSH, MDA was detected by ELISA kit, GSH kit, MDA kit, the NF-κB protein expression after edaravone treatment was examined through Western-blot. Results Cell growth inhibition rate in edaravone-hydrogen peroxide group [(22.3±3.1) %] was lower than that in hydrogen peroxide group [(37.5±2.4) %], the difference was statistically significant (P < 0.05). MDA content in edaravone-hydrogen peroxide group was lower than that in hydrogen peroxide group, GSH content in edaravone-hydrogen peroxide group was higher than that in hydrogen peroxide group, the differences were statistically significant (P < 0.05). IL-6, IL-8 content in edaravone-hydrogen peroxide group was lower than that in hydrogen peroxide group, the difference was statistically significant (P < 0.05). Cell apoptosis rate in edaravone-hydrogen peroxide group [(14.67±0.50) %] was lower than that in hydrogen peroxide group [(38.88±0.80) %], the difference was statistically significant (P < 0.05). NF-κB protein level in edaravone-hydrogen peroxide group (2.106±0.012) was lower than that in hydrogen peroxide group (4.216±0.127), the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion Edaravone can inhibit lung epithelial type Ⅱ cells apoptosis against -oxidative stress and down-regulate the expressions of NF-κB and IL-6, IL-8.

    [Key words] Edaravone; Oxidative stress; NF-κB; IL-6; IL-8; Lung epithelial type Ⅱ cells; Apoptosis

    急性肺損傷發(fā)病過程中,細(xì)胞因子可能通過抑制炎癥細(xì)胞凋亡延長炎性反應(yīng)時間,促進肺泡上皮細(xì)胞凋亡而參與急性肺損傷的炎性反應(yīng)過程[1]。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞是肺部特異性細(xì)胞,可以分泌肺泡表面活性物質(zhì),能降低肺泡表面張力,對穩(wěn)定肺泡形態(tài)有一定作用。Ⅱ型細(xì)胞又是肺泡的儲備細(xì)胞,當(dāng)肺上皮遭受損害,會導(dǎo)致其增生,它是急性肺損傷發(fā)病過程中的重要效應(yīng)細(xì)胞[2]。依達(dá)拉奉目前研究表明具有清除自由基,抑制氧化性應(yīng)激,抑制細(xì)胞凋亡,可用于治療氧化應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的神經(jīng)退行性疾病[3]。本研究通過建立氧化應(yīng)激誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞細(xì)胞凋亡模型,探討依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的影響及其與炎癥因子的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    RPMI1640培養(yǎng)基HEPES,四氮唑藍(lán)(MTT),二甲基亞砜(DMSO)小牛血清(Gibico公司),IL-6,IL-8 ELISA試劑盒:武漢博士德公司。AnnexinⅤ-PI凋亡檢測試劑盒(北京寶賽生物技術(shù)有限公司),堿性磷酸酶(AP)顯色底物,anti-NF-κB,小鼠單抗辣根酶標(biāo)記兔抗山羊IgG;anti-β-actin山羊單抗(SantaCruz產(chǎn)品)。依達(dá)拉奉(先聲藥業(yè))。

    1.2 人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)氧化應(yīng)激

    人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞由南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科實驗室凍存。細(xì)胞用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液在5%CO2,37℃,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng),細(xì)胞呈貼壁生長,用0.25%的胰酶和0.02%EDTA(1∶1)消化傳代,用于實驗的細(xì)胞均處于指數(shù)生長期。根據(jù)文獻(xiàn)[4]報道方法,分別選用0.1、0.5、1.0 mmol/L過氧化氫(H2O2)處理肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞24 h。實驗分為對照組(無H2O2處理的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞)、過氧化氫處理的過氧化氫組及依達(dá)拉奉(20 μmol/L)-過氧化氫處理的依達(dá)拉奉-過氧化氫組。

    1.3 肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞體外生長活性的檢測(MTT法)及谷胱甘肽(GSH),脂質(zhì)過氧化物(MDA)含量測定

    取指數(shù)生長期的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,分別用生理鹽水及各濃度過氧化氫(0.1、0.5、1.0 mmol/L)處理,采用0.25%胰蛋白酶消化,以不含細(xì)胞的培養(yǎng)液做空白對照。以1×104/孔的密度接種于96孔板,每孔設(shè)3個復(fù)孔。觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞貼壁后,加入20 μmol/L依達(dá)拉奉,置于孵箱(37℃,CO2)培養(yǎng)24、48、72 h。再加入MTT 20 μl顯色,吸棄孔內(nèi)上清液,每孔加入DMSO,震搖15 min溶解結(jié)晶,用酶聯(lián)免疫儀測490 nm處的吸光度(A490)值。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞生長抑制率=(1-實驗組平均A490值/對照組平均A490值)×100%。采用GSH試劑盒,MDA試劑盒檢測GSH、MDA含量。

    1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗

    人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞按1×104/孔接種于96孔板上,分為對照組、氧化應(yīng)激組、依達(dá)拉奉-過氧化氫組,培養(yǎng)結(jié)束后收集上清,根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果對上清進行適當(dāng)稀釋,按ELISA試劑盒說明進行試驗。

    1.5 AnnexinV-PI

    雙標(biāo)記法分析肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡率。如上法收集氧化應(yīng)激組及藥物處理72 h后各組細(xì)胞,將細(xì)胞收獲后,用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌1次,-20℃ 75%乙醇固定過夜,取出離心收集細(xì)胞,PBS洗滌2次,加入10 g/L Rnase 37℃孵育15 min,再加入碘化丙錠(PI)染色30min,尼龍網(wǎng)過濾,采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡,采用CELIQUEST 軟件分析早期細(xì)胞凋亡率。

    1.6 Western blot法檢測NF-κB蛋白水平

    取對照組、過氧化氫組、依達(dá)拉奉-過氧化氫組細(xì)胞,加入細(xì)胞裂解液,提取總蛋白,收集上清液,考馬斯亮藍(lán)法進行擔(dān)保定量。SDS-PAGE分離樣品后電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上,TBST常溫下封閉過夜后,分別加入anti-NF-κB小鼠單抗(一抗)、室溫下免疫沉淀1 h,加入辣根酶標(biāo)記兔抗山羊IgG(二抗)2 h。洗膜,顯色。用Gel-ProAnalyzer分析軟件分析通道蛋白的灰度值。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用統(tǒng)計軟件SPSS 15.0對數(shù)據(jù)進行分析,正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較采用方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞生長增殖能力的影響

    過氧化氫氧化應(yīng)激處理肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞后,過氧化氫組細(xì)胞生長抑制率為(37.5±2.4)%,明顯高于對照組的(3.8±0.8)%,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01),氧化應(yīng)激可以導(dǎo)致細(xì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的增殖能力下降。依達(dá)拉奉干預(yù)后,依達(dá)拉奉-過氧化氫組細(xì)胞生長抑制率為(22.3±3.1)%,與過氧化氫組比較,細(xì)胞生長抑制率下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05),細(xì)胞的增殖能力較前升高。提示依達(dá)拉奉-過氧化氫組可以改善氧化應(yīng)激對肺泡Ⅱ上皮細(xì)胞的細(xì)胞抑制,提高細(xì)胞增殖能力。見表1。

    表1 各組肺泡II型上皮細(xì)胞抑制率比較(%,x±s)

    注:對照組比較,*P < 0.01;與過氧化氫組比較,#P < 0.05

    2.2 依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物、谷胱甘肽水平的影響

    MDA是脂質(zhì)過氧化的分解產(chǎn)物,是反映組織氧化損傷水平的指標(biāo)之一。GSH在細(xì)胞內(nèi)能清除過氧化物代謝產(chǎn)物,阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng),從而起到保護細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的作用。本實驗提示,過氧化氫處理后,與對照組比較,細(xì)胞產(chǎn)生MDA顯著增加,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01),細(xì)胞在氧化應(yīng)激后,細(xì)胞損傷程度明顯增加。過氧化氫處理后,與對照組比較,GSH含量顯著下降,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01),氧化應(yīng)激可以通過減少谷胱甘肽對細(xì)胞的保護作用引起細(xì)胞損傷。經(jīng)依達(dá)拉奉處理后,與過氧化氫組相比,MDA含量下降(P < 0.05),GSH含量升高(P < 0.05),提示依達(dá)拉奉可以通過增加谷胱甘肽含量,清除過氧化物代謝,從而減少細(xì)胞氧化損傷水平。見表2。

    表2 各組脂質(zhì)過氧化物、谷胱甘肽水平比較(x±s,n = 6)

    注:與對照組比較,*P < 0.01,與過氧化氫組比較,#P < 0.05;MDA:脂質(zhì)過氧化物;GSH:谷胱甘肽

    2.3 依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞IL-6、IL-8含量的影響

    對照組IL-6、IL-8含量較低,過氧化氫組IL-6、IL-8表達(dá)升高,提示氧化應(yīng)激可以誘導(dǎo)炎癥因子IL-6、IL-8釋放。依達(dá)拉奉處理24 h后,可以減少炎癥因子表達(dá),改善氧化應(yīng)激損傷,炎癥因子IL-6、IL-8含量下降,與過氧化氫組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。見表3。

    表3 依達(dá)拉奉對氧化應(yīng)激后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分泌IL-6

    和IL-8的影響(ng/L,n = 6,x±s)

    注:對照組比較,*P < 0.01;與過氧化氫組比較,#P < 0.05;IL-6:白介素-6;IL-8:白介素-8

    2.4 依達(dá)拉奉對氧化應(yīng)激后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡率的影響

    通過流式細(xì)胞儀檢測,對照組、過氧化氫組、過氧化氫-依達(dá)拉奉組細(xì)胞的凋亡率分別為(4.97±0.40)%、(38.88±0.80)%、(14.67±0.50)%,氧化應(yīng)激對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞損傷,細(xì)胞凋亡率明顯增加,在依達(dá)拉奉處理后,可以減輕細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)和炎性反應(yīng),減少細(xì)胞損傷,從而減少細(xì)胞凋亡。見表4。

    表4 依達(dá)拉奉對氧化應(yīng)激后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡率的影響(%,x±s)

    注:與對照組比較,*P < 0.01;與過氧化氫組比較,#P < 0.05

    2.5 依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞細(xì)胞NF-κB蛋白水平的影響

    過氧化氫處理建立氧化應(yīng)激模型后,NF-κB在細(xì)胞外刺激下被激活,過氧化氫組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞細(xì)胞NF-κB蛋白水平增高,與對照組比較,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。依達(dá)拉奉干預(yù)后,過氧化氫-依達(dá)拉奉組NF-κB蛋白水平與過氧化氫組比較有所下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05),可以抑制炎性反應(yīng)。見表5。

    表5 各組細(xì)胞NF-κB蛋白水平的影響(x±s)

    注:與對照組比較,*P < 0.01;與過氧化氫組比較,#P < 0.05

    3 討論

    目前認(rèn)為,急性肺損傷是機體過度炎性反應(yīng)導(dǎo)致肺血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞廣泛破壞的結(jié)果。急性肺損傷時出現(xiàn)的表面活性物質(zhì)衰竭的共同的病理特點是肺泡的機械性損傷和肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的過度凋亡[5]。

    本研究通過氧化應(yīng)激建立肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡模型,通過MDA及GSH試劑盒檢測MDA、GSH水平,MDA是脂質(zhì)過氧化的分解產(chǎn)物,是反映組織氧化損傷水平的指標(biāo)之一。GSH在細(xì)胞內(nèi)能阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng),從而起到保護細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的作用。近年來發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡過程中具有還原性GSH耗竭現(xiàn)象,GSH水平與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。實驗發(fā)現(xiàn)過氧化氫處理后,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞GSH含量下降,MDA升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。氧化應(yīng)激損傷誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,細(xì)胞生長抑制率增加,細(xì)胞凋亡率升高。

    NF-κB是一種重要的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞炎性反應(yīng)、免疫反應(yīng)以及細(xì)胞凋亡等過程中起著重要的作用。NF-κB通常處于非激活狀態(tài),當(dāng)受到細(xì)胞外刺激,在IKK酶的激活作用下磷酸化,啟動調(diào)節(jié)炎癥因子,本研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激可激活NF-κB,誘導(dǎo)產(chǎn)生多種促炎癥細(xì)胞因子(如IL-6,TNF-α、IL-1、IL-8等)[6-7],加重促炎性和抗炎癥細(xì)胞因子之間的失衡。

    IL-8是中性粒細(xì)胞重要的趨化因子,是炎癥性疾病的重要介質(zhì),在抗感染、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)以及抗腫瘤方面有重要作用。IL-8對特異性和非特異性的免疫細(xì)胞具有強烈的趨化作用,其中主要是對嗜中性粒細(xì)胞的趨化和激活作用,導(dǎo)致細(xì)胞變形反應(yīng),釋放溶酶體,形成超氧化物,從而促進炎性反應(yīng)[8-9],對淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞也有趨化作用。IL -6可上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞的ICAM-1,并使內(nèi)皮表達(dá)E-選擇素,使中性粒細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面,形成小栓子,導(dǎo)致微循環(huán)障礙[10-11],還能促進中性粒細(xì)胞氧化反應(yīng),從而使中性粒細(xì)胞在炎性反應(yīng)部位數(shù)量增多,延緩中性粒細(xì)胞的凋亡,超氧陰離子釋放增多,加重炎性反應(yīng)[12-13]。

    本研究通過氧化應(yīng)激建立肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的凋亡模型,發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時,炎癥因子IL-6、IL-8、NF-κB表達(dá)增高,而采用依達(dá)拉奉干預(yù)后,細(xì)胞凋亡減少,IL-6、IL-8、NF-κB表達(dá)下降。

    由此推測,采用雙氧水對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞進行處理后,氧化應(yīng)激激活了NF-κB的表達(dá),進而啟動了IL-6、IL-8等炎性因子的表達(dá),從而導(dǎo)致一系列的炎性反應(yīng)和內(nèi)皮通透性增高,構(gòu)成了肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的物質(zhì)基礎(chǔ)。

    而依達(dá)拉奉是一種強效的新型羥自由基清除劑,經(jīng)單電子轉(zhuǎn)移作用清除自由基,通過自由基中間體轉(zhuǎn)化,變?yōu)榉€(wěn)定的氧化產(chǎn)物[14-15]??梢詼p輕中性粒細(xì)胞浸潤及細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng),抑制脂質(zhì)自由基生成,促炎細(xì)胞因子表達(dá)下調(diào)[16-17]。

    因此依達(dá)拉奉干預(yù)后,不僅可以通過自由基清除功能減輕氧化應(yīng)激的作用,減少氧化應(yīng)激對NF-κB的活化影響,還有可能直接影響NF-κB、IL-6、IL-8的表達(dá)抑制炎性反應(yīng)的影響,減輕凋亡。此外,有研究證實,NF-κB上調(diào)可促進部分細(xì)胞存活基因和凋亡抑制基因表達(dá),或活化持續(xù)性生長信號,從而保護細(xì)胞免于調(diào)亡[18-19]。本研究顯示,NF-κB下調(diào),IL-6、IL-8表達(dá)下調(diào),細(xì)胞凋亡減少。提示肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡受炎癥因子的影響更加明顯,而NF-κB下調(diào)所致凋亡基因升高在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡處于次要地位,其具體機制還需要進一步深入研究。

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    (收稿日期:2013-11-18 本文編輯:李繼翔)

    [1] 農(nóng)凌波.急性肺損傷中的細(xì)胞凋亡及凋亡調(diào)控[J].國外醫(yī)學(xué):呼吸系統(tǒng)分冊,2002,22(3):149-151.

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    (收稿日期:2013-11-18 本文編輯:李繼翔)

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    [8] 林振和.核因子NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)節(jié)研究進展[J].國外醫(yī)學(xué):免疫學(xué)分冊,2004,27(4):234-238.

    [9] 徐龍憲,王松.白介素-8與臨床相關(guān)疾病研究進展[J].中國綜合臨床,2000,16(10):733-734.

    [10] Mahmoud R,Nehal A,F(xiàn)athi B,et al. AIterations of the CD4+,CD8+,T cell subsets,interleukins-6,IL-10,IL-17,tumor necrosis factor-α and soluble intercellular adhe sion molecule-1 in rheumatoid arthritis and osteoarthritis:preliminary observations [J]. Pathol Oncol Res,2008,14(3):321-328.

    [11] 周君琳.肢體缺血再灌注繼發(fā)肺損傷的發(fā)生機制[J].國外醫(yī)學(xué):生理病理科學(xué)與臨床分冊,2000,20(4):332-335.

    [12] Dienz O,Rincon M. The effects of IL-6 on CD4 T cell responses [J]. Clin Immunol,2009,130(1):27-33.

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    [14] Kikuchi K,Kawahara KI,Uchikado H,et al. Potential of edaravone for neuroprotection in neurologic diseases that do not involve cerebral infarction [J]. Exp Ther Med,2011,2(5):771-775.

    [15] 曹建,王媛媛,胡衍輝,等.依達(dá)拉奉對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的保護作用[J].臨床麻醉學(xué)雜志,2013,29(2):185-188.

    [16] 郭芳,蘇杭,周惠聯(lián),等.急性肺損傷新生大鼠AQP5及CC16變化的臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2013,13(1):17-20.

    [17] 姚艷敏,王希柱,宋巧鳳,等.急性肺血栓栓塞癥炎性因子與肺損傷關(guān)系的實驗研究[J].疑難病雜志,2013,12(3):217-219.

    [18] 武宙陽,明鈺,姚尚龍,等.依達(dá)拉奉對急性肺損傷的治療作用及其機制探討[J].華中科技大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2011,40(3):329-332.

    [19] 蔣葉,余書勤.核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路在內(nèi)毒素致急性肺損傷中的作用[J].中國急救醫(yī)學(xué),2004,24(12):902-904.

    (收稿日期:2013-11-18 本文編輯:李繼翔)

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