UMOD基因啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與CKD患者發(fā)病年齡的關系

白亞玲，徐金升，張文博，張勝雷，張俊霞，崔立文

（河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院，石家莊 050011）

據(jù)統(tǒng)計，目前我國慢性腎臟?。–KD）患病率已達10.8%［1］。隨著年齡的增長，CKD 的發(fā)病率、終末期腎衰竭發(fā)生率及患者病死率均增加，發(fā)病年齡是影響 CKD 預后的重要因素［2～4］。研究發(fā)現(xiàn)，UMOD基因啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與CKD的發(fā)病相關［5，6］;但 UMOD 基因啟動子區(qū)的多態(tài)性與CKD患者發(fā)病年齡是否存在相關性尚不清楚。我們對2002～2008年確診的89例CKD患者靜脈血UMOD基因啟動子區(qū)的多態(tài)性進行了檢測，現(xiàn)分析結果，探討其與CKD發(fā)病年齡的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2002年8月～2008年8月我院收治的CKD患者89例作為病例組，男46例、女43例，年齡（47.9±15.5）歲。均符合 2002年 KDOQI指南CKD診斷標準:腎臟損傷指標（如蛋白尿、血尿或解剖學異常）或腎小球濾過率（GFR）＜60 mL/（min·1.73m2），任一指標異常 ＞3個月。病因包括腎小球腎炎35例、糖尿病腎病18例、高血壓腎損害5例、梗阻性腎病14例、其他17例。以患者首次診斷為CKD時的年齡為發(fā)病年齡。選擇與病例組年齡、性別相匹配的體檢健康者104例作為對照組，其中男62例、女42例，年齡（49.8±13.6）歲。兩組年齡、性別比例差異均無統(tǒng)計學意義。所有受試者經(jīng)河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院倫理委員會批準并簽訂知情同意書。

1.2 UMOD基因啟動子區(qū)多態(tài)性檢測 采用PCR法。病例組于首次住院清晨、對照組于體檢時空腹采血，取靜脈血2 mL，應用全血DNA萃取試劑盒迅速提取DNA，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。根?jù)Ensembl網(wǎng)站提供的 UMOD基因序列（Gene ID:ENSG00000169344）用在線Primer 3軟件設計引物，上游引物:5＇-TTTCTCCATCCTGTCCCACT-3＇，下游引物:5＇-ATTCCAACCCAAACTCCC-3＇。用 PCR 儀 擴增長481 bp的UMOD基因組DNA片段。PCR反應體系為25 μL，包含DNA 125 ng，上下游引物各10 pmol，Master Mix 12.5 μL，DEPC 水7.5 μL。反應程序:95℃預變性2 min，95℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，38個循環(huán);最后72℃延伸5 min。將PCR反應產(chǎn)物送至上海生工生物工程技術服務有限公司，采用ABI PRISM 3100 DNA序列分析儀對PCR擴增產(chǎn)物進行測序，采用DNAman軟件分析兩組UMOD基因序列，與UMOD標準序列進行對比。比較兩組UMOD基因多態(tài)位點的差異，尋找出與CKD發(fā)病相關的多態(tài)位點。

1.3 CKD患者UMOD基因啟動子區(qū)多態(tài)性及臨床特征與發(fā)病年齡的關系 根據(jù)基因多態(tài)性測序結果，將病例組分為攜帶及不攜帶所測多態(tài)位點者，分析所測多態(tài)位點與CKD患者發(fā)病年齡的關系;收集患者就診時的性別、吸煙史、體重指數(shù)（BMI）、平均動脈壓等臨床資料，分析性別、吸煙史、BMI、平均動脈壓與發(fā)病年齡的關系。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件行統(tǒng)計學處理。UMOD基因單核苷酸多態(tài)位點與發(fā)病年齡關系的分析采用Kaplan-Meier方法，組間比較采用Log-rank檢驗，采用COX比例風險回歸模型進行多因素分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 UMOD啟動子區(qū)基因多態(tài)性 病例組和對照組共發(fā)現(xiàn)突變位點23個，其中3個位點出現(xiàn)頻率大于5%，分別為-1945、-1660、-1617（rs13333226）。病例組、對照組-1 617（rs13333226）G等位基因的頻率分別為15.7%和6.7%，病例組高于對照組（P＜0.05）;兩組其余位點的基因多態(tài)性差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 CKD患者UMOD基因多態(tài)性及臨床特征與發(fā)病年齡的關系 病例組攜帶rs13333226A及攜帶rs13333228G者發(fā)病年齡分別為（45.92±15.14）、（58.85±13.78）歲，前者發(fā)病年齡小于后者（P＜0.01）。單因素分析結果顯示，病例組BMI≥22者發(fā)病年齡＜45歲者的比例高于BMI＜22者，吸煙者發(fā)病年齡＜45歲者的比例高于非吸煙者（P均＜0.05），患者性別及平均動脈壓與發(fā)病年齡無相關性。將單因素分析有統(tǒng)計學意義的因素納入多因素COX比例風險回歸模型，結果顯示 UMOD基因rs13333226的多態(tài)性是CKD患者發(fā)病年齡的獨立影響因素;OR=0.494，95%CI為 0.268 ～0.913，P＜0.05。

3 討論

CKD起病隱襲，較難早期發(fā)現(xiàn)，呈持續(xù)性進展，最終多導致終末期腎衰竭。研究發(fā)現(xiàn)，隨年齡的增長，CKD的發(fā)病率增加，20～39歲CKD的發(fā)病率為4%，≥70歲人群中CKD的發(fā)病率高達47%［7］;隨年齡的增長，CKD的全因死亡率及心血管死亡風險增加［5，6］。因此CKD發(fā)病年齡是判斷CKD預后的重要因素;研究CKD發(fā)病年齡的影響因素有助于對患者發(fā)病時間的判斷以及病程、發(fā)展和預后的評估。

UMOD基因位于人體16號染色體20 344 374～20 367 623 bp之間，其編碼的蛋白為尿調節(jié)蛋白。尿調節(jié)蛋白特異性表達于腎臟，是生理狀況下人體尿中最多的一種蛋白，正常成人分泌量為20～200 mg/24 h。近年研究發(fā)現(xiàn)，UMOD基因啟動子區(qū)的變異與 GFR、血壓、血清中尿酸水平有密切關系［4～6，8］。歐洲全基因組（GWAS）相關研究表明，UMOD基因啟動子區(qū)的多態(tài)性與CKD發(fā)病風險及GFR有關［5，6］。 本研究發(fā)現(xiàn)，病例組-1617（rs13333226）G等位基因的頻率高于對照組，提示CKD患者rs13333226 G等位基因的頻率增高，rs13333226多態(tài)性在CKD發(fā)病過程中可能發(fā)揮一定作用。

近年研究發(fā)現(xiàn)，隨年齡的增長，CKD發(fā)病率增加［7］。CKD發(fā)病年齡的影響因素除高血壓、糖尿病、吸煙等外，遺傳因素也發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，攜帶rs13333226G的CKD患者發(fā)病年齡大于攜帶rs13333226A者，BMI≥22的CKD患者發(fā)病年齡＜45歲的比例高于BMI＜22者，吸煙患者發(fā)病年齡＜45歲的比例高于非吸煙者，多因素COX比例風險回歸模型分析顯示，rs13333226的多態(tài)性是CKD患者發(fā)病年齡的獨立影響因素，攜帶rs13333226GCKD多發(fā)生較晚。Daniel等［9］也發(fā)現(xiàn)UMOD啟動子區(qū)多態(tài)性對高齡患者血肌酐的影響更明顯。尿調節(jié)蛋白是腎臟特異性蛋白，在腎臟組織中可激活中性粒細胞、單核巨噬細胞和成纖維細胞引起炎癥反應，促進CKD的發(fā)生及進展［10］。近來研究發(fā)現(xiàn)攜帶rs13333226G等位基因者尿中尿調節(jié)蛋白的含量降低［6］，考慮 UMOD基因啟動子區(qū)rs13333226多態(tài)性影響CKD發(fā)病年齡的機制可能是調節(jié)尿調節(jié)蛋白的合成。

綜上所述，UMOD基因啟動子區(qū)rs13333226的多態(tài)性與CKD發(fā)病年齡相關，攜帶rs13333226A的CKD患者發(fā)病年齡小于攜帶 rs13333226G者。UMOD基因啟動子區(qū)的多態(tài)性可作為CKD發(fā)病年齡的預測指標。但本研究受樣本例數(shù)及受檢者種族、地區(qū)的限制，UMOD基因啟動子區(qū)的多態(tài)性能否作為CKD患者發(fā)病年齡的獨立預測因子，還有待大樣本的研究進一步驗證。

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