糙葉五加葉化學成分研究

李 芝，鄒親朋，李小軍，葉惠煊，黃瑋超，謝 霞，劉向前*

（1.湖南中醫(yī)藥大學藥學院，湖南 長沙 410208；2.長沙博海生物科技有限公司，湖南 長沙 410205）

糙葉五加葉化學成分研究

李 芝1，鄒親朋2，李小軍1，葉惠煊1，黃瑋超1，謝 霞1，劉向前1*

（1.湖南中醫(yī)藥大學藥學院，湖南 長沙 410208；2.長沙博海生物科技有限公司，湖南 長沙 410205）

目的 研究糙葉五加葉的化學成分。方法 采用大孔吸附樹脂、正反相硅膠、Sephadex LH-20凝膠等柱層析方法及重結晶手段進行分離純化，并采用波譜技術和化合物的理化性質鑒定其結構。結果 從糙葉五加葉中分離并鑒定了10個單體化合物，分別為：豆甾醇(1)、胡蘿卜苷(2)、蜜蠟酸(3)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、蟲漆蠟酸(5)、正十六烷酸(6)、山奈酚(7)、蘆丁(8)、槲皮素(9)、正三十四烷酸(10)。結論 研究結果進一步明確了糙葉五加葉的物質基礎，為今后開發(fā)該植物提供了實驗數(shù)據(jù)。

糙葉五加葉；化學成分；結構鑒定

糙葉五加(Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms)又名亨利五加，屬于五加科五加屬植物，為中國特有植物，廣泛分布于湖南、湖北、浙江、安徽等地。其根皮作為“五加皮”收載于湖南省中藥材地方標準，具有祛風濕、補肝腎、活血化瘀等功效，民間用其治療風濕痹痛、水腫、跌打損傷等[1]。已從糙葉五加根皮中分離得到了紫丁香苷、紫丁香酚苷、紫丁香樹脂醇、β-谷甾醇、豆甾醇、海松酸(+)-芝麻素、灑維寧和刺五加苷E等化合物[2]；但對糙葉五加葉的化學成分及其活性研究少有報道。本課題組對五加屬植物開展了系統(tǒng)研究，前期已從糙葉五加葉抗氧化活性部位中分離得到了新綠原酸、4-O-咖啡?？崴?、異槲皮苷、山柰酚-3-蕓香糖苷、異綠原酸B、洋薊素、異綠原酸A、異綠原酸C和槲皮素-3，7-二葡萄糖苷等化合物，并對其中多個化合物進行了HPLC的定量研究[3-4]。本文僅對糙葉五加葉抗氧化活性部位中的石油醚(PE)萃取部位、乙酸乙酯(EtOAc)萃取部位和正丁醇(n-BuOH)萃取部位得到10個單體化合物，現(xiàn)將成分分離鑒定的方法與結果報道如下。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

SGWX-4型顯微溶點測定儀 (上海精密科學儀器有限公司)；AVATAR-360型傅里葉紅外光譜儀（美國Nicolet公司）；JMS-700型高分辨質譜儀 （日本電子株式會社）；QP-2010型氣質聯(lián)用儀（日本島津公司）；UNITY-500型二維核磁共振儀（美國Varian公司）；INOVA-400型一維核磁共振儀 （美國Varian公司）。

1.2 材料

藥材于2011年10月采自湖南省新化縣，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學藥學院劉向前教授鑒定為糙葉五加Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms葉，干燥后備用。正相層析硅膠 (青島海洋化工廠)，MDS-5-300反相硅膠 （北京中元天成科技發(fā)展有限公司）；Diaion HP-20P（日本三菱化學公司）；Sephadex LH-20（瑞典 Pharmacia公司）；D101大孔樹脂 （天津光復精細化工研究所）；石油醚、甲醇等試劑均為分析純。

2 方法

干燥的糙葉五加葉粉碎，稱質量1 kg，分別加入20 L 95%、80%、60%乙醇冷浸提取，最后加10 L水回流提取2次，2 h/次，合并提取液，回收試劑，得到提取物396 g。熱水混懸該提取物依次使用PE、EtOAc、n-BuOH萃取，得到PE萃取物14.0 g、EtOAc萃取物23.3 g、n-BuOH萃取物67.0 g。

將PE萃取物14.0 g進行硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，得6個餾分(P.Ⅰ→Ⅶ)。P.Ⅱ(0.3 g)上正相硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇洗脫，得到化合物1(162 mg)。P.Ⅶ經(jīng)重結晶，得到化合物2 (379 mg)。P.Ⅱ (1.4 g)上硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇洗脫，得P.Ⅱ-1和P.Ⅱ-2，得到化合物3(465mg)和化合物5(75 mg)。P.Ⅵ經(jīng)D101大孔吸附樹脂吸附，甲醇-水梯度洗脫，得到4個餾分(P.Ⅵ-1→4)，P.Ⅵ-2上 反相硅膠柱分離，得到化合物6(140 mg)。P.Ⅲ (0.4 g)經(jīng)重結晶，得到化合物10(70 mg)。

將EtOAc萃取物23.3 g上D101大孔吸附樹脂柱以甲醇-水梯度洗脫，得到5個餾分 （E.Ⅰ→Ⅵ）。E.Ⅱ上硅膠柱分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，得化合物9（14 mg）和化合物7（175 mg）。

將n-BuOH萃取物2.0 g，經(jīng)硅膠柱層析分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，得到化合物4（85 mg）和化合物8(1 250 mg)。

3 結構鑒定

化 合 物 1： 白 色 針 狀 結 晶 ，mp133~ 135℃，Liebermann-Burchard反應呈陽性，IRcm-1：3421(OH)，2960(C=C)，2937(CH3)，2867(CH)，1642 (C=C)，1465(CH2)，1380(CH3)，1060(C-O)等處有較強吸收峰；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.52(1H，m，H-3)，5.35(H，d，H-6)，0.69(3H，s，H-18)，1.01(3H，s，H-19)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，5.14(1H，dd，J= 6.6 Hz，H-22)，5.03(1H，dd，J=6.6 Hz，H-23)，0.93 (6H，d，J=6.9 Hz，H-26和H-27)，0.91(3H，d，J=6.6 Hz，H-29)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.3(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.9(C-5)，121.7 (C-6)，31.7(C-7)，31.7(C-8)，50.1(C-9)，36.2(C-10)，21.0(C-11)，39.6(C-12)，42.1(C-13)，56.9(C-14)，23.1 (C-15)，28.3(C-16)，55.9(C-17)，12.1(C-18)，19.7(C-19)，42.2(C-20)，21.4(C-21)，138.3(C-22)，129.3(C-23)，51.3(C-24)，34.0(C-25)，21.1(C-26)，18.7(C-27)，26.1(C-28)，12.4(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的化合物豆甾醇結構一致[5]，故鑒定化合物1為豆甾醇。

化合物2：白色粉末，mp 274~276℃，13C-NMR (150 MHz，C5D5N)δ：37.7(C-1)，30.4(C-2)，78.7(C-3)，40.3(C-4)，141.4(C-5)，121.9(C-6)，32.4(C-7)，32.4 (C-8)，50.3(C-9)，37.2(C-10)，21.5(C-11)，39.6(C-12)，42.8(C-13)，57.2(C-14)，24.7(C-15)，28.6(C-16)，56.8(C-17)，12.1(C-18)，19.5(C-19)，36.5(C-20)，19.2 (C-21)，34.6(C-22)，27.2(C-23)，46.5(C-24)，30.1(C-25)，19.5(C-26)，20.0(C-27)，23.8(C-28)，12.3(C-29)；glc：102.8(C-1’)，75.4(C-2’)，78.6(C-3’)，72.0 (C-4’)，78.1(C-5’)，63.0(C-6’)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[6]，故確定化合物2為胡蘿卜苷。

化合物3：白色針狀結晶，mp 92~93℃。IRcm-1：3464(OH)，2961(CH3)，2870(CH)，1703(C=O)，1453 (CH2)，758。EI-MS：m/z 452.5[M+]，424，396，382，368……97，85，71，57等一系列掉-CH2碎片峰；以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[7]，故確定該化合物為蜜蠟酸。

化合物4：淡黃色粉末，mp 239～241℃，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應陽性。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：5.47(1H，d，J=7.8，glc-H)，6.21 (1H，d，H-6)，6.41(1H，d，H-8)，6.84(1H，d，H-5’)，7.59(1H，d，J=2.0 Hz，H-2’)，7.53(1H，dd，J=1.8 Hz，8.0 Hz，H-6’)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：156.7(C-2)，133.8(C-3)，177.9(C-4)，161.7(C-5)，99.1 (C-6)，164.5(C-7)，94.2(C-8)，156.6(C-9)，104.4(C-10)，121.6(C-1’)，115.6(C-2’)，145.2(C-3’)，148.9(C-4’)，116.6(C-5’)，121.6(C-6’)；glc：101.3(C-1)，74.5 (C-2)，76.9(C-3)，70.4(C-4)，78.0(C-5)，61.4(C-6)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[8]，故鑒定化合物4為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5：白色針狀結晶，mp 94~95℃。EIMS：m/z 480.5[M+]，并出現(xiàn)了452，438，424，410……97，85，71，57等碎片峰，符合飽和脂肪酸的一般裂解規(guī)律。以上數(shù)據(jù)與蟲漆蠟酸的數(shù)據(jù)一致[9]，故確定該化合物為蟲漆蠟酸。

化合物6：白色粉末，mp 61~62℃。IRcm-1：2920 (CH3)，2850(CH)，1660(C=O)，1469(CH2)，719。EIMS：m/z 256.2[M+]，227，213，185，157，129，85，73，57等碎片峰；以上數(shù)據(jù)與參考文獻中十六烷酸比對一致[10]，故鑒定化合物6為十六烷酸。

化合物7：淡黃色粉末，mp 272~274℃，TLC分析三氯化鐵顯藍色，鹽酸-鎂粉反應呈陽性。13CNMR(150 MHz，DMSO)δ：147.1(C-2)，135.9(C-3)，176.2(C-4)，161.0(C-5)，98.4(C-6)，164.2(C-7)，93.7 (C-8)，156.5(C-9)，103.2(C-10)，121.9(C-1’)，129.7 (C-2’)，115.6(C-3’)，159.4(C-4’)，115.6(C-5’)，129.7 (C-6’)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[11]，故鑒定化合物7為山柰酚。

化合物8：黃色粉末，mp 179~182℃，ESITOF-MS顯示 [M+H]+m/z 611.303，其分子式為C27H30O16，1H-NMR (600 MHz，DMSO-d6)δ：5.34 (1H，d，J=7.2，glc-H)，4.38(1H，d，J=1.8，rha-H)，6.19 (1H，d，H-6)，6.38(1H，d，H-8)，6.84(1H，d，H-5’)，7.55(1H，d，J=2.4 Hz，H-2’)，7.53(1H，dd，J=2.4 Hz，8.4 Hz，H-6’)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：156.8(C-2)，133.7(C23)，177.8(C-4)，161.0(C-5)，99.1 (C-6)，164.5(C-7)，94.0(C-8)，157.0(C-9)，104.4(C-10)，121.6(C-1’)，115.5(C-2’)，145.2(C-3’)，148.8(C-4’)，116.7(C-5’)，122.0(C-6’)；glc：101.6(C-1)，74.5 (C-2)，76.3(C-3)，72.3(C-4)，76.9(C-5)，67.4(C-6)；rha：101.2(C-1)，70.8(C-2)，71.0(C-3)，72.3(C-4)，70.4 (C-5)，18.2(C-6)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[12]，故確定化合物8為蘆丁。

化合物9：淡黃色粉末，mp 310~312℃，TLC分析三氯化鐵顯藍色，鹽酸-鎂粉反應陽性。1H-NMR (600 MHz，DMSO)δ：6.19(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)， 6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，7.68(1H，d，J=2.4 Hz，H-2’)，7.54(1H，d，J=2.4，7.8 Hz，H-6’)，6.89(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5’)。13C-NMR(150 MHz，DMSO)δ：147.2 (C-2)，136.2(C-3)，176.3(C-4)，161.1(C-5)，98.6(C-6)，164.3(C-7)，93.8(C-8)，156.6(C-9)，103.4(C-10)，122.4(C-1’)，115.5(C-2’)，145.5(C-3’)，148.1(C-4’)，116.0(C-5’)，120.4(C-6’)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[13]，故確定化合物9為槲皮素。

化合物10：白色針狀結晶，mp 89~90℃。EIMS：m/z 508.5[M+]，480，452，438，424，410……71，57，43，29等一系列掉-CH2碎片峰和脂肪酸特征的碎片峰。以上數(shù)據(jù)與參考文獻比對一致[14]，故鑒定化合物10為正三十四烷酸。

4 結論

本文報道從糙葉五加葉中分離的10個化合物，包括4個脂肪酸類化合物、2個甾體類化合物和4個黃酮類化合物。文獻研究表明黃酮類化合物多有祛痰、止咳、平喘、改善血液循環(huán)、提高免疫力、降血脂、抗氧化、抗炎等藥理活性，在藥品、食品和保健品領域具有廣泛的應用價值。本課題組研究也發(fā)現(xiàn)該植物葉中黃酮類化合物含量豐富，有很好的抗氧化活性，且該資源湖南省較為豐富，目前尚未被有效利用，故有待進一步的研究和開發(fā)。

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（本文編輯 楊 瑛）

Study on chemical constituents from the leaves of Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms

LI Zhi1,ZOU Qinpeng2,LI Xiaojun1,YE Huixuan1,HUANG Weichao1,XIE Xia1,LIU Xiangqian1*
(1.School of Pharmacy,Hunan University of Chinese medicine,Changsha,Hunan 410208,China; 2.Changsha Broad-Ocean Bio-Science and Technique Co.Ltd.Changsha,Hunan 410205,China)

ObjectiveTo study the chemical constituents of leaves of Acanthopanax henryi based on antioxidant activities.MethodsThe compounds were isolated and obtained by macroporous resin, silica gel, MDS, Sephadex LH-20 column chromatography and recrystallization.The structures of these compounds were elucidated by means of physiochemical properties and a variety of spectroscopic analyses.Results Ten compounds were identified as stigmasterol(1),daucosterol(2),melissic acid(3),quercetin-3-O-β-glucoside(4),lacceroic acid(5), palmitic acid(6),kaempferol(7),rutin(8),quercetin(9)and n-tetra-triacontanoic acid(10).ConclusionThe results clarify the material basis of antioxidant activity of the leaves of Acanthopanax henryi (Oliv.)Harms,which provide reference for the future development of this plant.

Acanthopanax henryi;chemical constituents;structure identification

*劉向前，男，教授，碩士研究生導師，E-mail：lxq0001cn@163.com。

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.03.007.024.03

2013－10－27

湖南省自然科學基金重點資助項目(11JJ2042)；湖南省中藥學"十二五"重點學科建設項目；湖南中醫(yī)藥大學藥物分析學“十二五”校級重點學科建設項目。

李 芝，女，在讀碩士研究生，主要從事中藥及天然產(chǎn)物活性成分研究。