OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀性能驗證

馮洋，徐上放，魯靜

(上海市閔行區(qū)梅隴社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，上海 200237)

目前，全自動生化分析儀已經(jīng)成為臨床生化檢驗的常用儀器之一。儀器的性能優(yōu)劣直接關(guān)系到檢驗質(zhì)量，同時對儀器的性能進行驗證也是《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》[1]和《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[2]的要求。為了保證檢驗質(zhì)量，驗證儀器性能，本文選取了幾個常用生化項目對本實驗室OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀的性能進行驗證，以對其目前的性能有一個較為客觀的評價。

1 材料與方法

1.1 儀器 OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀。

1.2 試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品 試劑、校準(zhǔn)品為原裝配套產(chǎn)品；質(zhì)控品為美國BECKMAN-COULTER公司產(chǎn)品，質(zhì)控品批號分別為高值：M1303；低值：M1301。

1.3 樣本來源 BECKMAN-COULTER質(zhì)控血清；本院就診患者或正常體檢者無溶血、無黃疸、無脂血的新鮮血清；生理鹽水。

1.4 精密度驗證實驗 參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)EP5-A2[3]文件，選擇2個水平的質(zhì)控血清作為批內(nèi)和批間精密度的待測標(biāo)本。批內(nèi)精密度：在室內(nèi)質(zhì)控均在控的前提下，將兩個濃度水平的質(zhì)控品隨機插入病人樣本中進行檢測，一批內(nèi)連續(xù)測定20次。批間精密度測定：在室內(nèi)質(zhì)控均在控的前提下，每天將兩水平濃度的質(zhì)控品隨機插入病人樣本中檢測兩次，每次至少間隔兩小時，共測定20d。將以上檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，計算批內(nèi)、批間精密度和標(biāo)準(zhǔn)差。批內(nèi)精密度以小于CLIA’88允許誤差的1/4為標(biāo)準(zhǔn)；批間精密度以小于CLIA’88允許誤差的1/3為標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 正確度驗證實驗 參考CLSIEP15-A2[4]文件。對上海市臨床檢驗中心2013年第一次室間質(zhì)評發(fā)放的5個不同批號的室間質(zhì)控品進行檢測，計算檢測值和“靶值”的相對偏倚(SE%)。SE%≤1/2CLIA’88允許總誤差(TEa)為可接受。

1.6 線性范圍驗證實驗 參考CLSIEP6-A2[5]文件。以患者樣本為高值樣本(H)，生理鹽水為低值樣本(L)，其中高值檢測物質(zhì)含量盡量接近說明書線性范圍的上限，在沒有高濃度臨床樣本的情況下，通過在儀器上設(shè)置增加樣本量來完成。按1L、0.2H+0.8L、0.4H+0.6L、0.6H+0.4L、0.8H+0.2L、1H將H和L配制成6個系列濃度樣本，用OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀對系列血清進行檢測，在最短的時間內(nèi)每個標(biāo)本重復(fù)測定2次。記錄檢測結(jié)果，求出每個濃度2次測定的均值，記錄結(jié)果。觀察收集到的數(shù)據(jù)有無明顯的離群點，如有，應(yīng)查找原因。若有明了原因，糾正后修正數(shù)據(jù)，如果沒有明顯原因，則應(yīng)重新檢測全部數(shù)據(jù)。對測量數(shù)據(jù)作精密度檢驗：計算CVr，將CVr與設(shè)定的不精密度目標(biāo)進行比較，本文設(shè)定不精密度目標(biāo)為CLIA’88允許誤差的1/4。如果CVr超過設(shè)定目標(biāo)，則可能是精密度太低，表明測量數(shù)據(jù)的精確度不符合線性判斷的要求。反之，則表示符合。以理論值為橫坐標(biāo)，以實測值的均值為縱坐標(biāo)進行回歸分析，計算一階、二階、三階回歸方程及回歸標(biāo)準(zhǔn)誤。對二階(b2)三階(b2、b3)回歸系數(shù)作t檢驗，如果三個回歸系數(shù)與0比較均無顯著性差異，即差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，判斷為一級線性，否則判斷為統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的非線性。當(dāng)存在非線性時，根據(jù)回歸分析的標(biāo)準(zhǔn)誤大小，以最小者確定為最適多項式。當(dāng)數(shù)據(jù)線性模型為非一次多項式時，則需計算最適多項式在每個實測點上的線性偏差，與設(shè)定目標(biāo)比較，以評價每個點的非線性程度。

1.7 參考區(qū)間驗證實驗 參考CLSIC28-A2[6]文件。選擇2O名健康體檢合格者為第一組實驗對象，第一組實驗對象的測定值如果有95%以上在所選的參考值范圍內(nèi)，所選用的參考區(qū)間便可以接受。假如有2名或2名以上檢測結(jié)果在參考區(qū)間以外，則必須重新收集第2組數(shù)據(jù)重新檢測，第2組檢測數(shù)據(jù)不超過2名結(jié)果在參考區(qū)間以外，可以認(rèn)為驗證有效；假如第2組檢測數(shù)據(jù)超過2名結(jié)果在參考區(qū)間以外，先檢查檢測系統(tǒng)性能、檢測程序的正確，然后考慮該項目是否具有人群生物特性，做進一步調(diào)查，重新選擇合適的生物參考區(qū)間，必要時自建生物參考區(qū)間。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理 檢測所得的數(shù)據(jù)采用SPSS16.0和Excel 2003進行統(tǒng)計學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果 OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀對質(zhì)控血清各驗證項目進行測定，計算批內(nèi)、批間精密度結(jié)果顯示，各檢測項目的批內(nèi)精密度均小于CLIA’88允許誤差的1/4；批間精密度均小于CLIA’88允許誤差的1/3。精密度驗證結(jié)果見表1。

表1 批內(nèi)、批間精密度測定結(jié)果

2.2 正確度驗證結(jié)果 正確度驗證結(jié)果見表2，驗證結(jié)果顯示，各項目不論是平均偏移還是在各個不同的醫(yī)學(xué)決定水平上的偏移，偏倚結(jié)果均明顯低于上海市臨檢中心允許的偏倚范圍。

表2 正確度驗證結(jié)果(%)

2.3 線性范圍驗證結(jié)果 由于高值臨床樣本較難獲得，TP、GLU以及磷采用了將樣本量增加一倍的方法進行驗證。經(jīng)實驗，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的離群值，各項目的不精密度均符合線性評價要求。多項式回歸分析結(jié)果顯示(見表 3)，對二階(b2)、三階(b2、b3)回歸系數(shù)作t檢驗，三個回歸系數(shù)差異都無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，判斷各項目均為一級線性，可直接判斷呈線性。線性范圍驗證結(jié)果見表4。

2.4 參考區(qū)間驗證結(jié)果 AST、CHOL、P各有一名實驗對象的驗證結(jié)果超過現(xiàn)行參考區(qū)間上限，TP有一名實驗對象的檢測結(jié)果低于現(xiàn)行參考區(qū)間下限，其余各項目均在現(xiàn)行參考區(qū)間內(nèi)，因此可判定各項目的參考區(qū)間有效。結(jié)果見表5。

表3 線性范圍驗證多項式回歸分析結(jié)果

表4 線性范圍驗證結(jié)果

表5 生物參考區(qū)間驗證結(jié)果(n=20)

3 討論

精密度是指分析方法對同一樣本產(chǎn)生重復(fù)測量相同值的能力[7]，從測量誤差的角度來說，精密度所反映的是測得值的隨機誤差，通常用不精密度表示。因為臨床上在通常情況下僅對標(biāo)本作一次檢測就發(fā)出報告，因此檢測系統(tǒng)的精密度就顯得非常重要。實驗結(jié)果表明，批內(nèi)精密度和批間精密度分別小于1/4CLIA’88的允許范圍和1/3 CLIA’88的允許范圍。

正確度是指大批檢測結(jié)果的均值與真值的一致程度[8]。從測量誤差的角度來說，正確度所反映的是測得值的系統(tǒng)誤差，通常用偏移表示。根據(jù)上海市臨床檢驗中心室間質(zhì)評進行的正確度比對試驗顯示，正確度符合臨床要求。

線性范圍評價是觀察一種檢測方法或一個檢測系統(tǒng)的檢測范圍[7]。因此，線性范圍是評價試劑盒性能的重要指標(biāo)之一，在某種意義上，線性范圍越寬，該試劑盒就越適用于臨床[9]。但由于任何方法的線性范圍都是有限的，所以對一個檢驗項目而言，其線性范圍起碼應(yīng)該覆蓋本項目的醫(yī)學(xué)決定水平和常見疾病的檢測值。基于此，對線性范圍進行驗證是性能驗證的重要指標(biāo)，這將有助于在檢測系統(tǒng)應(yīng)用到臨床前，幫助工作人員發(fā)現(xiàn)線性問題，以使得檢測結(jié)果準(zhǔn)確和可靠。線性范圍驗證實驗結(jié)果顯示，各項目在驗證范圍內(nèi)均呈一級線性，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.975,b在0.97~1.030范圍內(nèi)，截距較小。說明各項目線性范圍驗證實驗結(jié)果好，標(biāo)本在本實驗的高、低值范圍內(nèi)的線性理想。

生物參考區(qū)間是指某項檢查結(jié)果在正常人群中的分布范圍，是解釋檢驗結(jié)果分析檢驗信息的一個基本尺度和依據(jù)，臨床實驗室無論開展什么項目都必須首先制定合理的生物參考區(qū)間。CLSI C28-A2文件認(rèn)為每個實驗室、不同檢測系統(tǒng)在檢測同一檢測項目時都建立各自的生物參考區(qū)間不現(xiàn)實，同時闡明可以使用試劑說明書和權(quán)威書刊推薦的生物參考區(qū)間或轉(zhuǎn)移其他實驗室的生物參考區(qū)間，并推薦一個簡便的驗證方法可以確定引用的生物參考區(qū)間是否合適。結(jié)果顯示，各驗證結(jié)果均符合實驗要求，因此認(rèn)為本實驗室所使用的參考區(qū)間符合臨床要求。

綜上所述，本實驗室OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀性能良好，可以滿足臨床的質(zhì)量要求。

[1]北京市醫(yī)療器械檢驗所.中國合格評定國家認(rèn)可委員會.GB／T22576-2008醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:1-36.

[2]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-CL02醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則[S].北京:中國合格評定國家認(rèn)可委員會,2008:1-36.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods[S].EP5-A2,CLSI,2004:1-28．

[4]Clinical and Laboratory Standards Institute.User demonstration of performance for prevision and accuracy[S].EP15-A2,CLSI,2004:1-15.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003:1-47.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].C28-A2,CLSI,2000:1-31.

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程 [M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:59-62.

[8]馮仁豐.臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M].第2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻出版社,2007:78.

[9]呂賽平,劉琴,鄒學(xué)森.應(yīng)用EP6-A2方法驗證血糖試劑盒的線性范圍[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(1):45-46.