羊水脫落細(xì)胞巴氏小體探究

陳劼

(漢川市仙女山醫(yī)院，湖北 漢川431600)

巴氏小體又稱(chēng)性染色體或X小體，是由雌性哺乳動(dòng)物體細(xì)胞中失活的X染色體在間期細(xì)胞核中呈異固縮狀態(tài)(染色質(zhì)高度螺旋化)，形成直徑約1μm，貼近于核膜邊緣的染色小體[1]。正常男女之間的X染色質(zhì)存在差異。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2013年5月至2013年6月本單位婦產(chǎn)科正常分娩及剖宮產(chǎn)孕婦羊水。

1.2 儀器與試劑 10ml玻璃試管，離心機(jī)，玻片，顯微鏡，30ml棕色滴瓶，固定液(95%甲醇：冰乙酸＝3：1)，石炭酸復(fù)紅染液(原液：堿性復(fù)紅3g+70%乙醇100m l待用。應(yīng)用液：取5%石炭酸18m l，原液2ml，冰乙酸2ml，甲醛2ml依次加入棕色滴瓶?jī)?nèi)混勻存放一星期后備用)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3 .1制片 以臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的婦產(chǎn)科醫(yī)生留取本院正常分娩及剖宮產(chǎn)孕婦羊水，每人10m l(要求無(wú)血液污染)，隨機(jī)留取40份樣本。羊水注入10ml玻璃試管，離心機(jī)2000r/min離心10 min，棄去上清液，保留沉淀細(xì)胞并加入固定液5ml固定30 min，再次同樣轉(zhuǎn)速離心10 min，棄上清液，用乳頭吸管吸取沉淀細(xì)胞滴于潔凈的玻片之上，制片1～3塊，室溫或37℃培養(yǎng)箱干燥。

1.3 .2染色 把石炭酸復(fù)紅應(yīng)用液滴于制備好的細(xì)胞膜片上，染色5～30min(視染液存放時(shí)間而定)，然后用95%酒精沖洗脫色至看不到蘭色染料溢出為止，自然干燥。

1.3 .3鏡檢 一張成功的高質(zhì)量脫落細(xì)胞染色片鏡下細(xì)胞質(zhì)幾乎不著色，高倍鏡下間期細(xì)胞核層次清晰，核膜輪廓完整，核紫紅色。可計(jì)數(shù)細(xì)胞：核相對(duì)較大，核質(zhì)呈均勻沙粒狀及網(wǎng)狀，無(wú)細(xì)菌雜質(zhì)覆蓋。含巴氏小體細(xì)胞的胞核內(nèi)有一個(gè)約1.2μm×0.7μm大小、常附著膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)呈深紫紅色卵圓形凸形或三角形的濃縮染色質(zhì)塊，鏡檢100個(gè)可計(jì)數(shù)細(xì)胞中碰到的巴氏小體細(xì)胞，算出百分率。

2 結(jié)果

男胎巴氏小體≤3%有22例，8%≤女胎≤36%有15例，3%＜巴氏小體＜8%之間有3例其中男胎1名，女胎2名，見(jiàn)表1。

表1 40例標(biāo)本中巴氏小體分布情況

3 討論

文獻(xiàn)記載口腔黏膜細(xì)胞中，巴氏小體百分率男性≤5%，18%≤女性≤42%[2]。本試驗(yàn)結(jié)果中男胎巴氏小體≤3%有22例，8%≤女胎≤36%有15例，女胎巴氏小體明顯低于文獻(xiàn)，從表中可以看出男女巴氏小體百分率仍呈現(xiàn)出明顯分界線，說(shuō)明羊水脫落細(xì)胞巴氏小體與胎兒性別密切相關(guān)[3]，準(zhǔn)確率達(dá)92.5%，只是與口腔黏膜細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)不一樣。尤其兩者中間出現(xiàn)的3%＜巴氏小體＜8%過(guò)渡值，其間男胎女胎均有，此區(qū)間不可以作為判斷的依據(jù)。出現(xiàn)以上差異，有可能與實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料不同有關(guān)，其次鏡檢者的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，對(duì)可數(shù)細(xì)胞的認(rèn)定不一樣，也可出現(xiàn)差異，口腔間期細(xì)胞較多，羊水脫落細(xì)胞退化程度較高，間期細(xì)胞相對(duì)較少，也是出現(xiàn)差異的因素。染色方法的不同也會(huì)有百分率的不同[4]，胎兒染色體本身有可能異常[5]以至于出現(xiàn)羊水脫落細(xì)胞巴氏小體男女百分率與口腔黏膜細(xì)胞巴氏小體百分率的不一致。此外可運(yùn)用孕婦血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行無(wú)創(chuàng)傷性產(chǎn)前基因診斷對(duì)此結(jié)論進(jìn)行認(rèn)證[6]。

[1]楊大祥.遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].第2版.北京:科學(xué)出版社,2010:113-119.

[2]陳凡國(guó),候丙凱.巴氏小體案例在遺傳學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用[J].遺傳,2012,34(4):503-508.

[3]熊立凡.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:284.

[4]李桂英.兩種X染色質(zhì)檢查方法的比較[J].現(xiàn)代醫(yī)生,2008,24(13):2248-2249.

[5]于松,金鎮(zhèn).胎兒染色體疾病及單基因疾病侵入性產(chǎn)前診斷[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2008,24(2):94-95.

[6]喻瓊,鄧志輝.利用孕婦血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行無(wú)創(chuàng)傷性產(chǎn)前基因診斷的研究進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(1):1-3.