陳劼
(漢川市仙女山醫(yī)院,湖北 漢川431600)
巴氏小體又稱(chēng)性染色體或X小體,是由雌性哺乳動(dòng)物體細(xì)胞中失活的X染色體在間期細(xì)胞核中呈異固縮狀態(tài)(染色質(zhì)高度螺旋化),形成直徑約1μm,貼近于核膜邊緣的染色小體[1]。正常男女之間的X染色質(zhì)存在差異。
1.1 標(biāo)本來(lái)源 2013年5月至2013年6月本單位婦產(chǎn)科正常分娩及剖宮產(chǎn)孕婦羊水。
1.2 儀器與試劑 10ml玻璃試管,離心機(jī),玻片,顯微鏡,30ml棕色滴瓶,固定液(95%甲醇:冰乙酸=3:1),石炭酸復(fù)紅染液(原液:堿性復(fù)紅3g+70%乙醇100m l待用。應(yīng)用液:取5%石炭酸18m l,原液2ml,冰乙酸2ml,甲醛2ml依次加入棕色滴瓶?jī)?nèi)混勻存放一星期后備用)。
1.3 檢測(cè)方法
1.3 .1制片 以臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的婦產(chǎn)科醫(yī)生留取本院正常分娩及剖宮產(chǎn)孕婦羊水,每人10m l(要求無(wú)血液污染),隨機(jī)留取40份樣本。羊水注入10ml玻璃試管,離心機(jī)2000r/min離心10 min,棄去上清液,保留沉淀細(xì)胞并加入固定液5ml固定30 min,再次同樣轉(zhuǎn)速離心10 min,棄上清液,用乳頭吸管吸取沉淀細(xì)胞滴于潔凈的玻片之上,制片1~3塊,室溫或37℃培養(yǎng)箱干燥。
1.3 .2染色 把石炭酸復(fù)紅應(yīng)用液滴于制備好的細(xì)胞膜片上,染色5~30min(視染液存放時(shí)間而定),然后用95%酒精沖洗脫色至看不到蘭色染料溢出為止,自然干燥。
1.3 .3鏡檢 一張成功的高質(zhì)量脫落細(xì)胞染色片鏡下細(xì)胞質(zhì)幾乎不著色,高倍鏡下間期細(xì)胞核層次清晰,核膜輪廓完整,核紫紅色。可計(jì)數(shù)細(xì)胞:核相對(duì)較大,核質(zhì)呈均勻沙粒狀及網(wǎng)狀,無(wú)細(xì)菌雜質(zhì)覆蓋。含巴氏小體細(xì)胞的胞核內(nèi)有一個(gè)約1.2μm×0.7μm大小、常附著膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)呈深紫紅色卵圓形凸形或三角形的濃縮染色質(zhì)塊,鏡檢100個(gè)可計(jì)數(shù)細(xì)胞中碰到的巴氏小體細(xì)胞,算出百分率。
男胎巴氏小體≤3%有22例,8%≤女胎≤36%有15例,3%<巴氏小體<8%之間有3例其中男胎1名,女胎2名,見(jiàn)表1。
表1 40例標(biāo)本中巴氏小體分布情況
文獻(xiàn)記載口腔黏膜細(xì)胞中,巴氏小體百分率男性≤5%,18%≤女性≤42%[2]。本試驗(yàn)結(jié)果中男胎巴氏小體≤3%有22例,8%≤女胎≤36%有15例,女胎巴氏小體明顯低于文獻(xiàn),從表中可以看出男女巴氏小體百分率仍呈現(xiàn)出明顯分界線,說(shuō)明羊水脫落細(xì)胞巴氏小體與胎兒性別密切相關(guān)[3],準(zhǔn)確率達(dá)92.5%,只是與口腔黏膜細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)不一樣。尤其兩者中間出現(xiàn)的3%<巴氏小體<8%過(guò)渡值,其間男胎女胎均有,此區(qū)間不可以作為判斷的依據(jù)。出現(xiàn)以上差異,有可能與實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料不同有關(guān),其次鏡檢者的實(shí)際經(jīng)驗(yàn),對(duì)可數(shù)細(xì)胞的認(rèn)定不一樣,也可出現(xiàn)差異,口腔間期細(xì)胞較多,羊水脫落細(xì)胞退化程度較高,間期細(xì)胞相對(duì)較少,也是出現(xiàn)差異的因素。染色方法的不同也會(huì)有百分率的不同[4],胎兒染色體本身有可能異常[5]以至于出現(xiàn)羊水脫落細(xì)胞巴氏小體男女百分率與口腔黏膜細(xì)胞巴氏小體百分率的不一致。此外可運(yùn)用孕婦血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行無(wú)創(chuàng)傷性產(chǎn)前基因診斷對(duì)此結(jié)論進(jìn)行認(rèn)證[6]。
[1]楊大祥.遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].第2版.北京:科學(xué)出版社,2010:113-119.
[2]陳凡國(guó),候丙凱.巴氏小體案例在遺傳學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用[J].遺傳,2012,34(4):503-508.
[3]熊立凡.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:284.
[4]李桂英.兩種X染色質(zhì)檢查方法的比較[J].現(xiàn)代醫(yī)生,2008,24(13):2248-2249.
[5]于松,金鎮(zhèn).胎兒染色體疾病及單基因疾病侵入性產(chǎn)前診斷[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2008,24(2):94-95.
[6]喻瓊,鄧志輝.利用孕婦血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行無(wú)創(chuàng)傷性產(chǎn)前基因診斷的研究進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(1):1-3.