胃癌中HSP70、NF-κB p65的表達(dá)及臨床意義

陳宏書，劉丹丹，侯 妍

(1.濰坊市益都中心醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 青州 262500； 2.青州市婦幼保健院婦產(chǎn)科，山東 青州 262500)

胃癌作為全球最常見的惡性腫瘤之一，其病死率在惡性腫瘤中居第二位。胃癌的發(fā)病由多基因參與、多因素影響、多步驟進(jìn)行，到目前為止其確切發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年來大量研究認(rèn)為，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖異?？赡茉谖赴┑陌l(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用[1]。熱激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)是一種普遍存在于生物細(xì)胞中的高度保守的蛋白質(zhì)，具有抗細(xì)胞凋亡和細(xì)胞保護(hù)等生物學(xué)功能，可能在胃癌細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中起某種作用[2]。核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)p65屬于真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子家族，可能與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)60例胃癌標(biāo)本中HSP70、NF-κBp65蛋白的表達(dá)情況，并分析兩者與胃癌病理特征的關(guān)系，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1材料 收集2011年8月至2012年5月益都中心醫(yī)院經(jīng)病理診斷確診為胃癌并行胃癌根治術(shù)的60例胃癌組織標(biāo)本。其中男44例、女16例，年齡41～79(59.5±3.21)歲。根據(jù)WHO分類標(biāo)準(zhǔn)，組織學(xué)分型為高分化腺癌17例、中分化腺癌22例、低分化腺癌21例。所有患者術(shù)前均未接受任何放化療及免疫治療。另取距胃癌病灶5 cm以上癌周正常的癌旁胃組織，經(jīng)病理診斷所取癌旁胃組織均未檢測(cè)到任何癌細(xì)胞。

1.2方法 切除標(biāo)本后將其置于10%甲醛中經(jīng)固定、包埋，制作成切片后，經(jīng)微波抗原修復(fù)，用免疫組織化學(xué)法監(jiān)測(cè)HSP70、NF-κBp65水平，鼠抗人HSP70抗體、鼠抗人NF-κBp65抗體均購于武漢博士德公司，二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒及二步法所用免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑均購自北京中杉生物科技有限公司，嚴(yán)格按照說明書操作進(jìn)行。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn) NF-κBp65陽性細(xì)胞結(jié)果為：胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒狀沉淀；HSP70陽性結(jié)果為：胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃染色或胞核出現(xiàn)伴有棕黃顆粒的細(xì)胞。光鏡下觀察，HSP70、NF-κBp65著色細(xì)胞>10%為陽性[3-4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HSP70、NF-κBp65在胃癌和癌旁胃組織中的表達(dá) 與癌旁胃組織相比，胃癌組織中NF-κBp65、HSP70陽性表達(dá)率均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

2.2HSP70、NF-κBp65在胃癌中的表達(dá)與胃癌病理的關(guān)系 組織分化程度越低，HSP70、NF-κBp65陽性表達(dá)率越高，且隨腫瘤的浸潤而增高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比無轉(zhuǎn)移者高(P<0.05)(表1)。

2.3胃癌組織中NF-κBp65與HSP70表達(dá)間的關(guān)系 胃癌組織中NF-κBp65和HSP70的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.271,P<0.05)(表2)。

3 討 論

目前研究認(rèn)為，細(xì)胞增殖與凋亡不平衡是胃癌形成的病理基礎(chǔ)，胃癌不僅僅是一種細(xì)胞增殖和分化異常的疾病,同時(shí)也與細(xì)胞凋亡的異常有密切的關(guān)系，大量凋亡相關(guān)因子能夠參與凋亡信號(hào)調(diào)控，加速胃癌的發(fā)生、發(fā)展[5]。其中，HSP70、NF-κBp65可能在細(xì)胞凋亡通路中起著重要的作用。

表1 NF-κBp65與HSP70的表達(dá)與胃癌病理的關(guān)系

表2 胃癌組織中NF-κBp65與HSP70表達(dá)間的關(guān)系

NF-κB是一類能夠特異地識(shí)別并結(jié)合DNA的蛋白二聚體轉(zhuǎn)錄因子，當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)胞內(nèi)、外的各種刺激時(shí)，NF-κB可發(fā)生磷酸化和泛素化后失活，并使NF-κB釋放、激活后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因上的順式調(diào)節(jié)元件κB位點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合，調(diào)控一系列抗凋亡基因和促生長基因的表達(dá)[6]。國內(nèi)外研究證實(shí)[7-8]，NF-κB信號(hào)通路是目前癌癥治療中很有研究價(jià)值的干預(yù)靶點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，胃癌組NF-κBp65的陽性率顯著高于癌旁組織，且其表達(dá)與胃癌浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有相關(guān)性，這與Sasaki等[9]研究結(jié)果大致相同，提示NF-κBp65可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，對(duì)胃癌的治療及預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。目前，對(duì)于NF-κB在胃癌中的作用機(jī)制尚不明確，可能與NF-κB參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控有關(guān)，NF-κB活化后可上調(diào)抑凋亡蛋白的表達(dá)進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡，并能通過抑制Jun氨基末端激酶的活性抑制凋亡。

HSP是一類高度保守的蛋白質(zhì)，由于其具有提高細(xì)胞對(duì)應(yīng)激耐受性等生物功能，故又稱為應(yīng)激蛋白。HSP70作為HSP家族中重要一員，在維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HSP70在某些腫瘤組織中的表達(dá)與在正常組織中的表達(dá)不同[10]。HSP70作為分子伴侶能夠提供結(jié)合蛋白，協(xié)同參與抗原加工、遞呈等過程，在機(jī)體的抗感染免疫、自身免疫，特別是在腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)，HSP70作為分子伴侶，還能夠與原癌基因和抑癌基因直接作用，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖。本研究證實(shí)，HSP70在胃癌和癌旁胃組織中均有表達(dá)，胃癌組織HSP70陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，且隨腫瘤浸潤程度加重，陽性率升高。這與吳永梅等[11]的研究結(jié)果一致，推測(cè)HSP70可能是作為一種重要的基因參與胃癌細(xì)胞增殖的過程，HSP70 可通過與多種原癌基因及抑癌基因相互作用，從而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖。此外，由于癌細(xì)胞較正常細(xì)胞中變性蛋白含量明顯增多，機(jī)體細(xì)胞需要合成更多HSP來應(yīng)對(duì)此種變化，故使HSP70呈現(xiàn)高表達(dá)。

本研究發(fā)現(xiàn)，HSP7及NF-κBp65在胃癌組織中呈明顯正相關(guān)(P<0.05)，提示HSP7與 NF-κBp65均參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程，而HSP70可能參與了NF-κBp65的激活物IKK復(fù)合體的組成，進(jìn)而引起NF-κBp65的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，兩者的關(guān)系還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，HSP7及NF-κBp65在胃癌組織中特異性高表達(dá)，可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，兩者相互協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞凋亡可能是其中機(jī)制之一。聯(lián)合檢測(cè)HSP7及NF-κBp65可能有助于評(píng)估胃癌的轉(zhuǎn)移及預(yù)后，對(duì)胃癌的臨床診治提供一定的依據(jù)。

[1] 陳美霓,許靜洪,趙菊梅.HSP抑制劑17-AAG對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞生長周期和凋亡的影響[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,33(2):271-275.

[2] McConnell KW,Fox AC,Clark AT,etal.The role of heat shock protein 70 in mediating age-dependent mortality in sepsis[J].J Immunol,2011,186(6):3718-3725.

[3] Schmid RM,Adler G.NF-kappaB/rel/IkappaB: implications in gastrointestinal diseases[J]. Gastroenterology,2000,118(6):1208-1228.

[4] Weinberger SR,Dalmasso EA,Fung ET.Current achievements using Protein Chip Array technology[J]. Curr Opin Chem Biol,2002,6(1):86-91.

[5] Cory S,Huanng DC,Adams JM.The Bel-2 family:roles in cell survival and oneogenesis[J].Oneogene,2003,22(53):8590-8607.

[6] 王韶華,崔東來,謝永強(qiáng)，等.環(huán)氧合酶-2,核因子-κB異常表達(dá)與胃癌關(guān)系的探討[J].北京醫(yī)學(xué), 2006，28(2)：84-86.

[7] Hillman GG,Kucuk O,Joiner MC,etal.Potentiation of radiation-induced cell killing by genistein in prostate cancer[J].J Nutr,2004,134(5):1258-1259.

[8] 張永勝,王志強(qiáng),賈淑.PCNA與NF-κBp65在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].醫(yī)學(xué)綜述,2012,18(7):1083-1085.

[9] Sasaki N，Morisaki T，Hashizume K，etal.Nuclear factor-kappa Bp65(RelA) translation factor is constitutively activated in human gastric carcinoma tissue[J].Clin Cancer Res,2001,7(12):4136-4142.

[10] Doubrovin M,Che JT,Serganova I,etal.Monitoring the induction of heat shock factor 1/heat shock protein 70 expression following 17-allylamino-demethoxygel danamycin treatment by positronemission tomography and optical reporter gene imaging[J].Mol Imaging, 2012,11(1):67-76.

[11] 吳永梅,居來提,謝會(huì)忠.慢性萎縮性胃炎熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)的相關(guān)研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2010,20(2):179-182,195.